一种痤疮丙酸杆菌发酵上清液制造技术

针对痤疮丙酸杆菌代谢产物对皮肤细胞的生长与代谢等影响还未有深入研究的现状，本发明专利技术提供了一种痤疮丙酸杆菌发酵上清液

【技术实现步骤摘要】
一种痤疮丙酸杆菌发酵上清液、制备方法及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，涉及一种痤疮丙酸杆菌发酵上清液
、
制备方法及其应用
。

技术介绍

[0002]痤疮丙酸杆菌是丙酸杆菌属的一个种，为革兰氏阳性杆菌
。
其为人体皮肤表面的正常菌群，主要存在于毛囊皮脂腺内
。
在正常的生理状态下，痤疮丙酸杆菌是人体共生菌
。
在皮脂腺内的痤疮丙酸杆菌代谢油脂产生短链脂肪酸维持皮肤
pH
值，也可以产生细菌素诱导细胞产生抗菌肽抑制病原菌在皮肤上的定殖
。
在研究特应性皮炎患者皮损区的皮肤菌群中发现，此类患者存在痤疮丙酸杆菌丰度下降，表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌丰度增加的现象，因此可以推测痤疮丙酸杆菌在维持皮肤菌群稳态方面发挥重要作用
。
[0003]痤疮丙酸杆菌也是一种条件致病菌，在其寄居的部位环境发生改变
、
集体免疫功能下降或者其他条件改变时，其会引起皮肤炎症或者感染
。
比如，当皮脂腺分泌增加，通常会引起痤疮丙酸杆菌大量繁殖并引起皮肤炎症反应，引发痤疮使皮肤产生丘疹
、
脓包等
。
研究发现，痤疮丙酸杆菌具有不同分型，并不是所有的痤疮丙酸杆菌具有致痘性，像
RT2
和
RT6
在内的
II
型菌株通常存在于健康皮肤中；而对于
IA
‑2支
(
主要为r/>RT4
和
RT5)、IB
‑1支
(RT8)
和
IC
支
(RT5)
与痤疮有密切联系
。
[0004]健康皮肤来源的痤疮丙酸杆菌在正常生理状态下对皮肤具有有益的效果，目前对于其有益效果的研究在皮肤酸性条件以及维护皮肤菌群平衡等方面进行了研究
。
申请人之前自健康皮肤上分离到具有良好抗氧化效果的痤疮丙酸杆菌
(Cutibacterium acnes)CCSM0331
，该菌株已于
2022
年6月1日保藏于中国典型培养物保藏中心（简称
CCTCC
，中国武汉，武汉大学），其保藏编号为 CCTCC No
：
M 2022781。
经过试验证明，该痤疮丙酸杆菌 CCSM0331 具有良好的抗氧化效果，所述痤疮丙酸杆菌具有高 DPPH 自由基清除率和降低维生素 K3 诱导人角质形成细胞产生的 ROS。
其中，所述痤疮丙酸杆菌发酵上清 DPPH 自由基清除率为 78.83
ꢀ±ꢀ
1.8%
，
ROS 清除率为 17.9%
，在对抗自由基对皮肤损伤，在抗氧化
、
抗衰老护肤品开发方面具有良好的应用前景（申请号：
2022107046250
，专利技术名称：一株具有良好抗氧化效果的痤疮丙酸杆菌及其应用）
。
关于痤疮丙酸杆菌代谢产物对皮肤细胞的生长与代谢等影响还未有深入研究
。

技术实现思路

[0005]针对上述问题，本专利技术提供了一种痤疮丙酸杆菌发酵上清液
、
制备方法及其在皮肤修复
、
抗皱方面的应用
。
本专利技术中的痤疮丙酸杆菌分离自年轻健康女性，该菌株在
TSB
液体培养基中生长迅速，且在
TSB
培养基中添加益生元成分也能保持正常生长状态，且两者发酵上清液均能够促进角质形成细胞的增殖，修护皮肤表皮屏障；同时促进皮肤成纤维细胞的增殖，促进
I
型胶原蛋白的表达，在离体皮肤上能够促进弹性纤维的表达，能够提升皮肤弹性，具有显著的抗皱效果
。
通过体外单一培养富集痤疮丙酸杆菌发酵上清液，可作为具有
修复
、
抗皱功效的原料，在护肤领域具有广阔的应用前景
。
[0006]本专利技术的技术方案是：一种痤疮丙酸杆菌发酵上清液的制备方法，其特征是，将痤疮丙酸杆菌
(Cutibacterium acnes)CCSM0331
在添加益生元的
TSB
液体培养基（胰酪大豆胨液体培养基）中
30~40℃
厌氧发酵培养，将发酵液离心，获得痤疮丙酸杆菌发酵上清液
。
[0007]具体包括以下步骤：（1）将痤疮丙酸杆菌菌株
CCSM0331
挑取单菌落接种于
TSB
液体培养基中，
30~40℃
恒温厌氧培养
48~72 h
，测定发酵液的
OD
600
值，调整菌体
OD
600
值为
0.5~0.7
，作为种子液；（2）将种子液以体积比
1~3%
的接种量接种于添加益生元的
TSB
液体培养基中，
30~40℃
恒温厌氧培养
48~72 h
，得到痤疮丙酸杆菌的发酵液；（3）将上述发酵液离心，获得的离心上清液即为痤疮丙酸杆菌的发酵上清液
。
[0008]上述益生元包含但不限于多元醇
、
油脂类
、
多糖类
、
寡糖类和蛋白类等物质，优选为多元醇
、
油脂类及寡糖类物质
。
[0009]上述益生元的添加量为
TSB
液体培养基质量的
2.5~3.0%。
[0010]本专利技术还提供了上述制备的痤疮丙酸杆菌发酵上清液在制备皮肤修复和抗皱的护肤品方面的应用
。
上述皮肤修复指基于皮肤角质形成细胞的促进增殖作用；抗皱作用包括基于成纤维细胞的促增殖作用
、
促进
I
型胶原蛋白表达及增强弹性纤维的表达
。
[0011]本专利技术的技术效果是：
1.
本专利技术获得了分离自年轻健康皮肤的痤疮丙酸杆菌来源的发酵上清液，该发酵上清液已除去菌体，安全性高；本专利技术中的痤疮丙酸杆菌发酵上清液，是基于皮肤微生态基础研究数据，创新发现该痤疮丙酸杆菌对皮肤具有多种有益效果，区别于行业内广泛抑制其生长的研究方向，具有非常好的前景
。
[0012]2.
经过实验证实，痤疮丙酸杆菌发酵上清液能够促进角质形成细胞的增殖，增殖率达到
128.6%
，修护皮肤表皮屏障；同时促进皮肤成纤维细胞的增殖，增殖率达到
132.1%
，促进
I
型胶原蛋白的表达（促表达率在
73.1%
），在斑马鱼上能够促进
eln1
基因的表达（促表达率在
129.7%
），进而增强弹性纤维的表达，提升皮肤弹性，具有显著的抗皱效果本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1. 一种痤疮丙酸杆菌发酵上清液的制备方法，其特征是，将痤疮丙酸杆菌
(Cutibacterium acnes) CCSM0331
在添加益生元的
TSB
液体培养基中
30~40℃
厌氧发酵培养，将发酵液离心，获得痤疮丙酸杆菌发酵上清液
。2.
如权利要求1所述的一种痤疮丙酸杆菌发酵上清液的制备方法，其特征是，具体包括以下步骤：（1）将痤疮丙酸杆菌菌株
CCSM0331
挑取单菌落接种于
TSB
液体培养基中，
30~40℃
恒温厌氧培养
48~72 h
，测定发酵液的
OD
600
值，调整菌体
OD
600
值为
0.5~0.7
，作为种子液；（2）将种子液以体积比
1~3%
的接种量接种于添加益生元的
TSB
液体培养基中，
30~40℃
恒温厌氧培养
48~72 h
，...

【专利技术属性】
技术研发人员：李燕，袁春颖，杨素珍，韩婷婷，贾庆文，徐佩佩，刘三岭，姜姗姗，蒋虹，陈玉荣，毛欣宇，高春明，白天明，杲款款，
申请(专利权)人：山东福瑞达生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：