一种获取囊泡的方法技术

本发明专利技术属于生物医药领域，涉及一种获取囊泡的方法。本发明专利技术提供了一种产囊泡的方法，通过负压的作用，使得细胞产生囊泡。细胞经过这种负压产囊泡之后，还可以继续添加培养基正常培养，从而达到一株细胞可以继续多次重复用于产囊泡的目的，可以较好地节约细胞来源，简化操作流程，便于产业化大量产囊泡。便于产业化大量产囊泡。便于产业化大量产囊泡。

【技术实现步骤摘要】
一种获取囊泡的方法


[0001]本专利技术属于生物医药领域，涉及一种获取囊泡的方法。

技术介绍

[0002]细胞新生和死亡伴随着机体生命的整个过程，二者的平衡对于维持机体的稳态具有非常重要的意义，然而目前对于细胞死亡的认识仍在不断深入。细胞死亡及其功能失调是各种病理和生理过程的基础，包括细胞稳态，组织重塑和肿瘤发生。1972年，Kerr及其同事发现细胞死亡的一种典型形态变化，提出了“细胞凋亡”的概念：具有核变化包括核染色质浓缩和核碎裂，细胞收缩以及与相邻细胞的附着丧失等明显的形态特征。之后30年里陆续有十余种新型细胞死亡形式被发现命名，如细胞焦亡、细胞坏死、铁死亡、细胞自噬等，提示细胞死亡是多样性的，可能有许多细胞新型死亡形式亟需探索，这对于疾病治疗和对生命的认识都具有非常重要的意义。
[0003]细胞凋亡会产生大量凋亡外囊泡(Apototic extracellular vesicles,ApoEVs)，其中包含多种细胞成分，包括microRNA，mRNA，DNA，蛋白质和脂质。ApoEVs既可通过细胞因子等转移促进细胞间通讯发挥作用，又可作为小分子药物的载体发挥作用，具有可行的临床应用前景。

技术实现思路

[0004]在一些实施方案中，本专利技术提供了一种产囊泡的方法，包括以下步骤：(1)将负压施加至细胞诱导细胞产囊泡；(2)收集囊泡；(3)在所述步骤(2)中剩下的细胞进行继续培养；(4)再次实施(1)和(2)的步骤。
[0005]在一些实施方案中，完成步骤(4)后，返回步骤(3)进行循环重复，所述的循环为一轮、两轮或以上。在一些实施方案中，步骤(3)中，放置于二氧化碳培养箱中继续培养。
[0006]在一些实施方案中，步骤(1)中，所述负压的值为
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0.1Mpa～
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0.01Mpa。在一些实施方案中，所述负压的值为
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0.1Mpa～
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0.02Mpa。在一些实施方案中，所述负压的值为
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0.1Mpa～
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0.06Mpa。在一些实施方案中，所述负压的值为
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0.08Mpa～
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0.01Mpa。在一些实施方案中，所述负压的值为
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0.07Mpa～
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0.01Mpa。在一些实施方案中，所述负压的值为
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0.06Mpa～
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0.02Mpa。在一些实施方案中，所述负压的值为
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0.04Mpa～
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0.02Mpa。
[0007]在一些实施方案中，步骤(1)中，诱导细胞产囊泡的时间为6h
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50h。在一些实施方案中，步骤(1)中，诱导细胞产囊泡的时间为6h
–
40h。在一些实施方案中，步骤(1)中，诱导细胞产囊泡的时间为6h
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24h。在一些实施方案中，所述步骤(1)中，诱导细胞产囊泡的温度为20℃
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50℃。在一些实施方案中，所述步骤(1)中，诱导细胞产囊泡的温度为25℃
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40℃。在一些实施方案中，所述步骤(1)中，诱导细胞产囊泡的温度为25℃
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37℃。
[0008]在一些实施方案中，所述的囊泡为诱导性囊泡。在一些实施方案中，所述囊泡是细胞处于正常存活时负压施加至细胞诱导细胞而产生的囊泡。在一些实施方案中，所述细胞包括干细胞、体细胞或肿瘤细胞。在一些实施方案中，所述干细胞包括全能干细胞或多能干
细胞。在一些实施方案中，所述干细胞包括间充质干细胞或诱导性多能干细胞。在一些实施方案中，所述间充质干细胞来源包括骨髓、尿液、口腔、脂肪、胎盘、脐带、骨膜或肌腱。在一些实施方案中，所述的体细胞包括Jurkat、红细胞或PBMC。
[0009]在一些实施方案中，本专利技术提供了一种产囊泡的装置，包含负压调节组件和温度调节组件。在一些实施方案中，所述的装置包括箱体，箱体内设置有压力传感器、温度传感器、加热器、真空泵、控制器；所述控制器分别与温度传感器、压力传感器连接。在一些实施方案中，所述控制器通过压力传感器控制所述真空泵的工作；所述控制器通过所述温度传感器控制所述加热器的工作。
[0010]在一些实施方案中，所述装置为细胞培养箱。
[0011]在一些实施方案中，所述装置为负压细胞培养箱。
[0012]以往的实验中，使用STS等诱导后，会发现细胞大量死亡，从而一般只会一株细胞只用STS诱导一次产囊泡后就不再使用。而在一些实施方案中，专利技术人研究发现，细胞经过这种负压培养箱产囊泡之后，还可以继续添加培养基正常培养，即使细胞进行第二次培养产生的囊泡数量也是远远多于STS第一次诱导产生的囊泡，甚至远远多于STS诱导细胞两次加起来的总共产生的囊泡。从而一株细胞可以继续多次重复用于产囊泡，可以较好地节约细胞来源，简化操作流程，便于产业化大量产囊泡。
[0013]一些实施方案中，本专利技术提供了一种产囊泡的系统，包含所述的装置，还包括细胞培养箱。
[0014]在一些实施方案中，本专利技术提供了任一所述的装置的使用方法，包括以下步骤：(1)通过所述控制器控制加热器和真空泵，使所述装置中的压力为负压；(2)将细胞放置于所述的装置中培养诱导细胞产生囊泡；(3)收集囊泡；(4)将步骤(3)中剩下的细胞进行继续培养；(5)再次实施如(2)和(3)的步骤。
[0015]在一些实施方案中，完成步骤(5)之后，返回步骤(4)进行循环重复，所述的循环为一轮、两轮或以上。
[0016]在一些实施方案中，步骤(4)中，放置于二氧化碳培养箱中继续培养。在一些实施方案中，所述步骤(1)中，所述装置中的温度为20℃
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50℃，所述负压的值为
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0.1Mpa～
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0.01Mpa。在一些实施方案中，所述装置中的温度为25℃
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40℃。在一些实施方案中，所述装置中的温度为25℃
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37℃。在一些实施方案中，所述负压的值为
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0.1Mpa～
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0.02Mpa。在一些实施方案中，所述负压的值为
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0.1Mpa～
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0.06Mpa。在一些实施方案中，步骤(2)中，将细胞放置于所述的装置中培养6h
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50h。在一些实施方案中，步骤(2)中，将细胞放置于所述的装置中培养6h
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40h。在一些实施方案中，步骤(2)中，将细胞放置于所述的装置中培养6h
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24h。
[0017]在一些实施方案中，所述的囊泡为诱导性囊泡。
[0018]在一些实施方案中，所述囊泡是细胞处于正常存活时负压施加至细胞诱导细胞而产生的囊泡。
[0019]在一些实施方案中，所述细胞包括干细胞、体细胞或肿瘤细胞。在一些实施方案中，所述干细胞包括全能干细胞或多能干细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种产囊泡的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将负压施加至细胞诱导细胞产囊泡；(2)收集囊泡；(3)将步骤(2)中剩下的细胞进行继续培养；(4)再次实施如(1)和(2)的步骤；优选地，完成步骤(4)后，返回步骤(3)进行循环重复，所述的循环为一轮、两轮或以上；优选地，步骤(3)中，放置于二氧化碳培养箱中继续培养；优选地，步骤(1)中，所述负压的值为
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0.1Mpa～
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0.01Mpa；优选地，所述负压的值为
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0.1Mpa～
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0.02Mpa；优选地，所述负压的值为
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0.1Mpa～
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0.06Mpa；优选地，所述负压的值为
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0.08Mpa～
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0.01Mpa；优选地，所述负压的值为
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0.07Mpa～
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0.01Mpa；优选地，所述负压的值为
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0.06Mpa～
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0.02Mpa；优选地，所述负压的值为
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0.04Mpa～
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0.02Mpa；优选地，步骤(1)中，诱导细胞产囊泡的时间为6h
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50h；优选地，步骤(1)中，诱导细胞产囊泡的时间为6h
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40h；优选地，步骤(1)中，诱导细胞产囊泡的时间为6h
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24h；优选地，所述步骤(1)中，诱导细胞产囊泡的温度为20℃
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50℃；优选地，所述步骤(1)中，诱导细胞产囊泡的温度为25℃
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40℃；优选地，所述步骤(1)中，诱导细胞产囊泡的温度为25℃
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37℃；优选地，所述的囊泡为诱导性囊泡；优选地，所述囊泡是细胞处于正常存活时负压施加至细胞诱导细胞而产生的囊泡；优选地，所述细胞包括干细胞、体细胞或肿瘤细胞；优选地，所述干细胞包括全能干细胞或多能干细胞；优选地，所述干细胞包括间充质干细胞或诱导性多能干细胞；优选地，所述间充质干细胞来源包括骨髓、尿液、口腔、脂肪、胎盘、脐带、骨膜或肌腱；优选地，所述的体细胞包括Jurkat、红细胞或PBMC。2.一种产囊泡的装置，其特征在于，包含负压调节组件和温度调节组件。3.如权利要求2所述的装置，其特征在于，包括箱体，箱体内设置有压力传感器、温度传感器、加热器、真空泵、控制器；所述控制器分别与温度传感器、压力传感器连接。优选地，所述控制器通过压力传感器控制所述真空泵的工作；所述控制器通过所述温度传感器控制所述加热器的工作；优选地，所述装置为负压细胞培养箱。4.一种产囊泡的系统，其特征在于，包含如权利要求3所述的装置，还包括细胞培养箱。5.权利要求3所述的装置的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)通过所述控制器控制加热器和真空泵，使所述装置中的压力为负压；(2)将细胞放置于所述的装置中培养诱导细胞产囊泡；(3)收集囊泡；
(4)将步骤(3)中剩下的细胞进行继续培养；(5)再次实施如(2)和(3)的步骤；优选地，完成步骤(5)之后，返回步骤(4)进行循环重复，所述的循环为一轮、两轮或以上；优选地，步骤(4)中，放置于二氧化碳培养箱中继续培养。6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述装置中的温度为20℃
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50℃，所述负压的值为
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0.1Mpa～
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0.01Mpa；优选地，所述装置中的温度为25℃
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40℃；优选地，所述装置中的温度为25℃
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37℃；优选地，所述负压的值为
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0.1Mpa～
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0.02Mpa；优选地，所述负压的值为
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0.1Mpa～
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0.06Mpa；优选地，步骤(2)中，将细胞放置于所述的装置中培养6h
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50h；优选地，步骤(2)中，将细胞放置于所述的装置中培养6h
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40h；优选地，步骤(2)中，将细胞放置于所述的装置中培养6h
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【专利技术属性】
技术研发人员：孟博文，寇晓星，施松涛，
申请(专利权)人：北京中赢谷投资管理有限公司，
类型：发明
国别省市：