一种用于检测肺结节良恶性的引物对制造技术

本发明专利技术属于生物医药领域，更具体地，涉及一种用于检测肺结节良恶性的引物对

【技术实现步骤摘要】
ID NO.15
所示的第一检测探针；和
/
或，
SEQ ID NO.8
～9所示的第二甲基化引物对和
SEQ ID NO.16
所示的第二检测探针
。
[0013]本专利技术还提供了一种用于检测肺结节良恶性的试剂盒，其包括所述引物对或所述引物探针组合
。
[0014]优选地，所述试剂盒还包括内参基因的检测引物对及检测探针
、DNA
提取试剂
、DNA
纯化试剂
、
甲基化转化试剂
、
扩增试剂
、
阳性对照品和阴性对照品中的一种或多种
。
[0015]优选地，所述检测探针的
5'
端包含有荧光报告基团，
3'
端包含有荧光淬灭基团
。
[0016]本专利技术还提供了所述引物对或所述引物探针组合或所述试剂盒在制备肺结节良恶性诊断产品中的应用
。
[0017]优选地，所述恶性肺结节包括实性肺结节和亚实性肺结节中的至少一种
。
[0018]优选地，所述肺结节良恶性诊断产品包括试剂盒
、
芯片和测序文库中的一种或多种
。
[0019]总体而言，通过本专利技术所构思的以上技术方案与现有技术相比，具有以下有益效果：
[0020](1)
本专利技术提供的一种用于检测肺结节良恶性的引物对
、
引物探针组合
、
试剂盒，通过检测样本中
TPM4P1
基因
CpG
岛上的靶区域的甲基化水平可以有效区分恶性肺结节患者和良性肺结节患者，提供了能够用于肺结节良恶性检测的生物标志物，该标志物对于肺部结节良恶性检测具有较好的灵敏性和特异性，能准确判别良恶性肺结节，对于及时诊断
、
改善预后
、
降低死亡率有重要意义
。
[0021](2)
本专利技术提供的试剂盒能够有效区分恶性肺结节患者和良性肺结节受试者，实现低侵袭性
、
低成本
、
高灵敏性
、
高特异性的检测肺结节良恶性，其检测恶性肺结节血液样本的总灵敏性可达
88.1
％，其中，检测实性结节的灵敏性可达
88.9
％，检测亚实性结节的灵敏性可达
87.5
％
。
此外，该试剂盒检测良性肺结节血液样本的特异性可达
92.1
％，能够降低假阴性结果的检出，检查准确度高
。
具体实施方式
[0022]为了使本专利技术的目的
、
技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明
。
应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术
。
[0023]除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同
。
本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术
。
[0024]术语“诊断”是指确定受试者的健康状态，涵盖检测疾病的存在与否
、
对治疗手段的反应
、
复发风险评估
、
癌变风险和癌变程度的评估
、
预后判断等方面
。
在一些情况下，术语“诊断”指的是作为一个单一因素用于确定
、
验证或确认患者的临床状态
。
一些实施例中，“检测”肺结节良恶性是指检测疾病的存在与否，即判断受试者是否患有恶性肺结节
。
[0025]术语“受试者”是指接受观察
、
检测或实验的对象
。
一些实施例中，受试者可以是哺乳动物
。
哺乳动物包括但不限于灵长类
(
包括人和非人灵长类
)
以及啮齿动物
(
例如，小鼠和大鼠
)。
一些实施例中，哺乳动物可以是人
。
[0026]术语“样本”或“样品”包括从任何个体
(
较佳地为人
)
或分离的组织
、
细胞或体液
(
如血浆
)
中获得的
、
适合于
DNA
甲基化状态检测的物质
。
例如，所述样本可以包括但不限于：血液样本
、
组织样本
(
如石蜡包埋样本
)、
细胞样本；较佳地，所述样本包括但不限于：血液样本
、
血浆样本
、
血清样本，或其组合
。
[0027]术语“寡核苷酸”或“多核苷酸”或“核苷酸”或“核酸”是指具有两个或更多个脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸的分子，优选多于三个，并且通常多于十个
。
确切的大小将取决于许多因素，而所述因素又取决于寡核苷酸的最终功能或用途
。
寡核苷酸可以通过任何方式产生，包括化学合成
、DNA
复制
、
逆转录或其组合
。DNA
的典型脱氧核糖核苷酸是胸腺嘧啶
、
腺嘌呤
、
胞嘧啶和鸟嘌呤
。RNA
的典型核糖核苷酸是尿嘧啶
、
腺嘌呤
、
胞嘧啶和鸟嘌呤
。
[0028]术语“甲基化”为
DNA
化学修饰的一种形式，能够在不改变
DNA
序列的前提下，改变遗传表现
。DNA
甲基化是指在
DNA
甲基转移酶的作用下，在基因组
CpG
二核苷酸的胞嘧啶第5号碳位共价结合一个甲基基团
。DNA
甲基化能引起染色质结构
、DNA
构象
、DNA
稳定性及
DNA
与蛋白质相互作用方式的改变，从而调控基因表达
。
[0029]术语“甲基化水平”指的是一段
DNA
序列中一个或多个
CpG
二核苷酸中的胞嘧啶是否发生甲基化
、
或发生甲基化的频率
/
比例
/
百分数，既代表定性的概念又代表定量的概念
。
在实际应用中，可根据实际情况采用不同的检测指标比较
DNA
甲基化水平
。
如在一些情况下，可根据样本检测的
Ct
值进行比较；在一些情况下，可计算样本中基因甲基化的比例，即甲基化分子数
/(
甲基化分子数
+
非甲基化分子数
)
×
100
，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种用于检测肺结节良恶性的引物对，其特征在于，其为用于检测样本中肺结节良恶性生物标志物的甲基化水平的引物对，所述肺结节良恶性生物标志物选自
TPM4P1
基因
CpG
岛上的靶区域
。2.
根据权利要求1所述的引物对，其特征在于，以
GRCh38.p14
为参考基因组，所述
TPM4P1
基因
CpG
岛上的靶区域选自
Chr10:100115071
‑
100115478
负链的全长或部分区域
。3.
根据权利要求1或2所述的引物对，其特征在于，所述引物对包括用于检测
Chr10:100115071
‑
100115478
负链的全长或部分区域的甲基化水平的甲基化引物对，所述甲基化引物对包括
SEQ ID NO.4
～5所示的第一甲基化引物对；和
/
或，
SEQ ID NO.8
～9所示的第二甲基化引物对
。4.
根据权利要求3所述的引物对，其特征在于，所述引物对还包括用于检测
Chr10:100115071
‑
100115478
负链的全长或部分区域的甲基化水平的非甲基化引物对；所述引物对包括
SEQ ID NO.4
～5所示的第一甲基化引物对和
SEQ ID NO.6
～7所示的第一非甲基化引物对；和
/
或，
SEQ ID NO.8
～9所示的第二甲基化引物对和
SEQ ID NO.10
...

【专利技术属性】
技术研发人员：李书杨，万慧，阮彦添，梁嘉琳，袁雨文，王青，
申请(专利权)人：武汉艾米森生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：