一种千里光活性成分抗菌作用评价方法技术

本申请公开了中药材药物研究技术领域的一种千里光活性成分抗菌作用评价方法，

【技术实现步骤摘要】
一种千里光活性成分抗菌作用评价方法


[0001]本专利技术涉及中药材药物研究
，具体涉及一种千里光活性成分抗菌作用评价方法
。

技术介绍

[0002]千里光
(Senecio scandens Buch.
‑
Ham.ex D.Don)
系菊科植物，主要分布于中国东部
、
中南部和西南部，是我国有多种药用价值的传统中草药，其功效主要表现为风热感冒
、
目赤肿痛
、
泄泻痢疾
、
皮肤湿疹疮疖等
。
现代药理学研究表明，千里光在抗菌
、
抗钩端螺旋体
、
抗滴虫
、
抗氧化以及自由基清除等方面功效显著
。
[0003]近年来，千里光在抗菌方面的作用受到广泛的关注
。
研究表明千里光具有广谱的抗菌作用，对金黄色葡萄球菌
、
大肠杆菌
、
肺炎链球菌
、
铜绿假单胞菌等革兰氏阳性菌和阴性菌菌具有较好的抑制作用，在抑制细菌成膜性上也表现出较好的效果
。
千里光中含有丰富的次生代谢产物，在前人的报道研究中发现千里光发挥抗菌作用可能与其含有的黄酮类
、
生物碱等化合物有关
。
遗传学分析发现千里光的抗菌性状为多基因控制的数量性状，意味着其抗菌效用由不同的抗菌成分构成
。
目前千里光中化合物已鉴定出
180r/>多种化合物，但目前仍不清楚其抗菌性的组成以及抗菌性与其成分间的相关性，严重的阻碍其在抗菌开发方面利用
。

技术实现思路

[0004]本专利技术意在提供一种千里光活性成分抗菌作用评价方法，以解决现有千里光抗菌成分多样，无统一评价方法的技术问题
。
[0005]为了解决上述问题，本专利技术提供如下技术方案：
[0006]一种千里光活性成分抗菌作用评价方法，包括以下步骤：
[0007]S1、
提取千里光醇提液：采集新鲜千里光茎
、
叶制作浸膏，浸膏用乙醇洗脱定容得到千里光醇提液；
[0008]S2、
提取千里光黄酮液：将浸膏使用乙醇洗脱并定容，加入石油醚和乙酸乙酯后超声萃取，将得到萃取液进行浓缩，再使用乙醇洗脱进行定容得到千里光黄酮液；
[0009]S3、
标准品溶液制备：千里光黄酮液使用甲醇进行稀释，离心处理后取上清液，再通过有机滤过膜过滤后得到色谱甲醇液；芦丁标准品加入色谱甲醇液进行溶解，再使用甲醇定容至浓度为1～
1.5mg/mL
的芦丁标准液，取芦丁标准液用甲醇稀释
10
～
20
倍得到标准品溶液；
[0010]S4、
样品含量计算：上机检测标准品溶液，按照公式计算样品含量
:
样品含量＝
(
样品峰面积
/
标准品峰面积
*
标准品浓度
)/
料液比；
[0011]S5、
活性成分抗菌评价：取细菌菌液加入千里光醇提液进行培养，通过
R
软件
Pearson
相关系数分析板块，确定千里光的抗菌成分与抗菌间的关系评价抗菌性，以筛选到与对应菌株具有显著关联性的抗菌成分作为指标，检测待测材料的抗菌性
。
[0012]本专利技术的工作原理及有益效果：本方案采用千里光活性成分抗菌作用评价的方法，将千里光中的黄酮类药用成分含量进行检测，并将黄酮提取液的抗菌作用与具体的菌种相结合，筛选与菌种类抑制能力具有显著关联性的成分，克服当前对千里光的抗菌成分组成多样性，无统一的抗菌活性评价等的技术问题
。
[0013]采用上述方法，为千里光的工业化生产和质量控制奠定实验依据和理论基础；同时，该方法通过测定与特定菌株抗菌活性显著相关成分的含量简化了千里光抗菌性分析的步骤，具有省时
、
省力和节约成本等有点
。
[0014]进一步，所述
S1
制作浸膏包括以下步骤：步骤一
、
采集新鲜千里光茎与叶，去离子水冲洗干净，置于
54℃
～
58℃
恒温干燥箱内烘干直至恒重；步骤二
、
将干燥枝条剪成1～
2mm
段，打粉器打磨成粉，过
40mm
筛，称取干粉5～
10g
加入
100
～
150mL60
％乙醇浸泡1小时以上，再煮沸1～2小时，离心管分装离心
10
～
15min
，转速
8000rpm/min
，取上清液，用旋转蒸发仪减压浓缩
(55℃
，
30r/min)
浓缩成浸膏
。
[0015]进一步，所述
S2
中将浸膏用
60
％乙醇洗脱并定容到5～
10mL
，加入等量石油醚
(5
～
10mL)、
两倍乙酸乙酯
(10
～
20mL)
，超声萃取6次
(
温度：
99℃
，时间
60min)
，离心
10
～
20
分钟，转速
4000
～
6000r/min
，取上清，重复6次后，将得到的萃取液减压浓缩
(
温度
55℃
，转速
30r/min)
，然后
60
％乙醇洗脱，定容到2～
5mL。
[0016]进一步，所述
S3
中千里光黄酮液和芦丁标准液均使用甲醇稀释
10
倍
。
[0017]进一步，所述过滤采用
0.22um
有机滤过膜过滤
。
[0018]进一步，所述细菌菌液为
OD600
＝
0.6。
[0019]进一步，所述
S1
制作浸膏包括以下步骤：步骤一
、
采集新鲜千里光茎与叶，去离子水冲洗干净，置于
54℃
～
58℃
恒温干燥箱内烘干直至恒重；步骤二
、
将干燥枝条剪成1～
2mm
段，打粉器打磨成粉，过
40mm
筛，称取干粉
5g
加入
100mL60
％乙醇浸泡1小时以上，再煮沸1～2小时，离心管分装离心
10min
，转速
8000rpm/min
，取上清液，用旋转蒸发仪减压浓缩
(55℃
，
30r/min)<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种千里光活性成分抗菌作用评价方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、
提取千里光醇提液：采集新鲜千里光茎
、
叶制作浸膏，浸膏用乙醇洗脱定容得到千里光醇提液；
S2、
提取千里光黄酮液：将浸膏使用乙醇洗脱并定容，加入石油醚和乙酸乙酯后超声萃取，将得到萃取液进行浓缩，再使用乙醇洗脱进行定容得到千里光黄酮液；
S3、
标准品溶液制备：千里光黄酮液使用甲醇进行稀释，离心处理后取上清液，再通过有机滤过膜过滤后得到色谱甲醇液；芦丁标准品加入色谱甲醇液进行溶解，再使用甲醇定容至浓度为1～
1.5mg/mL
的芦丁标准液，取芦丁标准液用甲醇稀释
10
～
20
倍得到标准品溶液；
S4、
样品含量计算：上机检测标准品溶液，按照公式计算样品含量
:
样品含量＝
(
样品峰面积
/
标准品峰面积
*
标准品浓度
)/
料液比；
S5、
活性成分抗菌评价：取细菌菌液加入千里光醇提液进行培养，通过
R
软件
Pearson
相关系数分析板块，确定千里光的抗菌成分与抗菌间的关系评价抗菌性，以筛选到与对应菌株具有显著关联性的抗菌成分作为指标，检测待测材料的抗菌性
。2.
根据权利要求1所述的千里光活性成分抗菌作用评价方法，其特征在于，所述
S1
制作浸膏包括以下步骤：步骤一
、
采集新鲜千里光茎与叶，去离子水冲洗干净，置于
54℃
～
58℃
恒温干燥箱内烘干直至恒重；步骤二
、
将干燥枝条剪成1～
2mm
段，打粉器打磨成粉，过
40mm
筛，称取干粉5～
10g
加入
100
～
150mL60
％乙醇浸泡1小时以上，再煮沸1～2小时，离心管分装离心
10
～
15min
，转速
8000rpm/min
，取上清液，用旋转蒸发仪减压浓缩
(55℃
，
30r/min)
浓缩成浸膏
。3.
根据权利要求2所述的千里光活性成分抗菌作用评价方法，其特征在于，所述
S2
中将浸膏用
60
％乙醇洗脱并定容到5～
10mL
，加入等量石油醚
(5
～
10mL)、
两倍乙酸乙酯
(10
～
20mL)
，超声萃取6次

【专利技术属性】
技术研发人员：李林，左青青，钱刚，李肇高，王雅轩，陈娜娜，马茂蓉，
申请(专利权)人：遵义医科大学，
类型：发明
国别省市：