一种基于制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体涉及一种基于

【技术实现步骤摘要】
一种基于N
‑
GQDs荧光淬灭原理的尿液酪氨酸检测试剂及检测方法


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种基于
N
‑
GQDs
荧光淬灭原理的尿液酪氨酸检测试剂及检测方法
。

技术介绍

[0002]开发高敏感性的肿瘤早期筛查方法是提高肿瘤的早期诊断能力实现有效治疗肿瘤的关键
。
对羟基苯丙氨酸
(
又称酪氨酸，可简称
Tyr)
作为一种含有酚羟基的芳香族极性
α
‑
氨基酸，其在恶性肿瘤患者尿液中的水平相较于健康人尿液中的水平增高
50
％
‑
150
％
。
研究发现检测尿液中
Tyr
水平在早期肿瘤普查
、
疗效评估
、
高危人群随访观察等方面都具有较大的实用价值
。
目前，临床广泛使用的检测尿液
Tyr
的方法主要是滴定法，其检测原理为试剂与尿液中的
Tyr
发生特征显色反应，通过沉淀物颜色不同即可判定被测试者体内是否有相关细胞内代谢异常
。
然而，该方法存在诸多局限性：
①
无法实现定量检测：该方法通过判断沉淀物颜色变化，进而给出阴性
、
弱阳性
、
阳性的检测结果，无法实现定量分析；
②
检测结果判断不客观：检测人员裸眼观察沉淀物颜色并与标准比色卡进行对比，最终判定结果阴阳性，存在因检测人员主观判断影响检测结果的客观性；
③
不安全和不环保：试剂成份含有强酸和汞，检测过程中存在强酸腐蚀和汞危害检测人员健康，同时反应生成的汞盐可污染环境；
④
抗干扰能力弱：易受到尿液本身颜色，服用氨基酸类
、
激素类
、
保健药
、
中枢神经系统药物，尿液本身所含还原性物质
、PH
值以及无机盐的干扰，影响检测结果的准确性
。
此外，毛细管电泳紫外检测法
、
高效液相色谱法及液质联用法也可用于检测尿液中
Tyr。
然而这些方法因价格昂贵的专用检测仪器
、
技术操作复杂
、
分析时间较长且成本高
、
需要特定检测试剂和专业技术人员，最终这些限制其广泛使用，更不适合用于肿瘤疾病的筛查
。
[0003]针对尿液
Tyr
的研究，专利技术人所在的课题组进行了诸多的研究，并在前期申请了专利技术专利一种尿液
Tyr
定量检测试剂盒及其检测方法
(CN114813557A)
，但是，所述的试剂盒存在着
①
利用分光光度法检测吸光度，容易受到尿液本底颜色的干扰；
②
试剂组成中有铁氰化钾溶液，在检测反应过程中可能产生剧毒氰化物质，对操作人员和实验环境产生危害，并且铁氰化钾溶液见光容易分解，使得检测试剂盒不稳定；
③
检查灵敏度有待进一步优化的技术问题
。
因此，开发一种新的灵敏度高
、
特异性强
、
抗干扰能力强
、
安全环保且可定量检测尿液中
Tyr
的新检测方法对肿瘤筛查及早期诊断具有重要价值和临床意义
。
[0004]为了解决上述技术问题，专利技术人所在的课题组进行了持续的研究，研制出了一种基于
N
‑
GQDs
荧光淬灭原理的尿液酪氨酸检测试剂盒，所述的试剂盒有效的解决了上述技术问题，具有
①
使用荧光而非吸光度来反应
Tyr
浓度，不易受尿液本底颜色干扰以及检测人员的主观判断影响，并且其检测敏感性高
、
特异性强
、
抗干扰性强
、
选择性好
、
检测范围宽；
②
所需试剂构成简单，
N
‑
GQDs
的稳定性高，荧光寿命长，生物相容性好，成分稳定，便于储存，无污染且相对安全无毒；
③
检测灵敏度高等有益效果
。

技术实现思路

[0005]针对上述技术问题，本专利技术的首要目的是提供一种基于
N
‑
GQDs
荧光淬灭原理的尿液酪氨酸检测试剂，所述的试剂包括
PH
缓冲液，4‑
氨基安替比林溶液
、
氧化剂和氮掺杂石墨烯量子点分散液
。
[0006]优选的，所述的氧化剂为弱氧化剂
、
较强氧化剂
、
很强氧化剂或极强氧化剂中的一种或几种
。
[0007]优选的，所述的氧化剂包括三价钴盐
、
过硫酸盐
、
过氧化物
、
重铬酸钾
、
高锰酸钾
、
氧酸盐
、
浓硫酸
、
高碘酸钾
、
高氯酸或次碘酸中的一种或几种
。
[0008]优选的，所述的氧化剂在检测体系中浓度为
80
～
140
μ
L/L。
[0009]优选的，所述的氮掺杂石墨烯量子点分散液的制备方法如下：以柠檬酸为碳源
、
氨水为氮源，混合后置于有聚四氟乙烯的反应釜中高温加热反应，自然冷却，取反应釜中液体，加入纯水稀释，加热蒸发混合液体中未完全反应的氨水，用纯水定量稀释混合液体，得氮掺杂石墨烯量子点分散液
。
[0010]优选的，所述的
pH
缓冲液的
pH
范围为：9‑
10。
[0011]优选的，所述的试剂中4‑
氨基安替比林的浓度范围在检测体系中为
150
～
210
μ
L/L。
[0012]本专利技术的第二目的是提供一种尿液中酪氨酸的检测试剂盒，所述的检测试剂盒中含有所述的检测试剂
。
[0013]本专利技术的第三目的是提供所述的检测试剂所述的检测试剂盒在检测尿液酪氨酸中的应用
。
[0014]本专利技术的第四目的是提供一种基于
N
‑
GQDs
荧光淬灭原理的尿液酪氨酸检测方法，包括如下步骤：
[0015](1)
取样品，加入
PH
缓冲液；
[0016](2)
向上述溶液中加入4‑
氨基安替比林试剂，加盖充分混匀；
[0017](3)
步骤
(2)
得到的溶液中加入氧化剂试剂，加盖充分混匀，避光反应；
[0018](4)
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种基于
N
‑
GQDs
荧光淬灭原理的尿液酪氨酸检测试剂，其特征在于，所述的试剂包括
PH
缓冲液，4‑
氨基安替比林溶液
、
氧化剂和氮掺杂石墨烯量子点分散液
。2.
如权利要求1所述的尿液酪氨酸检测试剂，其特征在于，所述的氧化剂为弱氧化剂
、
较强氧化剂
、
很强氧化剂或极强氧化剂中的一种或几种
。3.
如权利要求2所述的尿液酪氨酸检测试剂，其特征在于，所述的氧化剂包括三价钴盐
、
过硫酸盐
、
过氧化物
、
重铬酸钾
、
高锰酸钾
、
氧酸盐
、
浓硫酸
、
高碘酸钾
、
高氯酸或次碘酸中的一种或几种
。4.
如权利要求3所述的尿液酪氨酸检测试剂，其特征在于，所述的氧化剂在检测体系中的浓度为
80
～
140
μ
L/L。5.
如权利要求1所述的尿液酪氨酸检测试剂，其特征在于，所述的氮掺杂石墨烯量子点分散液的制备方法如下：以柠檬酸为碳源
、
氨水为氮源，混合后置于有聚四氟乙烯的反应釜中高温加热反应，自然冷却，取反应釜中液体，加入纯水稀释，加热蒸发混合...

【专利技术属性】
技术研发人员：于海涛，薄琳，蔡远艳，
申请(专利权)人：兰州大学第一医院，
类型：发明
国别省市：