可提高制造技术

本发明专利技术公开了可提高

【技术实现步骤摘要】
可提高AAV病毒全眼感染能力的衣壳蛋白突变体及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及可提高
AAV
病毒全眼感染能力的衣壳蛋白突变体
。

技术介绍

[0002]腺相关病毒
(AAV)
是基因治疗递送常用载体，其原理是通过基因工程方法将
AAV
基因组
ITR
之间序列替换成目的基因序列，经细胞感染将目的基因递送至靶细胞，达到基因治疗目的
。
基于重组
AAV
具有安全性
、
高效性
、
稳定性
、
持续性
、
特异性
、
低整合性等特点，使得
AAV
成为基因治疗领域主要递送手段之一
。
在基因治疗过程中，动物体内注射往往需要高剂量
、
高纯度的
AAV
病毒，而高昂的
AAV
生产成本成为基因治疗过程中的瓶颈之一
。
[0003]伴随着基因治疗下游研发技术的成熟，上游
AAV
生产通量问题的限制变得越来越明显
。
为了解决这个问题，现有的策略集中在以下两个方面，一是优化现有的
AAV
生产工艺，提高产量；二是对
AAV
衣壳蛋白进行改造，提高其对特定组织的靶向性及感染能力，以其实现更低
、
更安全的给药剂量
。AAV
生产工艺更多的是通过优化质粒配比
、
转染试剂配比
、
细胞培养条件
、
放大生产规格等达到提搞病毒产量的目的，不涉及
AAV
本身的改造
。
而基于
AAV
病毒的结构特征，其病毒特性如组织靶向性
、
免疫原性
、
包装产量等主要由其表面衣壳蛋白决定
。
过往研究显示在
Cap2
的
561
至
588
区域氨基酸位点进行突变，可以优化其对小鼠眼组织的感染能力
。
然而具体何种突变可以提高
AAV
病毒的全眼感染能力，依然是未知的
。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于克服现有技术的至少一个不足，提供可提高
AAV
病毒全眼感染能力的衣壳蛋白突变体
。
[0005]本专利技术所采取的技术方案是：本专利技术的第一个方面，提供：可提高
AAV
病毒全眼感染能力的衣壳蛋白突变体，使用如下多肽中的一条替代野生型
AAV
病毒衣壳蛋白的
561
至
588
位氨基酸得到：
1)DEHEIKTTNPVATEGYGEVATNWQRGNR2)DEEEIRTTNPVATEQYGSVSTNLQRGNTGRSAGLGTGLSR3)DEQEIAATNPVATEQYGSVSTNLQRGNR4)DEEEIRTTNPVATEQYGSVSTNLQRGNTGGMVLVSAKSGLSR5)DEEEIRTTNPVATEQYGSVSTNLQRGNTGGRILVATTGLSR6)DEEEIRTTNPVATEQYGSVSTNLQRGNTGPLLDGTKGLSR7)DEEEIRTTNPVATEQYGSVSTNLQRGNTGSSPIKDGTKGLSR。
[0006]在一些衣壳蛋白突变体的实例中，所述野生型
AAV2
病毒衣壳蛋白的氨基酸序列如
SEQ ID NO.
：1所示
。
[0007]本专利技术的第二个方面，提供：
一种基因，编码本专利技术第一个方面所述的衣壳蛋白突变体
。
[0008]在一些基因的实例中，根据表达体系进行密码子优化
。
[0009]本专利技术的第三个方面，提供：一种表达体系，其插入有本专利技术第二个方面所述的基因
。
[0010]在一些表达体系的实例中，所述表达体系为重组
AAV
载体
。
[0011]在一些表达体系的实例中，所述
AAV
选自
AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9
或
AAV10
及其变体的任意一种
。
[0012]本专利技术的第四个方面，提供：一种组合物，包括本专利技术第三个方面所述的表达体系
。
[0013]在一些组合物的实例中，还添加有辅料
。
[0014]本专利技术的第五个方面，提供：本专利技术第四个方面所述的组合物在制备基因治疗制剂或转基因制剂中的应用
。
[0015]在一些应用的实例中，用于制备靶向眼的基因治疗制剂或转基因制剂
。
[0016]本专利技术的第五个方面，提供：一种转基因动物模型的构建方法，包括向动物体内导入本专利技术第四个方面所述的组合物
。
[0017]在一些构建方法的实例中，用于眼部疾病转基因动物模型的构建
。
[0018]本专利技术的有益效果是：本专利技术的一些实例的衣壳蛋白突变体，可以有效提高
AAV
病毒全眼感染能力，从根本上解决
AAV2
对眼睛感染效率的问题
。
附图说明
[0019]图1为本发测试例中所构建的突变体质粒的琼脂糖凝胶电泳鉴定图
。
[0020]图2为本发测试例中所构建的表达质粒
pAAV
‑
CAG
‑
EGFP
‑
Barcod
‑
HGH
琼脂糖凝胶电泳鉴定图
。
[0021]图3为本专利技术实施例中
pAAV2
‑
Rep2/Cap2
包装质粒图谱
。
[0022]图4为本专利技术实施例中
pAAV2
‑
7M8
‑
Rep2/Cap2
‑
7M8
包装质粒图谱
。
[0023]图5为本专利技术实施例中构建得到的
pAAV2
‑
Mut
‑
Rep2/Cap2
‑
Mut
包装质粒图谱
。
[0024]图6为本专利技术实施例中病毒包装三质粒系统的
pAAV
‑
CAG
‑
EGFP
‑
Barcod
‑
HGH
表达质粒图谱
。
[0025]图7为本专利技术实施例中病毒包装三质粒系统的
pHelper
辅助质粒图谱
。
[0026]图8为本专利技术测试例中的方案制备得到的腺相本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
可提高
AAV
病毒全眼感染能力的衣壳蛋白突变体，其特征在于，使用如下多肽中的一条替代野生型
AAV
病毒衣壳蛋白的
561
至
588
位氨基酸得到：1）
DEHEIKTTNPVATEGYGEVATNWQRGNR2
）
DEEEIRTTNPVATEQYGSVSTNLQRGNTGRSAGLGTGLSR3
）
DEQEIAATNPVATEQYGSVSTNLQRGNR4
）
DEEEIRTTNPVATEQYGSVSTNLQRGNTGGMVLVSAKSGLSR5
）
DEEEIRTTNPVATEQYGSVSTNLQRGNTGGRILVATTGLSR6
）
DEEEIRTTNPVATEQYGSVSTNLQRGNTGPLLDGTKGLSR7
）
DEEEIRTTNPVATEQYGSVSTNLQRGNTGSSPIKDGTKGLSR。2.
根据权利要求1所述的衣壳蛋白突变体，其特征在于，所述野生型
AAV2<...

【专利技术属性】
技术研发人员：AAV二，
申请(专利权)人：广州译码基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：