人ST2抗原的模拟表位肽的抗独特型纳米抗体及应用制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，涉及一种人ST2抗原的模拟表位肽的抗独特型纳米抗体及应用，所述人ST2抗原的模拟表位肽的抗独特型纳米抗体，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明专利技术避免了传统抗独特型抗体制备所需的动物免疫及复杂的二次抗体制备过程，筛选得到的纳米抗体具有与天然ST2抗原相似的免疫反应特性，可作为天然ST2抗原的替代物应用于ST2的免疫学检测。此外，本发明专利技术无需基于天然ST2抗原的氨基酸序列进行设计及优化，且获得的抗独特型纳米抗体具有可在大肠杆菌中实现大量制备、制造成本低的优点，同时与传统的重组蛋白相比，具有更耐酸碱、高温以及检测灵敏度高等优点。高温以及检测灵敏度高等优点。高温以及检测灵敏度高等优点。

【技术实现步骤摘要】
人ST2抗原的模拟表位肽的抗独特型纳米抗体及应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，特别是涉及一种人ST2抗原的模拟表位肽的抗独特型纳米抗体及应用。

技术介绍

[0002]人可溶性生长刺激表达基因2蛋白(Growth Stimulation Expressed Gene 2，ST2)，是IL
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1（白细胞介素1）受体家族成员之一。研究发现，ST2可由心脏成纤维细胞和心肌细胞表达，是生物机械应力诱导产生的一种心肌蛋白，其基因表达于肥大细胞、激活的辅助性T细胞2（Th2）、巨噬细胞和心肌细胞。人血液中的ST2能够竞争性结合IL
‑
33，使心肌受累，心脏结构与功能受影响，增加了疾病的发展率。因此，当心力衰竭发生时，ST2水平明显升高，进而增加对心脏的损伤作用，ST2作为新一代心衰标志物，在心衰患者的诊断、治疗及风险预测中发挥着重要作用。
[0003]基于抗原抗体特异性识别与结合的免疫分析技术在ST2的准确、快速检测领域中发挥着重要的作用，比如常规的ELISA、荧光免疫层析试纸、胶乳免疫比浊等方法。对于免疫分析方法而言，除了特异性的抗体之外，抗原作为质控、标准品也是必不可少的关键原料。目前ST2抗原主要通过基因工程的方法，根据天然的人源ST2蛋白基因，构建表达载体，以生物合成的方式进行ST2重组蛋白的制备。现有的ST2重组蛋白由于其复杂的结构与组成，因此主要基于哺乳动物细胞、酵母细胞或昆虫细胞表达系统进行制备，尚存在步骤复杂、流程长、成本高等不足。
[0004]抗独特型抗体(Anti
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idiotype antibody)是针对抗体可变区的抗原决定簇（独特型）产生的特异性抗体，它们均具有抗原性，因此抗独特型抗体具备了模拟天然抗原与对应抗体结合的分子基础，可阻断天然抗原与抗体的结合，具有模拟表位肽的特性，可作为天然抗原的替代物应用于免疫分析。然而，传统的抗独特型抗体主要以单克隆抗体为主，通过二次制备抗体的方法进行制备，存在制备难度大，流程长等不足。

技术实现思路

[0005]本专利技术提供一种人ST2抗原的模拟表位肽的抗独特型纳米抗体及应用，以解决现有技术制备难度大、流程长等问题。
[0006]本专利技术的一方面以鼠源抗人ST2单克隆抗体为靶分子，将靶分子固相包被于酶标板上，投入羊驼源天然噬菌体展示纳米抗体库进行亲和淘选，获得了一种人ST2抗原的模拟表位肽的抗独特型纳米抗体，其氨基酸序列为：QLQLVESGGVVQPGGSLRLSCAHSGSTSGYYGIGWWRQAPGKEREWVSCISTNDGSTTYTYSVKGRFTISRDKTKKTLYLQMNNLTAEDTAVYYCVADPWAMCIKSDLLATDNFVWGKGTLVTVSS（SEQ ID NO .1）。
[0007]需要指出的是，纳米抗体(Nanobody)，是仅含有VHH（Variable domain of heavy chain antibody）区域片段的重链单域抗体，直径2.5 nm，分子量约为12
‑
15KD，具有分子量小，亲水性强，可在大肠杆菌大量表达等优点，同时纳米抗体还具有较高的热稳定性和抗蛋
白酶性，可以在不同的温度和酸碱条件下保持其结构和功能的完整性。
[0008]上述氨基酸序列的IMGT编号和结构域划分如图1所示。本专利技术所提及的人ST2抗原的模拟表位肽的抗独特型纳米抗体包括四个框架区（Framework region , FR）和 三个互补决定区（Complementarity
‑
determining region , CDR）。
[0009]其中，框架区（FR1、FR2、FR3、FR4）分别选自以下序列：QLQLVESGGVVQPGGSLRLSCAHS（SEQ ID NO .2）；IGWWRQAPGKEREWVSC（SEQ ID NO .4）；TYTYSVKGRFTISRDKTKKTLYLQMNNLTAEDTAVYYC（SEQ ID NO .6）；WGKGTLVTVSS（SEQ ID NO .8）。
[0010]互补决定区（CDR1、CDR2、CDR3）分别选自以下序列：GSTSGYYG（SEQ ID NO .3）；ISTNDGST（SEQ ID NO .5）；VADPWAMCIKSDLLATDNFV（SEQ ID NO .7）。
[0011]框架区结构相对保守，主要起着维持蛋白质结构的作用；互补决定区结构相对多样化，主要负责抗体的识别。本专利技术提供一种蛋白质或多肽，包含如SEQ ID NO .2，SEQ ID NO .4，SEQ ID NO .6和SEQ ID NO .8中的一个或两个及以上的氨基酸序列，且至少与其中一个的氨基酸序列有90%同源性。本专利技术提供一种蛋白质或多肽，包含如SEQ ID NO .3，SEQ ID NO .5和SEQ ID NO .7中的一个或两个及以上的氨基酸序列，且至少与其中一个的氨基酸序列有80%同源性。
[0012]本专利技术的另一方面涉及编码人ST2抗原的模拟表位肽的抗独特型纳米抗体的核苷酸，其序列为：cagttgcagctcgtggagtctggtggcgtggtgcaacctggggggtctctgagactctcctgtgcacactctggatccacttcgggttattatggcataggctggtggcgccaggccccagggaaggagcgtgaatgggtctcatgtattagtacaaatgatggtagtacaacgtacacgtactccgtgaagggtcgattcaccatctccagagacaagaccaagaagactttatatttacaaatgaataacctgacggccgaggacacagccgtttattattgtgtggcggacccctgggctatgtgtattaagtccgacctcctggccaccgacaacttcgtttggggcaaagggaccctggtcaccgtctcctca（SEQ ID NO .9）。
[0013]本专利技术提及的人ST2抗原的模拟表位肽可通过噬菌体扩增或基因工程重组表达的方式进行大量制备。噬菌体扩增是指将展示有抗独特型纳米抗体的噬菌体，通过生物扩增的方式，大量繁殖生产展示有人ST2抗原的模拟表位肽的噬菌体粒子。基因工程重组表达的方式是指将编码抗独特型纳米的基因，通过克隆至原核、真核或昆虫细胞表达载体，以可溶纳米抗体的形式进行大量制备。本专利技术还涉及所述抗独特型纳米抗体在免疫学检测分析中的应用。免疫学检测的类型包括酶联免疫吸附检测、免疫层析、免疫斑点杂交、胶乳免疫比浊等基于抗原
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抗体特异性反应的免疫学分析检测类型。本专利技术的抗独特型纳米抗体在应用时，可以通过噬菌体扩增获得的展示有抗独特型纳米抗体的噬菌体粒子直接用于分析检测，也可以将抗独特型纳米抗体经过原核生物或真核生物表达后以可溶纳米抗体的形式进行免疫学检测分析。
[0014]本专利技术还涉及所本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人ST2抗原的模拟表位肽的抗独特型纳米抗体，其特征在于，氨基酸序列如SEQ ID NO .1所示。2.编码权利要求1所述的氨基酸序列的核苷酸。3.如权利要求2所述的核苷酸的序列如SEQ ID NO .9所...

【专利技术属性】
技术研发人员：万蒙，何庆华，
申请(专利权)人：江西乐成欣生生物技术研究有限责任公司，
类型：发明
国别省市：