一种刺激细胞同时产生干扰素制造技术

本发明专利技术公开了一种刺激细胞同时产生干扰素

【技术实现步骤摘要】
一种刺激细胞同时产生干扰素、干扰素刺激基因产物和炎症因子的多肽、重组多肽及其用途


[0001]本专利技术属于生物医药领域，涉及一种刺激细胞同时产生干扰素
、
干扰素刺激基因产物和炎症因子的多肽
、
重组多肽及其用途
。

技术介绍

[0002]干扰素基因刺激因子
(stimulator of interferon genes
，
STING)
作为重要的免疫相关基因，被激活后可以诱导干扰素和炎症因子产生
。STING
是一个内质网蛋白，由
N
端的4次跨膜区和
C
端的环二苷酸结合区构成
。
在结合了环二核苷酸后，
STING
多聚化并被转运出内质网，到达高尔基体
、
内体
、
最终在溶酶体内降解
。
在此过程中
STING
招募
TBK1
，磷酸化下游的转录因子
IRF3
和
NF
‑
κ
B
，最终激活的
IRF3
和
NF
‑
κ
B
进入细胞核，激活下游控制的干扰素
、
多种干扰素刺激基因
(interferon stimulated genes,ISGs)
和多种炎症因子的表达
。
产生的干扰素
、
多种干扰素刺激基因产物和多种炎症因子具有抗肿瘤
、
抗病菌
、
抗病毒和疫苗佐剂等作用
。
在
STING
从内质网到溶酶体的运输过程，
STING
的活性在任何一步均有可能被调控
。
例如，抑制
STING
从内质网运出会抑制
STING
的激活；抑制
STING
从高尔基体运出会激活其活性
。
但是
STING
在高尔基体后的活性调控并不是很清楚
。
而且现在也没有针对
STING
在高尔基体后活性调控的小分子或小肽
。
如果研发出这种小分子或小肽，便可以利用这种小分子或小肽同时调控干扰素
、
多种干扰素刺激基因产物和多种炎症因子的表达来达到抗肿瘤
、
抗病菌
、
抗病毒和疫苗佐剂等作用
。
[0003]已有针对激活
STING
的小分子化合物，例如2′3′‑
cGAMP
和
DMXAA
，在临床前实验
。2
′3′‑
cGAMP
作为
STING
的内源配体，可以激活
STING
的活性和下游的细胞因子表达
。
可以通过激活和招募
CD8
+
T
细胞抑制肿瘤生长，也可以与免疫监察点抑制剂联用产生更好的抗肿瘤效果
(
临床试验识别号：
NCT03010176,NCT03172936)。
然而对于
STING
激活剂2′3′‑
cGAMP
，由于其容易被血清中细胞外核苷二磷酸焦磷酸酶
/
磷二酯酶
1(Ectonucleotide Pyrophosphatase/Phosphodiesterase 1,ENPP1)
降解，导致其效果可能不够理想
。
[0004]DMXAA
通过激活鼠源
STING
和破坏肿瘤血管结构诱导肿瘤相关巨噬细胞的激活并释放趋化因子达到抗肿瘤的目的
。
然而，
DMXAA
只能结合鼠的
STING
而不能结合人的
STING
，导致其在人体内没有作用
。
[0005]现相关疾病的临床治疗使用单独生产的干扰素
、
干扰素刺激基因产物或炎症因子，例如单独使用用于恶性肿瘤：包括毛细胞白血病
、
慢性白血病
、
非霍奇金淋巴瘤
、
骨髓瘤
、
膀胱癌
、
卵巢癌晚期转移性肾癌及胰腺恶性内分泌肿瘤
、
黑色素瘤和
Kaposi
肉瘤等
。
用于病毒性皮肤病：如尖锐湿疣
、
单纯疱疹
、
生殖器疱疹及带状疱疹等
。
用于某些炎症性皮肤病：如白塞病
、
遗传过敏性皮炎
、
瘢痕疙瘩
、
硬皮病
、
环状肉芽肿等
。
使用原核系统表达的干扰素或炎症因子产量高成本低，但因缺少翻译后修饰，导致作用效果较差且长期使用容易产生对应的抗体，降低作用效果
。
使用哺乳动物细胞生产的干扰素或炎症因子具有转录后修饰，效果较好，但成本较高
。
[0006]此外，哺乳动物细胞生产的干扰素
、
干扰素刺激基因产物或炎症因子一般为分别生产，在治疗疾病时可能需要根据实际需要，进行比例调配，但对于单独的病人个体很难确认最适比例，也无法产生干扰素或炎症因子以外未知的有利因素的影响
。
[0007]引用文献
1、2
和3公开了
STING
由转运必需内体分选复合物
(endosomal sorting complex required for transport,ESCRT)
驱动的基于泛素化的微自噬降解
。
敲除
ESCRT
的组分
Tsg101
和
Vps4
，导致
STING
囊泡在胞质溶胶中积聚，产生持续的
I
型干扰素反应
。
然而引用文献
1、2
和3并未公开与申请人所描述的机制来阻断
ESCRT
对
STING
的作用以及方法和试剂，尤其是小分子或小肽等试剂，以调控
STING
的活性
。
[0008]引用文献
[0009]引用文献1：
Kuchitsu Y,Mukai K,Uematsu R,et al.STING signalling is terminated through ESCRT
‑
dependent microautophagy of vesicles originating from recycling endosomes.Nat Cell Biol.2023
；
2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种多肽，其中，所述多肽来自人干扰素基因刺激因子
(STING)
蛋白或其同源蛋白，所述多肽能够：
(a)
抑制
STING
与
ESCRT
的相互作用，优选抑制
STING
与
ESCRT
的亚基
TSG101
的相互作用；
(b)
抑制
STING
的降解；和
/
或，
(c)
促进细胞产生干扰素
、
干扰素刺激基因产物和炎症因子；以及，优选地，
(d)
所述多肽选自如下
(i)
‑
(iv)
组成的组中的任一项：
(i)
以
SEQ ID NO:1
所示的氨基酸序列；
(ii)
与
SEQ ID NO:1
所示的氨基酸序列具有至少
70
％
、72
％
、75
％
、77
％
、80
％
、82
％
、85
％
、87
％
、90
％
、92
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％或
99
％同一性的氨基酸序列，并且其保留以
SEQ ID NO:1
所示的氨基酸序列的活性；
(iii)
在
SEQ ID NO:1
所示的氨基酸序列中添加
、
取代
、
缺失或插入1个或多个氨基酸残基的氨基酸序列，并且其保留以
SEQ ID NO:1
所示的氨基酸序列的活性；或者，
(iv)
由核苷酸序列编码的氨基酸序列，所述核苷酸序列与编码以
SEQ ID NO:1
所示的氨基酸序列的多核苷酸序列在严格条件下杂交，并且所述氨基酸序列保留以
SEQ ID NO:1
所示的氨基酸序列的活性，所述严格条件是中等严格条件，中
‑
高严格条件，高严格条件或非常高严格条件
。2.
根据权利要求1所述的多肽，其中，人干扰素基因刺激因子蛋白的同源蛋白包括来自小鼠
(Mus musculus)、
大鼠
(Rattus norvegicus)、
鸡
(Gallus gallus)、
黑猩猩
(Pan troglodytes)、
家牛
(Bos taurus)、
家猪
(Sus scrofa)、
星型海葵
(Starlet sea anemone)、
恒河猴
(Macaca mulatta)、
家兔
(Oryctolagus cuniculus)、
热带爪蟾
(Xenopus tropicalis)、
黄毛狐蝠
(Eidolon helvum)、
斑马鱼
(Danio rerio)
或绵羊
(Ovis aries)
的
STING
蛋白；任选地，来自人干扰素基因刺激因子蛋白的同源蛋白的多肽选自如下
(v)
‑
(viii)
组成的组中的任一项：
(v)
以
SEQ ID NO:2
～
14
中任一项所示的氨基酸序列；
(vi)
与
SEQ ID NO:2
～
14
中任一项所示的氨基酸序列具有至少
70
％
、72
％
、75
％
、77
％
、80
％
、82
％
、85
％
、87
％
、90
％
、92
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％或
99
％同一性的氨基酸序列，并且其保留以
SEQ ID NO:2
～
14
中任一项所示的氨基酸序列的活性；
(vii)
在
SEQ ID NO:2
～
14
中任一项所示的氨基酸序列中添加
、
取代
、
缺失或插入1个或多个氨基酸残基的氨基酸序列，并且其保留以
SEQ ID NO:2
～
14
中任一项所示的氨基酸序列的活性；或者，
(viii)
由核苷酸序列编码的氨基酸序列，所述核苷酸序列与编码以
SEQ ID NO:2
～
14
中任一项所示的氨基酸序列的多核苷酸序列在严格条件下杂交，并且所述氨基酸序列保留以
SEQ ID NO:2
～
14
中任一项所示的氨基酸序列的活性，所述严格条件是中等严格条件，中
‑
高严格条件，高严格条件...

【专利技术属性】
技术研发人员：荣岳光，赵远，
申请(专利权)人：华中科技大学，
类型：发明
国别省市：