一种肺脏脱细胞基质及其制备方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域

【技术实现步骤摘要】
一种肺脏脱细胞基质及其制备方法


[0001]本专利技术属于生物

、
材料学领域，具体涉及一种肺脏脱细胞基质及其制备方法
。

技术介绍

[0002]利用生物材料与组织工程的策略可以在体外构建出能够模拟体内复杂微环境的体外三维模型，有助于更全面的了解宿主
‑
病原体的相互作用
。
体外三维模型具有类似于在体的组织形态与生物学功能，其在疾病发病机制研究与药物筛选中具有明显优势
。
目前，亟需开发物理
、
化学及生物学特征更为仿生的新型生物支架材料用于体外三维模型的建立，使其具有天然组织或器官类似的结构与功能特性
。
[0003]脱细胞策略的出现为制备更为仿生的生物支架材料提供的新的契机
。
细胞外基质是由细胞分泌的生物大分子所构成的复杂网络，为细胞的生存及活动提供适宜的场所
。
其不仅发挥支持
、
连接
、
保护等物理作用，而且能够动态的对细胞产生全方位影响
。
脱细胞策略的关键是去除天然组织与器官中全部的细胞成分和遗传物质，并最大程度的保留细胞外基质的三维结构与组成成分
。
脱细胞基质材料由于保留了天然组织特定的结构与成分，且具有与天然组织相类似的力学特性，可以提供组织特异性微环境来支持细胞的黏附
、
增殖和分化，从而在各类疾病的体外三维模型研究方面具有巨大的潜力
。
脱细胞策略主要包括物理
、
化学和酶学方法，及上述不同方法的组合应用
。
物理法如冷冻
、
超声和搅拌等，对组织的三维结构破坏较为严重
。
酶学法需使用蛋白酶
、
核酸酶等，不仅成本较高，而且会破坏纤连蛋白
、
层粘连蛋白和弹性蛋白
。
化学法由于具有洗脱效率高
、
成本低等优势，是目前使用最为广泛的脱细胞方法
。
[0004]与其他实体组织不同，肺脏组织的结构疏松复杂，含有大量的支气管与肺泡结构，且包含气道和血管两套管路系统，这些复杂结构对肺脏脱细胞基质材料的制备提出了新的挑战
。

技术实现思路

[0005]为解决以上制备肺脏脱细胞基质难的问题，本专利技术提供了一种肺脏脱细胞基质的制备方法
。
本专利技术所提供方法制备得到的肺脏脱细胞基质可以去除天然肺脏组织中
95
％以上的
DNA
成分
、
能够较好保留糖胺聚糖成分
、
具有较好的胶原纤维网络结构
、
纤连蛋白与层粘连蛋白的组成与结构保留较为完整，为利用肺脏脱细胞基质构建更为仿生的体外三维肺组织模型奠定了良好的材料学基础
。
[0006]具体地，本专利技术提供以下技术方案：
[0007]第一方面，本专利技术提供了一种制备肺脏脱细胞基质的制备方法，所述方法包括以下步骤：
[0008]1)
取心肺组织，通过滞留针对肺脏进行
PBS
灌流；
[0009]2)PBS
沿气管注入肺脏，使双肺膨胀；
[0010]3)
动脉夹封闭气管，使
PBS
溶液留在肺部；
[0011]4)
放气后继续使用
PBS
灌注；
[0012]5)
使用
Triton X
‑
100、SDS、Chaps
依次灌流后使用
PBS
洗脱
。
[0013]优选地，所述
Triton X
‑
100
是1％的
Triton X
‑
100。
[0014]优选地，所述
SDS
是
0.1
％的
SDS。
[0015]优选地，所述
CHAPS
是
8mM CHAPS。
[0016]优选地，所述步骤
5)
中1％ Triton X
‑
100
灌流1‑
4h(
包括
1、1.5、2、2.5、3、3.5、4h)
；优选地，2‑
3h
；更优选地，
2.5h(
小时
)。
[0017]优选地，所述步骤
5)
中
0.1
％
SDS
灌流
0.5
‑
3h(
包括
0.5、1、1.5、2、2.5、3h)
；优选地，1‑
2h
；更优选地，
1.5h。
[0018]优选地，所述步骤
5)
中
8mM CHAPS
灌流
0.5
‑
3h(
包括
0.5、1、1.5、2、2.5、3h)
；优选地，1‑
2h
；更优选地，
1.5h。
[0019]优选地，所述步骤
5)
中
PBS
洗脱持续至少8小时
(
包括
8、9、10、11、12、13、14
或更多小时
)
；优选地，至少
10
小时；更优选地，至少
12h
；更优选地，
12h。
[0020]优选地，所述步骤
5)
中1％ Triton X
‑
100
灌流
2.5h
，
0.1
％
SDS
灌注
1.5h
，
8mM CHAPS
灌注
1.5h
，
PBS
洗脱
12h。
[0021]更优选地，所述步骤
5)
中1％ Triton X
‑
100
灌流
2.5h(
前
1h:3000
μ
L/min,
后
1.5h:5000
μ
L/min)
，
0.1
％
SDS
灌注
1.5h(5000
μ
L/min)
，
8mM CHAPS
灌注
1.5h(5000
μ
L/min)
，
PBS
洗脱
12h(5000
μ
L/min)。
[0022]优选地，所述心肺组织取自模型生物
。
[0023]优选地，所述模型生物包括哺乳动物或非哺乳动物
。
[0024]优本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种制备肺脏脱细胞基质的制备方法，所述方法包括以下步骤：
1)
取心肺组织，对肺脏进行
PBS
灌流；
2)PBS
沿气管注入肺脏，使双肺膨胀；
3)
动脉夹封闭气管，使
PBS
溶液留在肺部；
4)
放气后继续使用
PBS
灌注；
5)
使用
Triton X
‑
100、SDS、Chaps
依次灌流后使用
PBS
洗脱
。2.
如权利要求1所述的方法，所述
Triton X
‑
100
是1％的
Triton X
‑
100
，所述
SDS
是
0.1
％的
SDS
，所述
CHAPS
是
8mM CHAPS
；优选地，所述步骤
5)
中1％
Triton X
‑
100
灌流1‑
4h
；优选地，2‑
3h
；更优选地，
2.5h
；优选地，所述步骤
5)
中
0.1
％
SDS
灌流
0.5
‑
3h
；优选地，1‑
2h
；更优选地，
1.5h
；优选地，所述步骤
5)
中
8mM CHAPS
灌流
0.5
‑
3h
；优选地，1‑
2h
；更优选地，
1.5h
；优选地，所述步骤
5)
中
PBS
洗脱持续至少8小时；优选地，至少
10
小时；更优选地，至少
12h
；更优选地，
12h
；优选地，所述步骤
5)
中1％
Triton X
‑
100
灌流
2.5h
，
0.1
％
SDS
灌注
1.5h
，
8mM CHAPS
灌注
1.5h
，
PBS
洗脱
12h
；更优选地，所述步骤
5)
中1％
Triton X
‑
100
灌流
2.5h
，前
1h:3000
μ
L/min,
后
1.5h:5000
μ
L/min
；
0.1
％
SDS
灌注
1.5h
，
5000
μ
L/min)
；
8mM CHAPS
灌注
1.5h
，
5000
μ
L/min
；
PBS
洗脱
12h
，
5000
μ
L/min。3.
如权利要求1所述的方法，所述心肺组织取自模型生物；优选地，所述模型生物包括哺乳动物或非哺乳动物；优选地，所述模型生物包括大鼠
、
小鼠
、
羊
、
牛
、
马
、
猪
、
羊驼
、
兔子

【专利技术属性】
技术研发人员：魏化伟，张凯慧，王海滨，
申请(专利权)人：北京科昕恒业生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：