一种鉴别白花竹叶兰的引物对制造技术

本发明专利技术提供了一种鉴别白花竹叶兰的引物对

【技术实现步骤摘要】
一种鉴别白花竹叶兰的引物对、试剂盒和鉴别方法


[0001]本专利技术涉及基因工程
，特别是涉及一种鉴别白花竹叶兰的引物对
、
试剂盒和鉴别方法
。

技术介绍

[0002]竹叶兰是兰科竹叶兰属多年生的草本植物，分布于我国的福建
、
广东
、
广西
、
贵州
、
海南
、
湖南
、
四川
、
台湾
、
西藏
、
云南，以及印度
、
柬埔寨
、
缅甸
、
印度尼西亚
、
马来西亚
、
新加坡等南亚和东南亚国家
。
竹叶兰有较高的药用价值，是傣族“雅解片”的主要药材来源，具有清热解毒
、
消炎利尿
、
祛风活络的功能；同时竹叶兰也具有较高的观赏价值，其植株清新雅致，花朵秀丽，全年可多次开花，花期长，适应性强，在马来西亚
、
新加坡等地被大力开发成为一种新花卉作物广泛用于园林绿化
。
因竹叶兰地生
、
喜阳的特性，可直接种植于露天的地上，近年来我国也开始将其作为地被植物可应用于高档的园林景观，种植于公园
、
庭院
、
别墅小区及兰花专类观赏园，或作为盆栽可置于案头
、
阳台
、
庭院等
。
[0003]花色是竹叶兰的重要观赏性状，直接影响其商业价值
。
目前竹叶兰有紫色
、
淡紫色
、
粉红
、
淡粉和白色等多种花色，市场上的种苗多以淡紫色和粉色为主，白色花较少
。
前人对竹叶兰的研究主要集中于其药用成分与药理活性方面，也克隆了调控竹叶兰开花的关键
FT
基因，而有关竹叶兰花色则研究甚少，也未见与竹叶兰花色关联的分子标记的报道
。

技术实现思路

[0004]为了解决上述问题，本专利技术提供了一种鉴别白花竹叶兰的引物对
、
试剂盒和鉴别方法，采用本专利技术提供的引物对能够鉴别出白花竹叶兰
。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0006]本专利技术提供了一种鉴别白花竹叶兰的引物对，所述引物对的上游引物的核苷酸序列如
SEQ ID No.1
所示；
[0007]所述引物对的下游引物的核苷酸序列如
SEQ ID No.2
所示
。
[0008]本专利技术还提供了一种鉴别白花竹叶兰的方法，包括以下步骤：
[0009]1)
提取竹叶兰的基因组
DNA
，以所述基因组
DNA
为模板，经上述技术方案所述的引物对进行
PCR
扩增，得到扩增产物；
[0010]2)
将所述步骤
1)
得到的扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，当缺失
393bp
的条带，且出现
500bp
和
950bp
两条带时，所述竹叶兰为白花竹叶兰
。
[0011]优选的，所述步骤
1)PCR
扩增的程序为：
95℃3min
；
95℃15s
，
55℃15s
，
72℃15s
，
35
个循环；
72℃5min。
[0012]优选的，所述步骤
1)PCR
扩增的体系每
20
μ
l
为：基因组
DNA2
μ
l、2
×
Rapid Taq Master Mix 10
μ
l、
浓度为
10
μ
M
的上游引物1μ
l、
浓度为
10
μ
M
的下游引物1μ
l
和
ddH2O 6
μ
l。
[0013]优选的，所述步骤
2)
琼脂糖凝胶中琼脂糖的质量百分含量为1％
。
[0014]本专利技术还提供了一种鉴别白花竹叶兰的试剂盒，其特征在于，包括上述技术方案
所述的引物对
。
[0015]本专利技术的有益效果为：
[0016]本专利技术通过对竹叶兰
DFR
基因
CDS
序列第
330bp
后的序列设计引物，并对基因组
DNA
进行检测，开发了竹叶兰花色关联的分子标记，可用于白花竹叶兰的鉴定，并成功将白花竹叶兰与其他粉色系和紫色系的竹叶兰区分开，为竹叶兰的分子标记辅助选择提供了一个新的引物对
。
附图说明
[0017]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍
。
[0018]图1为紫花竹叶兰
(
上排
)
和白花竹叶兰
(
下排
)
花朵的3个发育时期图，标尺为1厘米；
[0019]图2紫花竹叶兰和白花竹叶兰
DFR
基因的
RT
‑
qPCR
验证结果；
[0020]图3三种不同质量百分含量的琼脂糖凝胶电泳结果图，其中
(a)1
％琼脂糖凝胶，
(b)1.5
％琼脂糖凝胶
,(c)1.8
％琼脂糖凝胶；
[0021]图4引物对
16
份不同花色竹叶兰的鉴定结果图
。
具体实施方式
[0022]本专利技术提供了一种鉴别白花竹叶兰的引物对，所述引物对的上游引物的核苷酸序列如
SEQ ID No.1
所示；所述引物对的下游引物的核苷酸序列如
SEQ IDNo.2
所示，具体如下：
[0023]SEQ ID No.1
：5’‑
TACGTGGCTGTATTGGGGTG
‑3’
；
[0024]SEQ ID No.2
：5’‑
TGATCCCTCACAACGCAAATTC
‑3’
。
[0025]在本专利技术中，所述引物对的设计思路为：
[0026]紫花竹叶兰和白花竹叶兰的
DFR
基因
CDS
序列如下：
[0027]紫花竹叶兰
DFR
基因的
CDS
序列
SEQ ID No.3
：
[0028]ATGAAAGAAGAAAAAATGGCG本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种鉴别白花竹叶兰的引物对，其特征在于，所述引物对的上游引物的核苷酸序列如
SEQ ID No.1
所示；所述引物对的下游引物的核苷酸序列如
SEQ ID No.2
所示
。2.
一种鉴别白花竹叶兰的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)
提取竹叶兰的基因组
DNA
，以所述基因组
DNA
为模板，经权利要求1所述的引物对进行
PCR
扩增，得到扩增产物；
2)
将所述步骤
1)
得到的扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，当缺失
393bp
的条带，且出现
500bp
和
950bp
两条带时，所述竹叶兰为白花竹叶兰
。3.
根据权利要求2所述的鉴别方法，其特征在于，所述步骤
1)PCR
扩增的程序为：
95℃3min
；
95℃15s
，
55℃15...

【专利技术属性】
技术研发人员：李杰，朱根发，杨凤玺，高洁，谢琦，魏永路，金建鹏，陆楚桥，朱炜，孙艳梅，
申请(专利权)人：广东省农业科学院环境园艺研究所，
类型：发明
国别省市：