一种人壳多糖酶3样蛋白1的抗原模拟表位肽及制备方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，涉及一种人壳多糖酶3样蛋白1的抗原模拟表位肽及制备方法，该抗原模拟表位肽的氨基酸序列为

【技术实现步骤摘要】
一种人壳多糖酶3样蛋白1的抗原模拟表位肽及制备方法


[0001]本专利技术涉及生物医药
，特别是涉及一种人壳多糖酶3样蛋白1的抗原模拟表位肽及制备方法
。

技术介绍

[0002]壳多糖酶3样蛋白
1(CHI3L1)
，又称为
YKL
‑
40
蛋白，是由
CHI3L1
基因编码的一种分泌型糖蛋白
。
有研究发现，人血清中
CHI3L1
水平在酒精性肝硬化病人中升高，并且血清中
CHI3L1
蛋白水平与丙肝病毒慢性感染和肝纤维化有关
。
[0003]现有技术未发现有关于壳多糖酶3样蛋白1的抗原模拟表位肽的报道
。

技术实现思路

[0004]本专利技术以抗人
CHI3L1
兔抗为靶分子，将靶分子以链霉亲和素
‑
生物素定向连接的方式固定于磁珠上，投入噬菌体随机展示双环肽库，通过优化的液相磁珠亲和淘选条件，获得了一种可特异性结合抗人
CHI3L1
兔抗的多肽分子
(
抗原模拟表位肽
)
，其氨基酸序列为
C
‑
K
‑
H
‑
N
‑
F
‑
G
‑
L
‑
E
‑
C
‑
R
‑
F
‑
F
>‑
L
‑
F
‑
E
‑
F
‑
C
（
SEQ ID NO .1
）
。
[0005]上述多肽分子结构中，大写英文字母分别代表已知天然
L
‑
型氨基酸残基或其
D
‑
型异构体的一种，即
C
代表半胱氨酸残基，
K
代表赖酸残基，
H
代表组氨酸残基，
N
代表天冬酰胺残基，
F
代表苯丙氨酸残基，
G
代表甘氨酸残基，
L
代表亮氨酸残基，
E
代表谷氨酸残基，
R
代表精氨酸残基
。
[0006]本专利技术还涉及编码上述氨基酸序列的核苷酸，该核苷酸的序列为
: TGT AAG CAT AAT TTT GGT CTG GAG TGT CGG TTT TTT TTG TTT GAG TTT TGT
（
SEQ ID NO .2
）
。
[0007]本专利技术提及多肽分子可通过噬菌体扩增
、
化学合成的方式进行大量制备
。
噬菌体扩增是指将展示有多肽分子的噬菌体，通过生物扩增的方式，大量繁殖生产展示有多肽分子的噬菌体粒子
。
化学合成是指依据公布的多肽氨基酸序列，通过化学合成多肽的方式进行多肽合成
。
[0008]本专利技术的有益效果是：本专利技术所提及的多肽分子（抗原模拟表位肽）可作为天然的人
CHI3L1、
通过基因工程技术制备的重组人脂联素蛋白的替代物应用于免疫分析体系，避免了传统的人
CHI3L1
所面临的复杂的提取
、
纯化过程；也避免了传统的重组
CHI3L1
制备过程中所面临的基因序列优化
、
表达载体构建
、
原核
/
真核表达条件优化等复杂的制备过程，具有制备简单
、
快速
、
高效等优势
。
附图说明
[0009]图1为琼脂糖凝胶电泳鉴定酶联后的菌落
PCR
产物的示意图，其中，泳道1‑
30
分别为随机挑取的酶联产物的单克隆菌落
PCR
产物，泳道
M
为
DNA marker
；图2为间接
ELISA
鉴定噬菌体展示双环多肽阳性克隆的结合特异性的结果示意图；图3为基于抗原模拟表位肽的间接竞争
ELISA
测定
CHI3L1
的结果示意图
。
按表3所示的体系用金属浴对消化后的线性化质粒进行酶连，
100
μ
L
体系，并分别设置空白对照，即把连接酶换成无菌水，
16℃
酶连
16h
，酶连结束后跑
1.5%
的琼脂糖凝胶观察结果
。
[0017]表
34
）噬菌体展示双环肽库的组装取
100
μ
LE.coliTG1
感受态细胞，加入胶回收后的酶联产物后轻轻混匀，设置空白对照，即换成无菌水，冰浴放置
10min
后沿管壁加入处理好电杯中，置于电转仪中，设置电压
2500v
，电阻
250
Ω
，电击恒压时间
6.0ms
，电转化立即加入
900
μ
L
用
42℃
预热的
SOB
液体培养基，经
37℃
摇床
150rpm
震荡复苏培养
30min。
[0018]取
10
μ
L
菌液用于滴度验证，其余菌液全部涂布至
LB
‑
A(amp
终浓度
100
μ
g/mL
，
1/1000)
平板（
15cm
），
37℃
恒温培养箱倒置培养过夜
。
隔天用
2mL LB
培养基将平板上的菌落轻轻刮至一起，收集起来
。
体积较多可短暂低速离心去除部分培养基
。
[0019]取
10
μ
L
电转后复苏的菌液进行梯度稀释，用
LB
培养基稀释至
10
‑3、10
‑4、10
‑5梯度，从各个稀释梯度中取出
100
μ
L
涂布
LB
‑
A(Amp
终浓度
100
μ
g/mL,1/1000)
平板，
37℃
恒温培养箱倒置培养过夜
。
隔天选取菌落数量合适的平板进行库容计算
。
[0020]从进行滴度验证后的平板中随机挑取单克隆菌落至含有
1mL LB
‑
A
培养基的离心管中进行摇菌（
37℃、220rpm
）本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种人壳多糖酶3样蛋白1的抗原模拟表位肽，其特征在于，氨基酸序列如
SEQ ID NO .1
所示
。2.
编码权利要求1所述的氨基酸序列的核苷酸
。3.
如权利要求2所述的核苷酸的序列如
SEQ ID NO .2
所示
。4.
权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：万蒙，何庆华，
申请(专利权)人：江西乐成欣生生物技术研究有限责任公司，
类型：发明
国别省市：