【技术实现步骤摘要】
一种针对细菌的杀菌剂活性定量检测方法
[0001]本专利技术属于植物保护
,具体涉及一种针对细菌的杀菌剂活性定量检测方法
。
技术介绍
[0002]细菌为广泛存在于自然界的原核生物,造成多种农作物病害,降低农产品产量和质量,如大白菜软腐病
、
黄瓜细菌性角斑病
、
核果类果树叶片穿孔病
、
多种农作物的青枯病等等
。
为了防治这些病害需要进行杀菌剂筛选,以保证所用杀菌剂有较好的防治效果,室内活性测定是筛选的第一步,但由于细菌不形成丝状菌落的特殊性,目前针对细菌的杀菌剂活性定量检测方法较少
。
[0003]现有的一些方法已用于细菌的筛选,但可能存在着过程复杂
、
需要仪器设备较多的缺点,甚至有的方法原理错误
。
如中华人民共和国农业行业标准“NY/T 1156.16
‑
2008
杀菌剂室内生物测定试验准则杀菌剂第
16
部分:抑制细菌生长量试验浑浊度法”,需要分光光度计或者浊度计等检测设备,需要设备较多,一般实验室的条件不能满足
。
标准“GB/T 38483
‑
2020
微生物源抗生素类次生代谢产物抗细菌活性测定抑菌圈法”,提供了一种针对细菌的代谢产物活性的检测方法,检测代谢产物对细菌的抑制作用,核心内容是把靶标细菌加入培养基中,倒皿,把代谢产物加到培养基平板中央的牛津环中,培养后测量抑菌圈大小,然后以不加代谢 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.
一种针对细菌的杀菌剂活性定量检测方法,其特征在于,该方法包括以下步骤:
S1、
试验平板制备
S101、
预加菌液倾注平板法:将细菌制成菌悬液,浓度为1×
104~1×
106CFU/mL
,在
150mL
培养基加入1~
5mL
菌悬液,振荡混匀,制成含菌培养基;然后倒皿,制成含菌平板,平板厚度为3~
4mm
;
S102、
涂布平板法:先制备培养基平板,然后将细菌制成菌悬液,浓度为1×
104~1×
106CFU/mL
,取菌悬液滴加在培养基平板上,涂匀,或者用接种环蘸取菌悬液在培养基平板划密集的折线,制成带菌平板;
S2、
不同浓度的杀菌剂药液制备:将杀菌剂用溶剂溶解,然后再用不同量的灭菌水稀释,得到不同浓度的杀菌剂药液;所述杀菌剂药液浓度包含0μ
g/mL
;
S3、
对照液制备:在与杀菌剂药液对应的溶剂或灭菌水中加入染色剂,得到对照液;
S4、
杀菌剂活性测定:
S401、
对于
S101
得到的含菌平板,采用打储药孔法,该方法为:用直径为4~
5mm
的打孔器在含菌平板中央打孔,孔深至培养皿底,除去孔中培养基,做成储药孔;取
S2
得到的不同浓度的杀菌剂药液分别加入到含菌平板中央的储药孔中,以加满储药孔为准,作为药剂处理组;取等量
S3
得到的对照液加入另一储药孔中作为空白对照组;培养皿正置,放于
25
~
30℃
培养箱培养
24
~
48h
后,分别测定0μ
g/mL
的抑菌圈直径
D0、
药剂处理组抑菌圈直径
D
和空白对照组颜色圈直径
D
c
,每个处理设5皿,重复3次;
S402、
对于
S102
得到的带菌平板,采用滤纸片法,该方法为:在带菌平板中央放置直径为6~
7mm
的滤纸片,用移液器吸取
S2
得到的不同浓度的杀菌剂药液2~3μ
L
分别滴加在带菌平板的滤纸片上,浸润滤纸片,作为药剂处理组;取相同量
S3
得到的对照液滴加在另一组带菌平板中央的滤纸片上,作为空白对照组;培养皿正置,放于
25
【专利技术属性】
技术研发人员:杨军玉,刘淑香,胡同乐,王树桐,邬和平,李学会,张秋立,
申请(专利权)人:保定市清苑区农业农村局保定市清苑区乡村振兴局,
类型:发明
国别省市:
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