劳氏粘虫在不同因子下稳定表达的内参基因组合及其应用制造技术

本发明专利技术公开了劳氏粘虫在不同因子下稳定表达的内参基因组合及其应用

【技术实现步骤摘要】
劳氏粘虫在不同因子下稳定表达的内参基因组合及其应用


[0001]本专利技术属于昆虫分子生物学
，具体涉及劳氏粘虫在不同因子下稳定表达的内参基因组合及其应用
。

技术介绍

[0002]劳氏粘虫
Leucania loryi Duponchel
，属鳞翅目，夜蛾科，秘夜蛾属，是一种世界范围内广泛分布的重要农业害虫
。
劳氏粘虫主要分布于我国的广东
、
甘肃
、
福建
、
四川
、
江西
、
湖南
、
湖北
、
浙江
、
江苏
、
山东
、
河南
、
河北等地
。
幼虫食性很杂，主要危害水稻
、
玉米
、
高粱
、
小麦等禾本科作物，以玉米和小麦为食发育较快，目前是玉米上是重要害虫之一
。
研究表明，劳氏粘虫在不同的地理位置其发生规律略有不同，在广东一年可发生6‑7代，理论推测广西一年可发生
5.8
‑
7.8
代，河南漯河
、
遂平发生3‑4代，但是此虫在河南
、
河北不能越冬，影响劳氏粘虫生长发育的其根本原因是气候温度
。
目前，国内对于劳氏粘虫的研究较少，主要集中于起始温度
、
有效积温
、
短时高温及劳氏粘虫取食性等问题的研究
。
劳氏粘虫常与草地贪夜蛾
、
棉铃虫
、
东方黏虫在玉米上混合发生，对玉米等作物造成严重威胁
。
目前对于劳氏粘虫的治理有多种方式，包括农业防治
、
化学防治
、
生物防治和物理防治，但从分子水平对劳氏粘虫的研究相对较少
。
近年来，随着测序技术的快速发展，多种参与发育，交配，能量代谢，觅食等生理过程的基因信息被相继报道
。
研究这些基因的功能，对于开发新的害虫防治技术具有重要意义
。
[0003]利用
qRT
‑
PCR
分析基因表达水平是现代分子生物学中的重要研究手段，具有定量准确
、
灵敏度高和高通量等特点
。
与传统的
PCR
相比，定量
qRT
‑
PCR
具有高度特异性
、
快速性和敏感性等优点，这使其常被用来研究昆虫的基因功能和调控
。
有研究发现，在合适内参参考下，不同环境下的基因能稳定表达，对基因的定量具有重要的作用
。
但研究发现，不同种类的昆虫在不同的实验条件下通常会选用不同的内参基因
。
目前，昆虫基因表达研究最常用的参考基因有
β
‑
肌动蛋白基因
(beta actin
，
β
‑
actin)、
延伸因子
1(elongation factor
‑
1alpha
，
EF1
‑
a)、
甘油醛
‑3‑
磷酸
‑
脱氢酶
(glyceraldehyde
‑3‑
phosphate dehydrogenase
，
GAPDH)、18S
核糖体
RNA(18S ribosomal RNA
，
18S rRNA)
和
α
‑
微管蛋白
(alpha tubulin
，
α
‑
TUB)
等
。
例如，小胸鳖甲不同发育历期中最佳内参基因组合是
EF1
α
、GAPDH
和
ACTB
，不同组织中最稳定的是
EF1
α
，低温处理时应选择
EF1a
和
ACTB
，基因组合
EF1
α
、TUB
和
ACTB
可在所有条件下使用
。
在褐飞虱若虫
、
成虫期荧光定量
PCR
内参基因的筛选实验中，内参基因
RPS11
在褐飞虱若虫时期表达稳定
。
在美国白蛾不同发育阶段的基因定量研究中，以
RPL12
和
EF1
β
作为内参基因；在不同温度处理的基因定量研究中，以
EF1
α
和
GAPDH
作为内参基因；在幼虫不同组织的基因定量研究中，以
ACT
和
RPS16
作为内参基因
。
同样地，在花绒寄甲荧光定量
PCR
分析中内参基因的研究中，
RPS、GAPDH
和
α
‑
Tubulin
的组合为最佳校正目标基因内参基因组合
。
然而，有关劳氏粘虫基因研究中内参基因筛选的相关内容报道较少
。
[0004]本专利技术以劳氏粘虫不同组织
、
不同饲料喂养的幼虫及性信息素合成激活肽
(PBAN)
处理与否的性腺为实验材料，基于前期转录组测序数据及其他鳞翅目昆虫中已报道的内参
基因序列信息，从中选取9个内参基因进行实验，利用
qRT
‑
PCR
技术，通过
GeNorm
，
BestKeeper
，
Δ
Ct
法
、NormFinder
和
RefFinder
软件对所得结果进行分析评估，获得劳氏粘虫在不同因子下稳定表达的内参基因组合
。
研究结果为劳氏粘虫在不同因子下筛选稳定表达的内参基因提供选择参考，也为后期深入挖掘劳氏粘虫功能基因奠定基础
。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供劳氏粘虫在不同因子下稳定表达的内参基因组合及应用，所述筛选方法能够在不同因子下得到稳定表达的内参基因组合，且所述内参组合能够正确校正目的基因的表达情况
。
[0006]本专利技术另一目的是提供一种劳氏粘虫在不同因子下稳定表达的内参基因组合的筛选方法
。
本专利技术提供以下技术方案：
[0007]1、
基于前期转录组测序数据及其他鳞翅目昆虫中已报道的内参基因序列信息，从中选取9个内参基因进行实验，并设计
qRT
‑
PCR
引物，
qRT
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种劳氏粘虫在不同因子下稳定表达的内参基因组合，其特征在与，劳氏粘虫在不同组织中稳定表达的内参基因组合
SOD
和
EF
；劳氏粘虫在不同食物饲养条件下的内参基因组合为
EF
和
Actin
；劳氏粘虫在
PBAN
处理条件下的内参基因组合为
RPL10
和
Actin。2.
根据权利要求1劳氏粘虫在不同因子下稳定表达的内参基因，其中，
SOD
的核苷酸序列如
ID 1
所示，
EF
的核苷酸序列如
ID 2
所示，
Actin
的核苷酸序列如
ID 3
，所示
RPL10
的核苷酸序列如
ID 4
所示；所述
SOD
作为稳定内参基因用于
qRT
‑
PCR
分析时所使用的引物序列为：正： ...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭培，王留洋，杨超霞，张国航，张涛，宁君，
申请(专利权)人：中国农业科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：