一种杆状病毒滴度测定方法技术

本发明专利技术涉及病毒检测技术领域，特别是涉及一种杆状病毒滴度测定方法

【技术实现步骤摘要】
一种杆状病毒滴度测定方法、试剂盒


[0001]本专利技术涉及病毒检测
，特别是涉及一种杆状病毒滴度测定方法
、
试剂盒
。

技术介绍

[0002]杆状病毒表达系统（
Baculovirus expression vector system
，
BEVS
）是一种真核表达系统，该系统表达的蛋白在生物活性
、
翻译后修饰
、
结构和免疫活性等方面与天然蛋白质相似，应用于疫苗
、
抗体
、
生物农药和基因治疗中
。
在大规模表达蛋白之前，需要进行大量优化试验以确保最合适的表达条件
。BEVS
表达外源蛋白过程中需要对各种工艺参数进行优化，如细胞接种密度
、
接毒时间
、
接毒量等，其中感染复数（
multiplicity of infection
，
MOI
）是优化表达的重耍的参数之一
。
为获得合适的
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种杆状病毒滴度测定方法，其特征在于，包括以下步骤：细胞培养：选取细胞进行稀释，稀释细胞后将细胞液放入多孔细胞培养板，然后进行细胞培养，得到培养后的细胞；稀释病毒液：按不同倍数稀释杆状病毒液，得到稀释后的病毒液；病毒感染细胞：在所述多孔细胞培养板中，吸弃细胞上清，将所述稀释后的病毒液感染细胞，病毒感染细胞后，得到感染过病毒的多孔细胞培养板；成膜孵育：吸弃所述感染过病毒的多孔细胞培养板中的病毒上清液，再加入成膜孵育溶剂，孵育，得到孵育后的多孔细胞培养板；固定：在所述孵育后的多孔细胞培养板中加入固定液固定；固定后，吸弃上清，洗板，得到洗板后的多孔细胞培养板；封闭：将封闭液加入所述洗板后的多孔细胞培养板进行封闭，弃上清，洗板，得到加过封闭液的多孔细胞培养板；所述封闭液包括复配血清，所述复配血清包括
BSA、PBST
；加入一抗：弃去所述加过封闭液的多孔细胞培养板的上清，加入一抗，孵育，弃上清，洗板，得到加入一抗的多孔细胞培养板；加入二抗：弃去所述加入一抗的多孔细胞培养板的上清，加入二抗，孵育，弃上清，洗板，得到加入二抗的多孔细胞培养板；检测：弃去所述加入二抗的多孔细胞培养板的上清，加入显色液，避光放置，计数，观察蓝斑，计算所述加入二抗的多孔细胞培养板每孔中的蓝斑数，计算病毒滴度
。2.
根据权利要求1所述的杆状病毒滴度测定方法，其特征在于，在细胞培养中，选取细胞代次
3~18
代的细胞进行稀释
。3.
根据权利要求1所述的杆状病毒滴度测定方法，其特征在于，在细胞培养中，将细胞液放入多孔细胞培养板中，所述多孔细胞培养板的细胞密度为
3.25
×
104~13
×
104个
/
孔；在稀释病毒液中，用培养基梯度稀释病毒液，稀释倍数包括
104、105、106倍；洗板的清洗剂包括
PBST
，该
PBST
包括加钙离子和镁离子的
PBST、
不加钙离子和镁离子的
PBST
中的至少一种
。4.
根据权利要求1所述的杆状病毒滴度测定方法，其特征在于，在病毒感染细胞中，病毒加入到细胞中后，
27~30℃
孵育
1~5h
，得到感染过病毒的细胞板
。5.
根据权利要求1所述的杆状病毒滴度测定方法，其特征在于，在成膜孵育中，所述成膜孵育溶剂包括甲基纤维素，孵育时间为
24~48h
；所述甲基纤维素的加入量为
50~150
μ
L
，所述甲基纤维素的浓度为
0.7~...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦贞琴，李雯，石博，董露，周耿，叶涛，周明，
申请(专利权)人：简达生物医药南京有限公司，
类型：发明
国别省市：