脐带间充质干细胞外泌体与紫杉醇的复合物及其制备方法与应用技术

本发明专利技术提供了一种脐带间充质干细胞外泌体与紫杉醇的复合物及其制备方法与应用，复合物的制备方法包括以下步骤：1）提取脐带间充质干细胞外泌体；2）按1：1的质量比，将脐带间充质干细胞外泌体和紫杉醇混合得到混合物；3）采用冻融法对混合物进行冻融处理，冻融处理多次后离心处理，弃去上清液，得到脐带间充质干细胞外泌体与紫杉醇的复合物，该复合物还可以作为治疗肾癌的药物

【技术实现步骤摘要】
脐带间充质干细胞外泌体与紫杉醇的复合物及其制备方法与应用


[0001]本专利技术属于生物医学领域，尤其涉及一种脐带间充质干细胞外泌体与紫杉醇的复合物及其制备方法与应用
。

技术介绍

[0002]紫杉醇 （
PTX
）提取自短叶红豆杉的树皮内，是一种天然植物化学药物
。
紫杉醇是紫杉烷家族中的一员，是一种新型的抗微管药物，可选择性的破坏微管，进一步抑制有丝分裂，最终导致细胞死亡，从而起到抗肿瘤作用
。
紫杉醇对
P
‑
糖蛋白等外排蛋白的敏感性，长期使用易产生耐药现象，一定程度上限制了紫杉醇的临床应用
。
[0003]纳米药物递送系统提高紫杉醇生物利用度是抗肿瘤药物递送研究的热点，但是目前的药物递送系统的载体都有一定的局限性，仍不能有效提升紫杉醇的生物利用度，高效发挥紫杉醇的抗肿瘤作用
。
[0004]而外泌体是一种直径约为
30
‑
150 nm
的包含蛋白质
、DNA、RNA
等物质胞外囊泡，可由不同类型的细胞在体外分泌，例如免疫细胞
、
肿瘤细胞
、
干细胞等，也广泛分布于各种体液中，如唾液
、
腹水
、
尿液和血液等
。
外泌体作为药物递送载体时，具备特异性靶向
、
毒性小
、
低免疫原性
、
生物相容性好
、
具有高通透性和滞留效应
、
能透过血脑屏障的优势，可将紫杉醇递送到病理部位
。
[0005]目前，间充质干细胞外泌体用于紫杉醇递送还没有明确的技术规范，且还未见其治疗肾癌方面的应用
。

技术实现思路

[0006]本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种脐带间充质干细胞外泌体与紫杉醇的复合物及其制备方法与应用，旨在使用一种脐带间充质干细胞外泌体包裹紫杉醇递送到病理部位，解决紫杉醇的生物利用度低导致不能有效抑制肿瘤细胞的问题
。
[0007]为解决上述技术问题，本专利技术是这样实现的，一种脐带间充质干细胞外泌体与紫杉醇的复合物，所述脐带间充质干细胞外泌体负载紫杉醇
。
[0008]进一步地，所述复合物的载药率为
60
‑
80%。
[0009]本专利技术还提供了一种制备脐带间充质干细胞外泌体与紫杉醇的复合物的方法，包括以下步骤：1）提取脐带间充质干细胞外泌体；2）按1：1的质量比，将所述脐带间充质干细胞外泌体和紫杉醇混合得到混合物；3）采用冻融法对所述混合物进行冻融处理以得到所述复合物
。
[0010]进一步地，在进行所述步骤3）之前，还向步骤2）中得到的所述混合物中加入浓度为
0.1%~5% w/v
的乙酸
、0.2%~5% w/v
的赖氨酸和
0.2%~2% w/v
的果糖
。
[0011]进一步地，所述步骤3）中按照以下方式进行冻融处理：
所述混合物在
‑
60℃
或以下的温度急速冷冻后，然后置于室温解冻至液体状态
。
[0012]进一步地，所述冻融处理重复进行多次
。
[0013]进一步地，所述冻融处理完成后，将所述混合物置于室温，平衡
10
‑
60min。
[0014]进一步地，所述室温平衡完成后，将所述混合物进行离心处理
。
[0015]进一步地，按照以下步骤提取脐带间充质干细胞外泌体：
1.1
）将脐带间充质干细胞培养液进行预处理；
1.2
）将所述预处理培养液用外泌体提取试剂盒进行分离和提取，得到所述脐带间充质干细胞外泌体
。
[0016]本专利技术还提供了脐带间充质干细胞外泌体与紫杉醇的复合物在制备用于治疗肾癌的药物中的用途
。
[0017]本专利技术中一种脐带间充质干细胞外泌体与紫杉醇的复合物及其制备方法与应用与现有技术相比，有益效果在于：本专利技术提供了一种脐带间充质干细胞外泌体与紫杉醇的复合物及其制备方法与应用，所述复合物的制备方法包括以下步骤：1）提取脐带间充质干细胞外泌体；2）按1：1的质量比，将所述脐带间充质干细胞外泌体和紫杉醇混合得到混合物；3）采用冻融法对所述混合物进行冻融处理，冻融处理多次后离心处理，弃去上清液，得到所述复合物，所述复合物还可以作为治疗肾癌的药物
。
本专利技术中，紫杉醇在脐带间充质干细胞外泌体上的负载效率高，负载形成的复合物生物相容性好，能够使其作为药物靶向递送到病理部位，避免触发免疫原性反应，减少毒副作用，对肾癌细胞的生长有很好的抑制作用
。
附图说明
[0018]图
1A
是本专利技术实施例1中脐带间充质干细胞外泌体的表面形貌图；图
1B
是本专利技术实施例1中脐带间充质干细胞外泌体的粒径分布检测图；图
1C
是本专利技术实施例1中脐带间充质干细胞外泌体的标志性蛋白检测图；图2是本专利技术实施例3中紫杉醇标准品
HPLC
检测图；图
3A
是本专利技术实施例3中对照组上清液中的紫杉醇
HPLC
检测图；图
3B
是本专利技术实施例3中实验组上清液中的紫杉醇
HPLC
检测图；图
3C
是本专利技术实施例3中脐带间充质干细胞外泌体对紫杉醇的包裹效率对比图；图4是本专利技术实施例4中
24h
和
48h
下脐带间充质干细胞外泌体与紫杉醇的复合物对肾癌细胞
786
‑
O
增殖的抑制效果图
。
具体实施方式
[0019]为了使本专利技术的目的
、
技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本专利技术进行进一步详细说明
。
应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术
。
[0020]实施例1：脐带间充质干细胞外泌体的提取与鉴定对脐带间充质干细胞培养液进行预处理：收集人脐带间充质干细胞培养液，置于冰上，在
2000g
离心力下离心处理
10min
，除去残留细胞，收集上清液
。
将上清液在
10000g
离心力下离心处理
10min
，除去细胞碎片，再次收集上清液，得到预处理培养液
。
[0021]采用外泌体提取试剂盒（深圳市拾方杰科技有限公司，货号：
S909
）分离和提取预处理培养液中的脐带间充质干细胞外泌体，具体操作步骤如下：
a.
在预处理培养液中加入体积比为
V
样
：
V<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种脐带间充质干细胞外泌体与紫杉醇的复合物，其特征在于，所述脐带间充质干细胞外泌体负载紫杉醇
。2.
根据权利要求1所述的复合物，其特征在于，所述复合物的载药率为
60
‑
80%。3.
一种制备根据权利要求1所述的复合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）提取脐带间充质干细胞外泌体；2）按1：1的质量比，将所述脐带间充质干细胞外泌体和紫杉醇混合得到混合物；3）采用冻融法对所述混合物进行冻融处理以得到所述复合物
。4.
根据权利要求3所述的方法，其特征在于，在进行所述步骤3）之前，还向步骤2）中得到的所述混合物中加入浓度为
0.1%~5% w/v
的乙酸
、0.2%~5% w/v
的赖氨酸和
0.2%~2% w/v
的果糖
。5.
根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤3）中按照以下方式进行...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗敏虹，刘好，童嘉南，刘春晓，
申请(专利权)人：中山大学附属第八医院深圳福田，
类型：发明
国别省市：