油菜未成熟小孢子胚直接萌发成植株的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种未成熟小孢子胚直接萌发成植株的制备方法，首先是小孢子的制备，选取小孢子的新鲜花蕾，消毒，无菌水洗去消毒液，在培养基中挤压花蕾．过筛、离心收集小孢子；其次是小孢子的诱导，用培养基调小孢子密度，恒温培养；第三是小孢子胚的选择，选择一定长度未分化完全的胚：第四是小孢子胚的萌发，将未分化完全的胚的根插入固体培养基中，光照培养一定时间后形成植株。本方法操作简单，萌发频率高，可广泛应用于植物育种和科学研究。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物组织培养领域，具体地说，本专利技术涉及一种未成熟小孢子胚直接萌发成植株的制备方法。
技术介绍
植物小孢子又叫幼嫩花粉是一种单倍性，单细胞的群体。在体外通过组织培养可诱导小孢子脱分化，启动胚性分裂形成胚。目前，小孢子(花粉)胚胎发生已在25个科，50个属，近200个种中取得了成功(Ferrie AMR，Palmer CE，KellerWA.，Haploid embryogenesis.InThorpe TA(ed)In vitro embryogenesis.In plants.Kluwer Academic Publishers，Dordrecht.，1995.309-344.)。与其它体外胚胎发生体系相比，由小孢子发育而来的胚状体具有个体形态更为一致，发生量大，结构完整等优点，而且其具单倍体的遗传背景，经自发或人工加倍后，即可获得纯合的二倍体，因而在无性系快速繁殖，植物遗传工程和品种改良等方面的应用价值都受到高度重视(Ragharan V.，Embryogenenic Development of Pollen Grains.InRagharan V(ed)Molec本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种未成熟小孢子胚直接萌发成植株的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：Ａ、小孢子的制备：选取小孢子处于单核晚期的新鲜花蕾，消毒，无菌水洗去消毒液，在Ｂ５培养基中轻轻挤压花蕾，使小孢子游离至培养基中，过筛除花蕾组织残渣，离心收集小孢子 ；Ｂ、小孢子胚的诱导：用ＮＬＮ－１３培养基调小孢子密度至１－２×１０↑［５］／ｍＬ，分装小孢子于培养皿中，３２℃恒温暗培养１４天，移至２５℃，２－１０μｍｏｌ.ｓ↑［－１］.ｍ↑［－２］，培养８－１１天，再用ＮＬＮ－０培养基稀释至３００ －４００胚状体／３．５ｃｍ培养皿，弱光培养１０－１６天，形成未成熟小孢子胚；Ｃ、小孢子胚的选择：用于萌发的小孢子...

【技术特征摘要】
1.一种未成熟小孢子胚直接萌发成植株的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤A、小孢子的制备选取小孢子处于单核晚期的新鲜花蕾，消毒，无菌水洗去消毒液，在B5培养基中轻轻挤压花蕾，使小孢子游离至培养基中，过筛除花蕾组织残渣，离心收集小孢子；B、小孢子胚的诱导用NLN-13培养基调小孢子密度至1-2×105/mL，分装小孢子于培养皿中，32℃恒温暗培养14天，移至25℃，2-10μmol·s-1·m-2，培养8-11天，再用NLN-0培养基稀释至300-400胚状体/3.5cm培养皿，弱光培养10-16天，形成未成熟小孢子胚；C、小孢子胚的选择用于萌发的小孢子胚是刚生根，或还未生根，下胚轴较短，长度小于5mm未分化完全的胚；D、小孢子胚的萌发将未分化完全的胚的根插入含附加氯化钙和硝酸铵的MS固体培养基中，在28-35℃恒温，在光照为2-10μmol·s-1·m-2时，培养12-16天形成植...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙蒙祥，田辉，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：83[中国|武汉]