高转导制造技术

本文公开了

【技术实现步骤摘要】
高转导HSV载体
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请是申请号为
201780019426.3、
申请日为
2017
年3月
24
日
、
专利技术名称为“高转导
HSV
载体”的中国专利技术专利申请的分案申请，原申请为国际申请号为
PCT/US2017/024092
的国家阶段申请，该国际申请要求申请日为
2016
年3月
25
日提交的美国临时申请号
62/313,391
的优先权，所述美国临时申请的内容以引用的方式整体并入本文
。
[0003]序列表
[0004]根据
37CFR 1.52(e)(5)
，本说明书参考序列表
(
以电子方式提交的命名为“2017
‑
03
‑
24SL 2012073
‑
0004_ST25”的
.txt
文件
)。
该
.txt
文件创建于
2017
年3月
24
日，并且大小为
224,294
字节
。
序列表的全部内容以引用的方式并入本文
。

技术介绍

[0005]对于具有弱药代动力学和
/
或脱靶不利效应的风险的试剂，某些治疗剂的全身递送可能是有问题的
。
在特定靶部位处的局部注射可能要求高度侵入性技术或者可能是不可行的
。
通过病毒载体递送试剂允许特异性靶向细胞群的能力，以提供试剂的局部产生和
/
或递送
。

技术实现思路

[0006]本公开提供了用于将试剂病毒载体递送至靶细胞的组合物和方法
。
[0007]在一些实施例中，本公开提供了单纯疱疹病毒
(HSV)McKrae
株的变体，其基因组含有改变，使得所述变体不能表达由
SEQ ID NO:16
的氨基酸序列表征的功能性蛋白质
。
[0008]在一些实施例中，本公开提供了单纯疱疹病毒
McKrae
株的变体，其具有总体尺寸小于约
150,000
个碱基对的截短基因组，并且包括在对应于
SEQ ID NO:1
的残基
126049
至
130014
的元件内的一个或多个残基的缺失
。
[0009]在一些实施例中，本公开提供了包含变体单纯疱疹病毒
(HSV)McKrae
株基因组的载体，所述基因组含有改变，使得所述变体不能表达由
SEQ ID NO:2
的氨基酸序列表征的功能性蛋白质
。
在一些实施例中，载体包含神经元特异性启动子
。
在一些实施例中，启动子是降钙素基因相关肽
(CGRP)
启动子
。
[0010]在一些实施例中，载体包含人巨细胞病毒
(HCMV)
增强子
。
在一些实施例中，载体包含牛生长激素
(BGH)
多腺苷酸化信号
。
在一些实施例中，载体包含编码治疗性多肽的核酸
。
[0011]在一些实施例中，本公开提供了用如本文所述的
HSV McKrae
株病毒载体转导的细胞
。
[0012]在一些实施例中，本公开提供了药物组合物，其包含如本文所述的
HSV McKrae
株病毒载体和药学可接受的载体
。
[0013]在一些实施例中，本公开提供了繁殖包含变体单纯疱疹病毒
(HSV)McKrae
株基因组的载体的方法，所述基因组包含改变，使得所述变体不能表达由
SEQ ID NO:16
的氨基酸序列表征的功能性蛋白质，所述方法包括以下步骤：
(i)
用载体感染含有编码
HSV
蛋白
ICP4
的
DNA
的经培养的
ICP4
互补细胞，和
(ii)
从步骤
(i)
的培养物中分离上清液
。
[0014]在一些实施例中，该方法包括通过色谱纯化上清液中的载体的步骤
。
在一些实施例中，该方法包括浓缩纯化的载体的步骤
。
在一些实施例中，通过切向流过滤来浓缩纯化的载体
。
[0015]在一些实施例中，本公开提供了制备包含变体单纯疱疹病毒
(HSV)McKrae
株基因组的载体的方法，所述基因组包含改变，使得所述变体不能表达由
SEQ ID NO:16
的氨基酸序列表征的功能性蛋白质，并且其中所述载体表达标记物元件，所述方法包括温育用以下转染的细胞：
[0016](a)
第一核酸分子：
[0017](i)
包含
HSV McKrae
株基因组的一部分，但不编码由
SEQ ID NO:16
的氨基酸序列表征的功能性蛋白质；和
[0018](ii)
包含第一同源区
(HR1)
和第二同源区
(HR2)
，以及
[0019](b)
第二核酸分子，其包含编码标记物元件的序列，其中所述序列侧面为第一同源区
(HR1')
和第二同源区
(HR2')
，其中
HR1
与
HR1'
同源且
HR2
与
HR2'
同源，使得编码第二核酸分子中的标记物元件的序列经由同源重组而整合到第一核酸分子内
。
[0020]在一些实施例中，细胞是
ICP4
互补细胞
。
在一些实施例中，细胞补充
ICP4
和至少一种其它病毒基因
。
在一些实施例中，细胞补充
ICP4
和至少一种立即早期基因
。
在一些实施例中，细胞是
ICP4、ICP27
和
UL55
互补细胞
。
在一些实施例中，细胞是
ICP4、ICP22
和
ICP47
互补细胞
。
[0021]在一些实施例中，标记物元件是多肽
。
在一些实施例中，多肽通过荧光是可检测的
。
在一些实施例中，标记物元件是绿色荧光肽
。
在一些实施例中，该方法包括纯化表达标记物元件的病毒噬斑的步骤
。
[0022]在一些实施例中，本公开提供了制备包含变体单纯疱疹病毒
(HS本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种单纯疱疹病毒
(HSV)McKrae
株的变体，其基因组含有改变，使得所述变体不能表达由
SEQ ID NO:16
的氨基酸序列表征的功能性蛋白质
。2.
一种单纯疱疹病毒
McKrae
株的变体，其具有总体尺寸小于约
150,000
个碱基对的截短基因组，并且包括在对应于
SEQ ID NO:1
的残基
126049
至
130014
的元件内的一个或多个残基的缺失
。3.
一种包含变体单纯疱疹病毒
(HSV)McKrae
株基因组的载体，所述基因组含有改变，使得所述变体不能表达由
SEQ ID NO:2
的氨基酸序列表征的功能性蛋白质
。4.
根据权利要求3所述的载体，其中所述载体包含神经元特异性启动子
。5.
根据权利要求4所述的载体，其中所述神经元特异性启动子是降钙素基因相关肽
(CGRP)
启动子
。6.
根据权利要求3‑6中任一项所述的载体，其中所述载体包含人巨细胞病毒
(HCMV)
增强子
。7.
根据权利要求3‑6中任一项所述的载体，其中所述载体包含牛生长激素
(BGH)
多腺苷酸化信号
。8.
根据权利要求3‑7中任一项所述的载体，其还包含编码治疗性多肽的核酸
。9.
一种细胞，其用根据权利要求3‑8中任一项所述的载体进行转导
。10.
一种药物组合物，其包含根据权利要求3‑8中任一项所述的载体和药学可接受的载体
。11.
一种繁殖包含变体单纯疱疹病毒
(HSV)McKrae
株基因组的载体的方法，所述基因组包含改变，使得所述变体不能表达由
SEQ ID NO:16
的氨基酸序列表征的功能性蛋白质，所述方法包括以下步骤：
(i)
用所述载体感染含有编码
HSV
蛋白
ICP4
的
DNA
的经培养的
ICP4
互补细胞，和
(ii)
从步骤
(i)
的培养物中分离上清液
。12.
根据权利要求
11
所述的方法，其还包括通过色谱纯化上清液中的载体的步骤
。13.
根据权利要求
12
所述的方法，其还包括通过切向流过滤而浓缩所述纯化的载体的步骤
。14.
一种制备包含变体单纯疱疹病毒
(HSV)McKrae
株基因组的载体的方法，所述基因组包含改变，使得所述变体不能表达由
SEQ ID NO:16
的氨基酸序列表征的功能性蛋白质，并且其中所述载体表达标记物元件，所述方法包括温育用以下转染的细胞：
(a)
第一核酸分子：
(i)
包含
HSV McKrae
株基因组的一部分，但不编码由
SEQ ID NO:16
的氨基酸序列表征的功能性蛋白质...

【专利技术属性】
技术研发人员：D，
申请(专利权)人：普瑞菲根公司，
类型：发明
国别省市：