一种闭管可视化检测副溶血弧菌的试剂盒和方法技术

本发明专利技术公开了一种闭管可视化检测副溶血弧菌

【技术实现步骤摘要】
一种闭管可视化检测副溶血弧菌的试剂盒和方法


[0001]本专利技术属于生物与化学领域，具体涉及一种闭管可视化检测副溶血弧菌
Vibrio parahaemolyticus
的试剂盒和方法
。

技术介绍

[0002]随着社会和工业化发展的不断发展和影响，人民的生活水平显著提高，人们生命安全问题也备受关注，食品安全问题成为当下最具话题度的社会问题
。
食品安全不仅关系到消费者的切身利益和身体健康，而且同社会经济发展
、
国家繁荣昌盛息息相关
。
近年来，食源性疾病事件的发生频率不断提高，食源性疾病也已经成为当今世界上最广泛的公共卫生问题之一
。
随着快递外卖平台的不断发展，食品可以作为载体在运输过程中传播，各类由食源性致病菌等所产生的食品质量问题也不断产生，增加某些食源性疾病爆发的危险性
。
副溶血弧菌是革兰氏阴性的菌棒状
、
弧状
、
卵圆状无芽孢菌，属于弧菌属，是一种常见的病原菌
。
是一种嗜盐本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种闭管可视化检测副溶血弧菌
Vibrio parahaemolyticus
的试剂盒，其特征在于包括位于检测管内的混合反应体系和位于检测管管盖上的巯基
DNA
修饰后的金纳米颗粒混合液；其中，所述检测管内混合反应体系包括相互混合的
RPA
扩增体系和保护
DNA
修饰后的
CRISPR/Cas12a
反应体系；所述
RPA
扩增体系用于对副溶血弧菌
Vibrio parahaemolyticus
基因组中的特异性基因片段进行
RPA
扩增，包括引物
RPA
‑
F、
引物
RPA
‑
R、Primer
‑
Free
‑
R buffer、DNA
模板
、RNAase
‑
free water
和醋酸镁；所述
RPA
‑
F
的序列如
SEQ ID No.1
所示，
RPA
‑
R
的序列如
SEQ ID No.2
所示；所述
CRISPR/Cas12a
反应体系包括：
Cas12a、DNA
‑
crRNA
复合体
、Linker
‑
ssDNA、buffer C、ddH2O
；其中所述
DNA
‑
crRNA
复合体由保护
DNA
链与
crRNA
配对形成，能够在
37℃
下解链并缓慢释放
crRNA
与副溶血弧菌
Vibrio parahaemolyticus
中的特异性基因片段上的目标
DNA
进行结合；所述保护
DNA
链的序列如
SEQ ID No.3
所示，且保护
DNA
设计茎环结构，保护
DNA
前
16
个碱基序列与
crRNA
特异性序列的
16
个碱基进行碱基互补配对，后8个碱基在解链后与保护
DNA
链前8个碱基能够互补形成茎环结构；当体系在
37℃
下反应一定时间后，
DNA
‑
crRNA
复合体会逐渐发生解链释放
crRNA
，
DNA
链自己形成茎环结构并保证防止在解链后再与
crRNA
互补形成复合体；所述检测管盖上巯基
DNA
修饰后的金纳米颗粒包括
Au NPs
‑
DNA1、Au NPs
‑
DNA2
和饱和氯化钠溶液；其中
Au NPs
‑
DNA1
和
Au NPs
‑
DNA2
为将两条不同序列巯基
DNA
修饰到金纳米颗粒形成，其中，两条巯基
DNA
与混合反应体系中的
Linker
‑
ssDNA
互补；所述管盖上的巯基
DNA
修饰后的金纳米颗粒混合液设置在管盖的下表面，能够在检测管封闭的情况下加入到所述混合反应体系内
。2.
根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述管内混合反应体系与所述巯基
DNA
修饰后的金纳米颗粒混合液体积相等；所述管内混合反应体系总体积为
10
μ
L
，
RPA
扩增体系为
2.5
μ
L
，保护
DNA
修饰后的
CRISPR/Cas12a
反应体系为
7.5
μ
L
；各组分的浓度如下：
2.5
μ
L
的
RPA
扩增体系中，引物
RPA
‑
F、
引物
RPA
‑
R
分别为
4.8
μ
M
，醋酸镁为
14mM、Primer
‑
Free
‑
R...

【专利技术属性】
技术研发人员：申屠旭萍，宋阳，徐亦雯，俞晓平，王建萍，
申请(专利权)人：中国计量大学，
类型：发明
国别省市：