抗制造技术

本文公开了一种多核苷酸，其包含编码包含

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗EGFR嵌合抗原受体
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求
2021
年8月
17
日提交的标题为“抗
EGFR
芯片抗原受体”的美国临时专利申请
No.63/234090
；以及
2020
年
12
月8日提交的，标题为“密码子优化的
EGFR806CAR
治疗序列”的美国临时专利申请
No.63/122839
的优先权，其分别通过引用的方式明确并入本文
。
[0003]序列表引用
[0004]本申请与电子格式的序列列表一起提交
。
序列表是作为一个名为
SCRI348WOSEQLIST
的文件提供的，创建于
2021
年
12
月1日，大小约为
11KB。
序列表电子格式的信息以引用的方式全部明确并入本文
。


[0005]本专利技术的各方面通常涉及抗
EGFR
嵌合抗原受体
(CAR)
和含有这种
CAR
的
T
细胞
。
一些实施方案涉及抗
‑
EGFR
‑
CAR
的增强表达
、
表达抗
、EGFR CAR
的方法以及使用增强表达来靶向诸如胶质母细胞瘤
、
液体肿瘤或实体肿瘤的癌症的方法<br/>。

技术介绍

[0006]许多疗法被用于治疗癌症
。
如今，流行的治疗方法包括手术
、
化疗
、
放射治疗
、
激素治疗
、
靶向药物治疗和细胞治疗
。
对患有癌症或疾病的患者的细胞治疗是向有需要的患者注射细胞材料，例如活细胞
。
这可以包括输注多克隆或抗原特异性
T
细胞
、
活化杀伤细胞
、
自然杀伤细胞
、
树突状细胞或巨噬细胞
。
含嵌合抗原受体
(CAR)
的
T
细胞是癌症免疫治疗和病毒治疗的一种有希望的治疗途径，近年来在这方面取得了进展
。
[0007]CAR T
细胞治疗是一种免疫治疗，其中
T
细胞在实验室中分离并通过基因操作表达合成受体，合成受体识别细胞
(
例如癌细胞
)
上显示的特定抗原或蛋白质，然后将细胞重新注入患者体内
。
临床试验显示了抗肿瘤活性的有希望的证据；然而，
CAR T
细胞治疗仍然存在细胞活化不足
、
半衰期短以及针对癌症组织的靶向性低等问题
。
因此，迫切需要其他的
CAR T
细胞治疗方法
。

技术实现思路

[0008]本文提供的各种实施方案涉及包含编码抗
EGFR
嵌合抗原受体
(CAR)
的人密码子优化序列的多核苷酸
。
在一些实施方案中，所述人密码子优化序列包括
SEQ ID NO:1
所示序列
。
在一些实施方案中，所述多核苷酸还包含可操作连接的启动子
。
在一些实施方案中，所述启动子包含
EF1a
序列或
EF1a/HTLV
序列；优选人
EF1a
序列或人
EF1a/HTLV
序列
。
在一些实施方案中，所述启动子包含
SEQ ID NO:2
所示序列
。
[0009]在一些实施方案中，所述多核苷酸还包含至少一个编码自切割肽或
IRES
的序列，优选地，其中所述编码所述自切割肽或者
IRES
的序列密码子优化以在人类中表达
。
在一些实施方案中，所述自切割肽是
2A
自切割肽，例如
P2A
或
T2A
或两者
。
在一些实施方案中，所述编码自切割肽的序列包含
SEQ ID NO:3
和
SEQ ID NO:4
所示序列
。
[0010]在一些实施方案中，所述多核苷酸还包含编码一个或多个选择标志物的序列，其中编码一个或多个选择标志物的序列优选密码子优化以在人类中表达
。
在一些实施方案中，所述一个或多个选择标志物包括
DHFRdm。
在一些实施方案中，所述一个或多个选择标志物包括
SEQ ID NO:5
所示序列
。
[0011]在一些实施方案中，所述多核苷酸还包含编码
EGFRt
的序列，优选其中所述编码
EGFRt
的序列密码子优化以在人类中表达
。
在一些实施方案中，所述编码所述
EGFRt
的序列包括
SEQ ID NO:6
所示序列
。
[0012]在一些实施方案中，所述多核苷酸还包含编码一个或多个胞内信号结构域的序列，优选地，其中编码所述一个或更多胞内信号结构域的序列经密码子优化以在人类中表达
。
在一些实施方案中，所述胞内信号结构域包含
41BB
或
CD3
ζ
，或两者
。
在一些实施方案中，所述编码一个或多个胞内信号结构域的序列包括
SEQ ID NO:7。
[0013]在一些实施方案中，所述多核苷酸还包含编码跨膜结构域的序列，优选其中编码跨膜结构域的序列经密码子优化以在人类中表达
。
在一些实施方案中，所述跨膜结构域包含
CD28tm。
在一些实施方案中，编码所述跨膜结构域的序列包括
SEQ ID NO:8
所示序列
。
[0014]在一些实施方案中，所述多核苷酸还包含编码间隔区的序列，优选其中编码所述间隔区的序列经密码子优化以在人类中表达
。
在一些实施方案中，所述间隔区包括
IgG4
的一部分，例如
IgG4
的铰链区
。
在一些实施方案中，所述编码间隔区的序列如
SEQ ID NO:9
所示
。
在一些实施方案中，多核苷酸的序列如
SEQ ID NO:10
所示
。
[0015]如本文进一步公开的，各种实施方案提供了包含上述实施方案中所述多核苷酸中的任何一种的分离的细胞
。
在一些实施方案中，所述细胞是免疫细胞
。
在一本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.
一种多核苷酸，其包含编码抗
EGFR
嵌合抗原受体
(CAR)
的人密码子优化序列
。2.
根据权利要求1所述的多核苷酸，其中所述人密码子优化序列包括
SEQ ID NO:1
所示序列
。3.
根据权利要求1或2所述的多核苷酸，其还包含可操作地连接到所述人密码子优化序列的启动子
。4.
根据权利要求3所述的多核苷酸，其中所述启动子包含
EF1a
序列，或
EF1a/HTLV
序列，优选人
EF1a
序列或人
EF1a/HTLV
序列
。5.
根据权利要求4所述的多核苷酸，其中所述启动子包含
SEQ ID NO:2
所示序列
。6.
根据权利要求1‑5中任一项所述的多核苷酸，其还包含至少一个编码自切割肽或
IRES
的序列，优选其中所述编码自切割肽或者
IRES
的序列经密码子优化以在人类中表达
。7.
根据权利要求6所述的多核苷酸，其中所述自切割肽是诸如
P2A
或
T2A
或两者的
2A
自切割肽
。8.
根据权利要求7所述的多核苷酸，其中所述编码自切割肽的序列包含
SEQ ID NO:3
或
SEQ ID NO:4
所示序列
。9.
根据权利要求1‑8中任一项所述的多核苷酸，还包含编码一个或多个选择标志物的序列，其中编码所述一个或多个选择标志物的序列优选经密码子优化以在人类中表达
。10.
根据权利要求9所述的多核苷酸，其中所述一个或多个选择标志物包括
DHFRdm。11.
根据权利要求9所述的多核苷酸，其中所述编码所述一个或多个选择标志物的序列包括
SEQ ID NO:5
所示序列
。12.
根据权利要求1‑
11
中任一项所述的多核苷酸，其还包含编码
EGFRt
的序列，优选其中编码
EGFRt
的序列经密码子优化以在人类中表达
。13.
根据权利要求
12
所述的多核苷酸，其中所述编码
EGFRt
的序列包含
SEQ ID NO:6
所示序列
。14.
根据权利要求1‑
13
中任一项所述的多核苷酸，其还包含编码一个或多个胞内信号结构域的序列，优选地，其中编码所述一个或多个胞内信号结构域的序列经密码子优化以在人中表达
。15.
根据权利要求
14
所述的多核苷酸，其中所述胞内信号结构域包括
41BB
或
CD3
ζ
或两者
。16.
根据权利要求
14
所述的多核苷酸，其中所述编码所述一个或多个胞内信号结构域的序列包括
SEQ ID NO:7
所示序列
。17.
根据权利要求1‑
16
中任一项所述的多核苷酸，其还包含编码跨膜结构域的序列，优选其中编码所述跨膜结构区的所述序列经密码子优化以在人类中表达
。18.
根据权利要求
17
所述的多核苷酸，其中所述跨膜结构域包括
CD28tm。19.
根据权利要求
17
所述的多核苷酸，其中所述编码所述跨膜结构域的序列包括
SEQ ID NO:8
所示序列
。20.
根据权利要求1‑
19
中任一项所述的多核苷酸，其还包含编码间隔区的序列，优选地其中编码间隔区的序列经密码子优化以在人类中表达
。21.
根据权利要求
20
所述的多核苷酸，其中所述间隔区包括
IgG4
的一部分，例如
IgG4
的铰链区
。
22.
根据权利要求
20
所述的多核苷酸，其中所述编码间隔区的序列如
SEQ ID NO:9
所示
。23.
根据权利要求1所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸的序列如
SEQ ID NO:10
所示
。24.
一种分离的细胞，其包含权利要求1‑
23
中任一项所述的多核苷酸
。25.
根据权利要求
24
所述的分离的细胞，其中所述细胞是免疫细胞
。26.
根据权利要求
25
所述的分离的细胞，其中所述细胞是前体
T
细胞或造血干细胞
。27.
根据权利要求
26
所述的分离的细胞，其中所述细胞是
T
细胞
、B
细胞
、
自然杀伤细胞
、
抗原呈递细胞
、
树突细胞
、
巨噬细胞或诸如嗜碱性粒细胞
、
嗜酸性粒细胞
、
中性粒细胞或肥大细胞的粒细胞
。28.
根据权利要求
27
所述的分离的细胞，其中所述细胞是
CD4+T
细胞或
CD8+T
细胞
。29.
根据权利要求
28
所述的分离的细胞，其中所述细胞是
CD8+
细胞毒性
T
细胞，所述
CD8+
细胞毒性
T
细胞选自幼稚
CD8+T
细胞
、CD8+
记忆
T
细胞
、
中央记忆
CD8+T
细胞
、
调节性
CD8+T
细胞
、IPS
衍生的
CD8+T
细胞
、
效应记忆
CD8+T
细胞和混合
CD8+T
细胞
。30.
根据权利要求
28
所述的分离的细胞，其中所述细胞是
CD4+T
辅助细胞，所述
CD4+T
辅助细胞选自幼稚
CD4+T
细胞
、CD4+
记忆
T
细胞
、
中央记忆
CD4+T
细胞
、
调节性
CD4+T
细胞
、IPS
衍生的
CD4+T
细胞
、
效应记忆
CD4+T
细胞和混合
CD4+T
细胞
。31.
根据权利要求
24
‑
30
中任一项所述的分离的细胞，其中所述细胞对受试者是同种异体的，或对受试者是自体的
。32.
根据权利要求
24
‑
31
中任一项所述的分离的细胞，其中所述细胞是离体的
。33...

【专利技术属性】
技术研发人员：迈克尔，
申请(专利权)人：西雅图儿童医院，
类型：发明
国别省市：