SjTR1制造技术

本发明专利技术属于分子生物学检测领域，具体地，涉及血吸虫的检测，更具体地，涉及

【技术实现步骤摘要】
SjTR1微卫星序列用于制备检测血吸虫病的试剂的用途


[0001]本专利技术属于分子生物学检测领域，具体地，涉及血吸虫的检测，更具体地，涉及
SjTR1
微卫星序列用于制备检测血吸虫病的试剂的用途
。

技术介绍

[0002]血吸虫病
(Schistosomiasis)
，俗称“大肚子病”，是由血吸虫引起的一种急
、
慢性病
。
感染人体的血吸虫分6种：日本血吸虫
、
曼氏血吸虫
、
埃及血吸虫
、
湄公河血吸虫
、
几内亚血吸虫和间插血吸虫，对人类造成主要伤害的血吸虫有3种：流行于亚洲的日本血吸虫
、
流行于拉美及中非的曼氏血吸虫以及流行于北非的埃及血吸虫
。
血吸虫病主要表现为入侵部位发生皮炎，伴有发热
、
腹痛腹泻
、
肝区压痛等症状
。
血吸虫病传染源难以完全消除
、
传播途径无法彻底切断，传播风险持续存在
。
[0003]诊断在血吸虫病防治工作中对控制及消除传染源发挥关键作用
。
常见的有粪便
、
尿液的标本检查，有时需要取肠道或膀胱组织的标本检查；有时也会采取血液化验来进行诊断
。
但这些测试不能表明感染的严重程度，存在局限性
。
[0004]核酸检测具有较高的敏感性和特异性
。
之前已建立的核酸诊断技术局限于现有靶点开发的引物探针，敏感性和特异性有待提高，例如
Li,Juan、Zhao,Guang
‑
Hui et.
报告了一种实时
PCR
测定结合高分辨率熔解
(HRM)
测定，以核
18S rDNA
的一部分为目标，以检测
、
识别和区分四种主要的血吸虫种类，但其检测来自血吸虫的基因组
DNA
，检测限定为
Ct
值
<30
时的最小基因组
DNA
量，为
10
‑5ng
，灵敏度有待提高，并且日本血吸虫和湄公河血吸虫熔解曲线的主峰值一样，均为
83.65℃。
二者差异点在于湄公河血吸虫熔解曲线主峰左侧有一个次峰，据此与日本血吸虫进行区分，不易于判读，可能会造成误判
。
[0005]因此，本领域需求一种产品能够更加快速有效的诊断血吸虫病，且灵敏度更高，特异性更好
。

技术实现思路

[0006]本文公开的主题是在湖南省科技创新计划资助的项目
(
项目编号：
2022WZ1025)
下做出的
。
[0007]有鉴于此，申请人以登录号为
NC_002544.1
的日本血吸虫基因序列作为检测靶点，发现了检测日本血吸虫的新靶点
SjTR1
微卫星序列
(SiTR1
区域
)
，所述基因序列为：
MW631938.1。
[0008]第一方面，本专利技术提供一种日本血吸虫
SjTR1
微卫星序列用于制备检测血吸虫病的试剂的用途
。
[0009]进一步地，所述试剂为
PCR
试剂；更进一步地，所述试剂为多重
PCR
试剂
。
[0010]在一些具体的实施方案中，所述试剂为引物和
/
或探针
。
[0011]使用本专利技术发现的新靶点制备的
PCR
检测试剂，相比现有的日本血吸虫的靶点，例如
SJR2
，其能够获得更高的灵敏度和特异性，特别地，在多重
PCR
的设计过程中，新靶点能够
使得整个体系获得更好的灵敏度和更好的特异性
。
[0012]第二方面，本专利技术提供了一种检测血吸虫病的组合物，包括
[0013]用于检测日本血吸虫
SjTR1
微卫星序列的上下游引物和探针；
[0014]用于检测曼氏血吸虫
SM1
‑7序列的上下游引物和探针；以及
[0015]用于检测埃及血吸虫
Dra1
序列的上下游引物和探针
。
[0016]进一步地，所述组合物还包括内标基因
。
在一些具体的实施方案中，内标是人管家基因
。
[0017]进一步地，上述本专利技术组合物的探针的荧光基团彼此互不相同且互不干扰
。
[0018]在本文中，“互不相同且互不干扰”是指组合物中每个探针所用的荧光基团是不一样的，并且不会影响彼此的检测，即可以利用不同的通道进行检测
。
例如可以使用
ATTO 425、Quasar705、FAM、HEX、ROX
和
CY5
，这些基团吸光值不接近，能选择不同的通道，因而不会互相干扰
。
[0019]在一些具体的实施方案中，
SjTR1
微卫星序列的探针的荧光报告基团为
FAM
；内标的探针的荧光报告基团为
HEX(
或
VIC)
；
SM1
‑7序列的探针的荧光报告基团为
ROX
；
Dra1
序列的探针的荧光报告基团为
CY5。
[0020]进一步地，所述组合物还包括：用于检测日本血吸虫
SJR2
序列的上下游引物和探针
。
[0021]增加上述引物和探针序列之后，本专利技术的组合物的灵敏度更高
。
[0022]在一些具体的实施方案中，检测日本血吸虫
SJR2
序列的探针可以与
SjTR1
微卫星序列的探针的荧光基团相同，也可以不同
。
[0023]在一些具体的实施方案中，检测日本血吸虫
SJR2
序列的上下游引物和探针如
SEO ID NO.1
～3所示
。
[0024]在一些具体的实施方案中，检测日本血吸虫
SjTR1
微卫星序列的上下游引物和探针是如
SEO ID NO.4
～6所示，或者
SEO ID NO.7
～9所示，或者
SEO ID NO.10
～
12
所示中的至少一对
。
[0025]在一些具体的实施方案中，检测日本血吸虫
SjTR1
微卫星序列的上下游引物和探针是如
SEO ID NO.4
～6所示，或者
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～9所示，或者
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种日本血吸虫
SjTR1
微卫星序列用于制备检测血吸虫病的试剂的用途
。2.
根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述试剂为
PCR
试剂
。3.
一种检测血吸虫病的组合物，其特征在于，所述组合物包括用于检测日本血吸虫
SjTR1
微卫星序列的上下游引物和探针
。4.
根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，检测日本血吸虫
SjTR1
微卫星序列的上下游引物和探针是如
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～6所示，或者
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～9所示，或者
SEO ID NO.10
～
12
所示中的至少一对
。5.
根据权利要求3或4所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括用于检测曼氏血吸虫
SM1
‑7序列的上下游引物和探针
、
用于检测埃及血吸虫
Dra1
序列的上下游引物和探针
、
用于检测日本血吸虫
SJR2
序列的上下游引物和探针，以及用于检测内标序列的上下游引物和探针中的至少一对
。6.
根据权利要求5所述的组合物，其特征在于，检测曼氏血吸虫
SM1
‑7序列的上下游引物和探针如
S...

【专利技术属性】
技术研发人员：明英姿，刘让蛟，程星，马洪昌，鲍文娟，杨悦，李俊辉，张宇，周杰，戴立忠，
申请(专利权)人：湖南圣维尔医学检验所有限公司中南大学湘雅三医院，
类型：发明
国别省市：