一种罗非鱼健康养殖方法技术

本发明专利技术公开了一种罗非鱼健康养殖新方法

【技术实现步骤摘要】
一种罗非鱼健康养殖方法


：
[0001]本专利技术属于水产养殖领域，具体涉及一种罗非鱼健康养殖新方法
。

技术介绍

：
[0002]近年来，随着集约化养殖模式的快速发展和对鱼产量的不断追求，因饲料品质差和水质恶化，导致重要经济鱼类普遍出现疾病频发
、
严重脂肪肝
、
饲料利用率降低等问题，给鱼类养殖业造成巨大经济损失；同时，在追求利润驱使下，激素产品的过量和违规使用导致养殖水体的严重激素残留问题，对人体健康和生态环境安全造成了严重威胁
。
[0003][0004]罗非鱼
(Oreochromis niloticus)
原产于非洲，又名非洲鲫鱼，属鲈形目
、
鲡鱼科
、
罗非鱼属，因其具有生长快
、
食性杂
、
养殖水域广
、
繁殖力强
、
无肌间刺等特点，养殖遍布
140
余个国家和地区，是全球第二大养殖鱼类
。
但随着近年鱼类养殖集约化模式的快速发展，罗非鱼疾病爆发的问题亦愈发严重，其中以无乳链球菌为病原菌的致死率最高，严重影响了罗非鱼养殖产业的可持续发展
。
近年来，水产养殖中主要依赖抗生素类药物进行无乳链球菌病的防治，但抗生素的长期使用或滥用会导致耐药性细菌增加，其残留还威胁食品和环境安全
,
并产生严重的社会问题
。
目前，微生物对宿主及其水体环境表现出许多有益特性，作为生长促进剂
、
免疫刺激剂和疾病预防被广泛用于水产养殖中
。
益生菌可对水产养殖产生多种影响，包括免疫调节
、
营养和环境调节等，进而在预防疾病方面表现出巨大的竞争优势
。
虽然无具体证据表明益生菌比免疫刺激剂或疫苗的效果更好，但其对宿主及环境的有益影响明确，益生菌仍是用于控制疾病及环境调节的最有希望的选择之一
。

技术实现思路

：
[0005]本专利技术的目的是提供一种罗非鱼健康养殖方法
。
[0006]本专利技术的罗非鱼健康养殖方法，是用拮抗罗非鱼链球菌的酵母菌饲喂罗非鱼
。
[0007]所述拮抗罗非鱼链球菌的酵母菌是通过以下方法制备的：
[0008]将罗非鱼抗菌肽
TP3
和
TP4
导入到酵母菌中并进行表达，获得拮抗罗非鱼链球菌的酵母菌；
[0009]所述的罗非鱼抗菌肽
TP3
和
TP4
的核苷酸序列分别如
SEQ ID NO.1
或2所示
。
[0010]>TP3(SEQ ID NO.1)
[0011]atgaagtgcaccatgctgttccttgtgctgtcgatggttgtcctcatggctgaacctggggaggcctttattcaccatattatcggtggactta ttagtgttggcaaacatatccacggcctcatccacggacatgggaatgtcaaacagcaacaacagcagcaagagcagctaaaccaacgctcatttaaccgagaacagttcaaacgggaaagggctgcttttaac
[0012]>TP4(SEQ ID NO.2)
[0013]atgaagtgcactatactgttccttgtgctgtcgatggtcgtcctcatggctgaacctggggaaggctttatttcccatattatcggtggactgtttagtgctggcaaggctatccatcgcctcatacgacgtagacgaagaggg
gaactgcagcttgagcaggaactgcagcaacaactggagcaactggaaaaacttcagcaacaggaaaagcttagccaacgctttaaccgagagcagctcaaacgagagagagttgcttttaac
[0014]优选，是将罗非鱼抗菌肽
TP3
和
TP4
的编码基因导入质粒
pGAPZ
α
A
中，分别获得转基因质粒
pGAPZ
α
A
‑
tp3
和
pGAPZ
α
A
‑
tp4
并将其转入到了野生型酵母菌
X33
中，依据同源重组原理其成功整合到酵母的基因组启动子
PGAP
位点下游，获得拮抗罗非鱼链球菌的酵母菌
。
[0015]本专利技术采用以下技术方案：
[0016]a、
酵母表达抗菌肽质粒载体的构建
[0017]酵母同源重组质粒
pGAPZ
α
A
‑
tp3.3
和
pGAPZ
α
A
‑
tp4.3
的构建过程总共分为四步：
[0018]第一步，扩增抗菌肽
tp3
和
tp4
的全长序列，通过无缝克隆的方法将其分别克隆到质粒
pGAPZ
α
A
上，构建质粒
pGAPZ
α
A
‑
tp3.0
和
pGAPZ
α
A
‑
tp4.0
；所用无缝克隆引物序列分别为：
[0019]扩增载体
pGAPZ
α
A
的引物序列为：
[0020]pGAP
α
A_fwd
：5’‑
GGCCGTCTCGGATCGGTAC
‑3’
；
[0021]pGAP
α
A_rev
：5’‑
GCTGGGCCACGTGAATTC
‑3’
；
[0022]扩增抗菌肽
tp3
和
tp4
全长序列所用的无缝克隆引物分别为：
[0023]tp3_fwd
：5’‑
ctgaattcacgtggcccagcgccaccATGAAGTGCACCATGCTG
‑3’
；
[0024]tp3_rev
：5’‑
ggtaccgatccgagacggccGTTAAAAGCAGCCCTTTC
‑3’
；
[0025]tp4_fwd
：5’‑
ctgaattcacgtggcccagcgccaccATGAAGTGCACTATACTGTTC
‑3’
；
[0026]tp4_rev
：5’‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种罗非鱼健康养殖方法，其特征在于，是用拮抗罗非鱼链球菌的酵母菌饲喂罗非鱼
。2.
根据权利要求1所述的养殖方法，其特征在于，所述拮抗罗非鱼链球菌的酵母菌是通过以下方法制备的：将罗非鱼抗菌肽
TP3
和
TP4
导入到酵母菌中并进行表达，获得拮抗罗非鱼链球菌的酵母菌；所述的罗非鱼抗菌肽
TP3
和
TP4
的核苷酸序列分别如
SEQ ID NO.1
或2所示
。3.
根据权利要求2所述的养殖方法，其特征在于，是将罗非鱼抗菌肽
TP3
和
TP4
的编码基因导入质粒
pGAPZ
α
A
中，分别获得转基因质粒
pGAPZ
α
A
‑
tp3
和
pGAPZ
α
A
‑
tp4
并将其转入到了野生型酵母菌
X33
中，依据同源重组原理其成功整合到酵母的基因组启动子
PGAP
位点下游，获得拮抗罗非鱼链球菌的酵母菌
。4.
根据权利要求3所述的养殖方法，其特征在于，所述的拮抗罗非鱼链球菌的酵母菌的制备方法为：
a、
酵母表达抗菌肽质粒载体的构建酵母同源重组质粒
pGAPZ
α
A
‑
tp3.3
和
pGAPZ
α
A
‑
tp4.3
的构建过程总共分为四步：第一步，扩增抗菌肽
tp3
和
tp4
的全长序列，通过无缝克隆的方法将其分别克隆到质粒
pGAPZ
α
A
上，构建质粒
pGAPZ
α
A
‑
tp3.0
和
pGAPZ
α
A
‑
tp4.0
；所用无缝克隆引物序列分别为：扩增载体
pGAPZ
α
A
的引物序列为：
pGAP
α
A_fwd
：5’‑
GGCCGTCTCGGATCGGTAC
‑3’
；
pGAP
α
A_rev
：5’‑
GCTGGGCCACGTGAATTC
‑3’
；扩增抗菌肽
tp3
和
tp4
全长序列所用的无缝克隆引物分别为：
tp3_fwd
：5’‑
ctgaattcacgtggcccagcgccaccATGAAGTGCACCATGCTG
‑3’
；
tp3_rev
：5’‑
ggtaccgatccgagacggccGTTAAAAGCAGCCCTTTC
‑3’
；
tp4_fwd
：5’‑
ctgaattcacgtggcccagcgccaccATGAAGTGCACTATACTGTTC
‑3’
；
tp4_rev
：5’‑
ggtaccgatccgagacggccGTTAAAAGCAACTCTCTCTC
‑3’
；第二步，去掉质粒
pGAPZ
α
A
‑
tp3.0
和
pGAPZ
α
A
‑
tp4.0
中的编码抗菌肽
C
端功能域的
DNA
序列，构建质粒
pGAPZ
α
A
‑
tp3.1
和
pGAPZ
α
A
‑
tp4.1
，所用引物分别为：
dtp3_fwd
：5’‑
acggcctcatccacggacatgaacaaaaactcatctcagaagagg
‑3；
dtp3_rev
：5’‑
atgtccgtggatgaggcc
‑3’
；
dtp4_fwd
：5’‑
tcatacgacgtagacgaagagaacaaaaactcatctcagaag
‑3；
dtp4_rev
：5’‑
tcttcgtctacgtcgtatg
‑3’
；第三步，去掉质粒
pGAPZ
α
A
‑
tp3.1
和
pGAPZ
α
A
‑
tp4.1
中的编码抗菌肽的信号肽的
DNA
序列，构建质粒
pGAPZ
α
A
‑
tp3.2
和
pGAPZ
α
A
‑
tp4.2
，所用引物分别为：
3.1_fwd
：5’‑
agaaaagagaggctgaagcttttattcaccatattatcggtg
‑3；
3.1_rev
：5’‑
agcttcagcctctcttttc
...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔宗斌，葛国栋，陆星，
申请(专利权)人：广东省科学院微生物研究所广东省微生物分析检测中心，
类型：发明
国别省市：