一种主动型异噬性抗体阻断剂Block-5S及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种主动型异噬性抗体阻断剂Block

【技术实现步骤摘要】
一种主动型异噬性抗体阻断剂Block
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5S及其制备方法


[0001]本专利技术涉及一种主动型异噬性抗体阻断剂Block
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5S及其制备方法，属于生物医学


技术介绍

[0002]在体外诊断行业(IVD行业)中，以免疫学原理为基础的抗体
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抗原结合检测方法有着广泛地应用，因为抗体
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抗原结合具有较高的亲和性和特异性，使得抗体
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抗原在临床检测方面有着非常高的准确性，例如用特异性抗体检测癌症、炎症、肝纤、传染病等病人体内的某个病变抗原或特征抗原。
[0003]然而，在免疫检测时，病人体液(常见为血液/血浆)样本存在某种干扰物可通过非特异性结合检测抗体，来干扰检测抗体和分析物之间的反应，造成检测值出现偏差。尤其在以双抗夹心法为基础的检测试剂盒中，这种干扰物一方面抑制目标分析物与检测抗体的结合，产生假阴性；另一方面又可以在目标分析物不存在的情况下与包被和检测抗体结合，从而产生假阳性。这类干扰物会对检测的结果造成很大地影响，使试剂盒的研发难度加大。
[0004]常见引起检测偏差的干扰物有两大类，一类是异嗜性抗体，存在于病人血清/血浆中，可结合其他种属的免疫球蛋白，包括作为免疫分析试剂的检测抗体，如鼠IgG、羊IgG和兔IgG等。这类异嗜性抗体包括人抗鼠抗体(Human Anti
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mouse Antibody，HAMA)、人抗羊(HAGA)和人抗兔(HARA)等。例如，一些在曾经接触过鼠抗体或注射过人
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鼠嵌合抗体药物的病人，其体液中会存在人抗鼠(HAMA)的抗体，当夹心法免疫检测时所采用的一对抗体都是鼠抗体时，血清样本中所含有的人抗鼠的抗体，可在分析物缺失的情况下使包被抗体和检测抗体结合，从而影响血清样本的正常双抗夹心反应造成错误的检测结果。另一类干扰物是类风湿因子，可与自身IgG分子的Fc段抗原决定簇起反应，部分类风湿关节炎或有自身免疫疾病患者体液含有该类干扰因子。一些类风湿因子识别人与动物IgG的共有抗原决定簇，因而能引起交叉反应。
[0005]阻断剂是一种通过阻断干扰物来消除免疫检测干扰的试剂。在免疫诊断试剂盒开发中，添加动物血清、高效纯化动物IgG是消除由异噬性抗体造成干扰的一种有效方法，同时为了提高阻断效果，常将动物IgG交联获得交联型IgG聚体。IgG交联为聚体的方法有物理方法和化学方法，物理方法常采用高温处理、低pH处理等，这类方法可控性差、形成聚体能力有限且对抗体有一定的损害。常用的化学方法即利用一些化学试剂与抗体赖氨酸残基上的氨基反应，通过形成分子间共价键将IgG单体交联成聚体。常用的化学试剂有双琥珀酰亚胺辛二酸酯(DSS)、戊二醛和辛二酸盐等试剂。通过物理或化学方法交联形成的IgG多聚体会大幅度提高动物IgG对检测样本中异噬性抗体干扰的消除能力。
[0006]无论是使用动物血清还是高纯度的动物IgG作为阻断剂，或者使用交联型动物IgG作为阻断剂，这类阻断剂都是被动型，在使用过程中，添加量非常大且浓度非常高。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种主动型异噬性抗体阻断剂Block
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5S及其制备方法，该阻断剂Block
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5S可以特异性的结合异噬性抗体或类风湿因子，并且是通过体外重组的方法获得的，具有生产简易，阻断效果好，使用浓度低等特点。
[0008]本专利技术所采用的技术方案为：
[0009]一种主动型异噬性抗体阻断剂Block
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5S，包括Block
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L和Block
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H两个重组蛋白组分；其中，Block
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L是通过柔性短肽NAAAANAAAA连接Block
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L1和Block
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L2；Block
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H是通过柔性短肽NAAAANAAAA连接Block
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H1和Block
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H2；最终，Block
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L共有六个互补决定区，对应CDR序列分别为：
[0010]CDR1：RASESISNNIH，
[0011]CDR2：RANQSIS，
[0012]CDR3：LQYDSWPLT，
[0013]CDR4：HASQNLSGFLS，
[0014]CDR5：AASTLD，
[0015]CDR6：LQYTSFPITFG；
[0016]Block
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H也有六个互补决定区，对应CDR序列分别为：
[0017]CDR1：FSDAYMY，
[0018]CDR2：TIGNGGSNHYTIYVESV，
[0019]CDR3：AYYGNYGDSTRLAY，
[0020]CDR4：FSIKDAYIH，
[0021]CDR5：WIYPANGYTKYNEKFRG，
[0022]CDR6：EPLPHNYAMD。
[0023]优选地，所述Block
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L共有六个互补决定区CDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5、CDR6的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6所示；
[0024]所述Block
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H共有6个互补决定区CDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5、CDR6的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12所示。
[0025]优选地，所述Block
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L1的氨基酸序列如SEQ ID NO.13所示；所述Block
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L2的氨基酸序列如SEQ ID NO.14所示。
[0026]优选地，所述Block
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H1的氨基酸序列如SEQ ID NO.15所示；所述Block
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H2的氨基酸序列如SEQ ID NO.16所示。
[0027]优选地，所述Block
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L的氨基酸序列如SEQ ID NO.17所示；所述Block
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L的核苷酸序列如SEQ ID NO.18所示。
[0028]优选地，所述Block
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H的氨基酸序列如SEQ ID NO.19所示；所述Block
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H的核苷酸序列如SEQ ID NO.20所示。
[0029]上述主动型异噬性抗体阻断剂Block
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5S的制备方法，具体为：通过人工合成正确表达Block
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L和Block
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H核苷酸序列，通过基因克隆技术将核苷酸克隆到合适的质粒载体上，并将本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种主动型异噬性抗体阻断剂Block
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5S，其特征在于，所述阻断剂Block
‑
5S包括轻链Block
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L和重链Block
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H；其中，轻链Block
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L的6个互补决定区CDR序列分别为：CDR1：RASESISNNIH，CDR2：RANQSIS，CDR3：LQYDSWPLT，CDR4：HASQNLSGFLS，CDR5：AASTLD，CDR6：LQYTSFPITFG；重链Block
‑
H的6个互补决定区CDR序列分别为：CDR1：FSDAYMY，CDR2：TIGNGGSNHYTIYVESV，CDR3：AYYGNYGDSTRLAY，CDR4：FSIKDAYIH，CDR5：WIYPANGYTKYNEKFRG，CDR6：EPLPHNYAMD。2.根据权利要求1所述的主动型异噬性抗体阻断剂Block
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5S，其特征在于，所述轻链Block
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L由轻链Block
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L1和Block
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L2通过柔性短肽NAAAANAAAA连接得到；Block
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H是由重链Block
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H1和Block
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H2通过柔性短肽NAAAANAAAA连接得到。3.根据权利要求2所述的主动型异噬性抗体阻断剂Bloc...

【专利技术属性】
技术研发人员：李伟，吴德风，
申请(专利权)人：南京珀尔泰生物技术有限公司，
类型：发明
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