一种制造技术

本发明专利技术公开了一种

【技术实现步骤摘要】
一种HPLC
‑
MS/MS法检测血浆中瑞卢戈利的方法


[0001]本专利技术属于生物医药
，尤其涉及一种
HPLC
‑
MS/MS
法检测血浆中瑞卢戈利的方法
。

技术介绍

[0002]瑞卢戈利
(Relugolix)
为促性腺激素释放激素
(GnRH)
拮抗剂，对下丘脑垂体
GnRH
受体有选择性的拮抗作用，阻断
GnRH
的作用
。
其由日本武田制药与日本
ASKA
制药公司联合开发，于
2019
年1月8日获日本
PMDA
批准上市，商品名为瑞卢戈利用于治疗子宫肌瘤引起的疼痛
。
由日本武田制药与英国
Roivant
科技制药公司组建成立的英国
Myovant
科学生物制药公司向
FDA
提交上市申请，
2020
年
12
月获
FDA
批准上市，商品名为用于治疗前列腺癌
。
[0003]治疗性药物监测及仿制药临床研究时需要测定受试者或患者的血药浓度以研究其药动学行为
。
为了加速瑞卢戈利的临床应用，需要一种简便
、
准确
、
快速
、
灵敏度高的生物分析方法
。
目前，
Liying Xing
等r/>(An Efficient UPLC
‑
MS/MS Method Established to Detect RelugolixConcentration in Rat Plasma[J].ORIGINAL RESEARCH.2022(6)
，
13
：
874973.)
开发了一种高效的
UPLC
‑
MS/MS
法检测大鼠血浆中瑞卢戈利的浓度的方法，但该法分析灵敏度较低
(
定量范围为
0.7
‑
1000ng/mL)
，且该法使用来他替尼作为内标物质，不利于样品分析的准确性
。
[0004]基于现有技术中瑞卢戈利检测存在的问题，需要开发一种前处理操作简单，并兼顾灵敏度
、
准确度
、
分析速度的分析方法，以适用于临床研究大批量样本的准确分析
。

技术实现思路

[0005]为解决上述技术问题，本专利技术的目的是提供一种
HPLC
‑
MS/MS
法检测血浆中瑞卢戈利的方法
。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0007]一种
HPLC
‑
MS/MS
法检测血浆中瑞卢戈利的方法，包括以下步骤：
[0008](1)
预处理：在血浆样品中加入乙腈沉淀蛋白，离心后取上清液，加水稀释后，得供试品；
[0009](2)
采用
HPLC
‑
MS/MS
检测经过预处理的血浆样品，经内标定量法测定其中瑞卢戈利的含量，其中：
[0010]色谱条件：
[0011]色谱柱：
ZORBAX Eclipse XDB
‑
C18
色谱柱；
[0012]流动相
A
：含
0.2
％甲酸和
5mM
醋酸铵的水溶液，流动相
B
：乙腈；
[0013]梯度洗脱程序：0‑
0.5min
：流动相
B
为
45
％；
0.5
‑
1.0min
：流动相
B
为
45
％
→
85
％；
1.0
‑
1.5min
：流动相
B
为
85
％；
1.5
‑
1.6min
：流动相
B
为
85
％
→
45
％；
1.6
‑
2.0min
：流动相
B
为
45
％；
[0014]柱温：
35
‑
45℃
；
[0015]质谱条件：
[0016]离子源：电喷雾离子源；正离子扫描；多反应监测；喷射电压为
5000V
；离子源温度为
500℃
；
[0017]所述内标物质为瑞卢戈利
‑
d6。
[0018]在一些实施方式中，向血浆样品中加入内标溶液，经处理得到含内标物质的供试品；所述内标溶液为瑞卢戈利
‑
d6
经甲醇溶解后，以乙腈
‑
水
(50∶50
，
v/v)
稀释得到
。
在一些实施方式中，内标溶液的加入量为血浆样品的
0.5
‑2倍，优选为等体积
。
[0019]在一些实施方式中，步骤
(1)
中，所述血浆样品的体积为
30
‑
100
μ
L
，优选为
40
‑
60
μ
L
，例如
50
μ
L。
在一些实施方式中，血浆样品中瑞卢戈利的含量为
0.100
‑
60.0ng/mL。
[0020]在一些实施方式中，步骤
(1)
中，供试品中内标物质的含量为
1.00
‑
4.00ng/mL
，优选为
2.00ng/mL。
[0021]在一些实施方式中，步骤
(1)
中，血浆样品与乙腈的体积比为
1∶(1
‑
5)
，优选为
1∶(3
‑
5)
，例如
1∶4。
[0022]在一些实施方式中，步骤
(1)
中，离心后取的上清液，经加水稀释后，样品不易挥发，利于样品的保存和检测的准确度；加入的水量为上清液体积的
0.5
‑2倍，优选加水的量与上清液等体积
。
[0023]在一些实施方式中，步骤
(2)
中，柱温为
40℃
；流动相流速为
0.5mL/min
；进样量为
5.00
μ
L。
[0024]在一些实施方式中，步骤
(本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种
HPLC
‑
MS/MS
法检测血浆中瑞卢戈利的方法，包括以下步骤：
(1)
预处理：在血浆样品中加入乙腈沉淀蛋白，离心后取上清液，加水稀释后，得供试品；
(2)
采用
HPLC
‑
MS/MS
检测经过预处理的血浆样品，经内标定量法测定其中瑞卢戈利的含量，其中：色谱条件：色谱柱：
ZORBAX Eclipse XDB
‑
C18
色谱柱；流动相
A
：含
0.2
％甲酸和
5mM
醋酸铵的水溶液，流动相
B
：乙腈；梯度洗脱程序：0‑
0.5min
：流动相
B
为
45
％；
0.5
‑
1.0min
：流动相
B
为
45
％
→
85
％；
1.0
‑
1.5min
：流动相
B
为
85
％；
1.5
‑
1.6min
：流动相
B
为
85
％
→
45
％；
1.6
‑
2.0min
：流动相
B
为
45
％；柱温：
35
‑
45℃
；质谱条件：离子源：电喷雾离子源；正离子扫描；多反应监测；喷射电压为
5000V
；离子源温度为
500℃
；所述内标物质为瑞卢戈利
‑
d6。2.
根据权利要求1所述的
HPLC
‑
MS/MS
法检测血浆中瑞卢戈利的方法，其特征在于，向血浆样品中加入内标溶液，经处理得到含内标物质的供试品；所述内标溶液为瑞卢戈利
‑
d6
经甲醇溶解后，以乙腈
‑
水，
50
：
50
，
v/v
，稀释得到
。3.
根据权利要求2所述的
HPLC
‑
MS/MS
法检测血浆中瑞卢戈利的方法，其特征在于，内标溶液的加入量为血浆样品的
0.5
‑2倍，优选为等体积
。4.
根据权利要求1所述的
HPLC
‑
MS/MS
法检测血浆中瑞卢戈利的方法，其特征在于，步骤
(1)
中，所述血浆样品的体积...

【专利技术属性】
技术研发人员：史中杰，陈云辉，姜金方，
申请(专利权)人：苏州方昆医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：