针对狂犬病病毒的单克隆抗体及应用制造技术

本发明专利技术公开针对狂犬病病毒的单克隆抗体及应用，属于单克隆抗体技术领域

【技术实现步骤摘要】
针对狂犬病病毒的单克隆抗体及应用


[0001]本专利技术属于单克隆抗体
，具体涉及针对狂犬病病毒的单克隆抗体及应用
。

技术介绍

[0002]狂犬病是一种由狂犬病病毒感染引起的人兽共患的急性高度致死性传染性疾病，人和几乎所有温血动物均容易感染狂犬病病毒，发病后几乎
100
％死亡，严重危害人类健康，是世界共同关注的重要公共卫生问题
。
[0003]狂犬病疫苗是用于暴露狂犬病病毒后预防狂犬病的特殊药物，且是预防狂犬病的唯一有效手段，狂犬病毒疫苗研发与生产过程中及时检测狂犬病病毒抗原含量对制备质量稳定高效的狂犬病疫苗的至关重要，目前常规的检测方法主要有酶联免疫吸附实验以及间接免疫荧光实验，因此，研究开发可大规模制备
、
低成本的且能够特异性性检测狂犬病病毒抗原含量的单克隆抗体显得尤为重要
。

技术实现思路

[0004]鉴于此，本专利技术的目的是提供针对狂犬病病毒的单克隆抗体及应用，本专利技术的单克隆抗体可大规模制备
、
成本低廉，且能够特异性性检测狂犬病病毒抗原含量
。
[0005]本专利技术目的是通过以下方式实现：
[0006]本专利技术提供一组杂交瘤细胞株，所述的杂交瘤细胞株包括杂交瘤细胞株
(Hybridoma cell line)A12H1
和杂交瘤细胞株
(Hybridoma cell line)F12G9
，于
2023
年
05
月
07
日保藏于中国典型培养物保藏中心，杂交瘤细胞株
A12H1
的保藏编号为
CCTCC NO:C202349
，杂交瘤细胞株
F12G9
的保藏编号为
CCTCC NO:C202348
，保藏地址为：湖北省武汉市武昌区八一路
299
号
。
[0007]本专利技术另一方面提供针对狂犬病病毒的单克隆抗体，所述的单克隆抗体是由上述的杂交瘤细胞株分泌所得，杂交瘤细胞株
A12H1
分泌的抗体为单克隆抗体
A12H1
，杂交瘤细胞株
F12G9
分泌的抗体为单克隆抗体
F12G9。
[0008]本专利技术另一方面上述的单克隆抗体在检测狂犬病病毒抗原中的应用
。
[0009]基于上述技术方案，进一步地，所述的狂犬病病毒包括
CTN
‑
1V
株
。
[0010]基于上述技术方案，进一步地，所述的应用具体为用于狂犬病疫苗中的抗原含量的检测
。
[0011]本专利技术还提供包含上述的单克隆抗体的检测狂犬病病毒抗原的试剂盒
。
[0012]基于上述技术方案，进一步地，单克隆抗体
F12G9
作为包被抗体，
HRP
标记单克隆抗体
A12H1
作为二抗
。
[0013]基于上述技术方案，进一步地，所述的试剂盒还包括显色试剂
、
终止试剂
、
封闭液
、
包被缓冲液
、
洗涤溶液
。
[0014]基于上述技术方案，进一步地，显色试剂为
TMB
显色液；终止试剂为硫酸溶液
。
[0015]基于上述技术方案，进一步地，包被缓冲液：
pH9.6
的碳酸盐缓冲溶液；封闭液为5％脱脂奶粉溶液；洗涤溶液为
PBS
缓冲液
。
[0016]本专利技术相对于现有技术具有的有益效果如下：
[0017]本专利技术筛选获得了2株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞，分泌的单克隆抗体与狂犬病病毒固定毒
(CTN
‑
1V
株
)
具有非常好的亲和力和灵敏度，单克隆抗体编号分别为
F12G9
和
A12H1
，对单克隆抗体类型测定显示
F12G9
为
IgG1
亚型，
A12H1
为
IgG2a
亚型，单克隆抗体效价可达
1:243k
，在
10
～
200ng
范围内
R2可达到
0.99
以上，线性良好，对狂犬病疫苗原液的特异性良好，本专利技术对狂犬病毒疫苗研发与生产过程中的质控中抗原含量的及时监测具有非常重要意义，在疫苗研发和生产检测中将会得到广泛应用，对于狂犬病疫苗质量控制具有重要的应用价值
。
附图说明
[0018]为了更清楚地说明本专利技术实施例，下面将对实施例涉及的附图进行简单地介绍
。
[0019]图1为单克隆抗体
F12G9
和
A12H1
的间接
ELISA
的检测结果图
。
[0020]图2为单克隆抗体
F12G9
和
A12H1
的双抗体夹心
ELISA
检测抗原含量的结果图
。
具体实施方式
[0021]下面结合实施例对本专利技术进行详细的说明，但本专利技术的实施方式不限于此，显而易见地，下面描述中的实施例仅是本专利技术的部分实施例，对于本领域技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，获得其他的类似的实施例均落入本专利技术的保护范围
。
[0022]实施例1杂交瘤细胞制备
[0023]本实施例中使用已灭活经纯化的狂犬病病毒固定毒
(CTN
‑
1V
株
)
免疫小鼠，为提高抗体灵敏度加强免疫小鼠，取免疫后小鼠血清进行抗体滴度检测，取稀释
1000
倍血清应用
ELISA
试验检测结果
OD
450
高于
2.0
的小鼠脾细胞与
SP2/0
细胞进行融合，用
HAT
培养液选择培养，融合后
10
～
15
天，取上清采用
ELISA
方法检测分泌的可以特异性结合狂犬病病毒
CTN
‑
1V
株的杂交瘤细胞株；检测结果
OD
450
值大于
1.0
，即可初步判定为阳性克隆；
[0024]对所得阳性克隆株采用有限稀释法进行亚克隆，经过2次亚克隆和
ELISA
筛选，得到5株具有中和狂犬病病毒活性的，稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞系
。
[0025]实施例2抗体有效性筛选
[0026]将稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞进行培养，分别接种小鼠腹腔，收集腹水，经纯化制备单克隆抗体
。
应本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一组杂交瘤细胞株，其特征在于，所述的杂交瘤细胞株包括杂交瘤细胞株
(Hybridoma cellline)A12H1
和杂交瘤细胞株
(Hybridoma cellline)F12G9
，于
2023
年
05
月
07
日保藏于中国典型培养物保藏中心，杂交瘤细胞株
A12H1
的保藏编号为
CCTCC NO:C202349
，杂交瘤细胞株
F12G9
的保藏编号为
CCTCC NO:C202348
，保藏地址为：湖北省武汉市武昌区八一路
299
号
。2.
针对狂犬病病毒的单克隆抗体，其特征在于，所述的单克隆抗体是由权利要求1所述的杂交瘤细胞株分泌所得，杂交瘤细胞株
A12H1
分泌的抗体为单克隆抗体
A12H1
，杂交瘤细胞株
F12G9
分泌的抗体为单克隆抗体
F12G9。3.
权利要求2所述的单克隆抗体在检测狂犬病病毒抗原中的应用
。4.
根据权利要求3所述的应用，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：高洪霞，柴晶，陈建民，周蕾，张敬武，王艳梅，陈楠，张婉婷，王诗丹，
申请(专利权)人：大连雅立峰生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：