嗜酸乳杆菌制造技术

本发明专利技术公开了嗜酸乳杆菌

【技术实现步骤摘要】
嗜酸乳杆菌
LS001
，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为
CGMCC No.23649
，保藏日期为
2021
年
10
月
22
日，保藏机构地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，分类命名：嗜酸乳杆菌
Lactobacillus acidophilus。
嗜酸乳杆菌
LS001
的
16SrDNA
序列如
SEQ ID NO.1
所示
。
[0012]实施例
2 嗜酸乳杆菌
LS001
后生元的制备
S1、
种子液的制备菌种
LS001
在
MRS
液体培养基中进行活化，将
3%
接种量接入到
100mL MRS
液体培养基中，置于
37℃
条件下扩大培养
12h
，制得嗜酸乳杆菌
LS001
种子液，活菌数为5×
109cfu/mL
；
S2、
菌种发酵将种子液按
3%
接种量接种到发酵培养基中，置于
37℃
条件下发酵
20h
，得到发酵液；
S3、
后生元制备在常温条件下，将发酵液在
6000rpm
离心
30min
，弃上清，取湿菌泥加入
30
‑
50mg/mL
溶菌酶，
37℃
条件下保温
30min
，再加入等量灭菌玉米淀粉，均匀搅拌，造粒，
40
目过筛后， 沸腾干燥，制得嗜酸乳杆菌
LS001
后生元
。
[0013]实施例3[0014]人体过敏根本原因是免疫系统，通过实验对嗜酸乳杆菌与免疫反应的关系进行研究
。
嗜酸乳杆菌
LS001
对吞噬细胞的吞噬能力的影响
。
[0015]在体内腹腔巨噬细胞能吞噬鸡红细胞，据此判断巨噬细胞的吞噬功能
。
[0016]仪器和材料：显微镜
、
鸡红细胞
、
丙酮
、
甲醇
、
生理盐水
、Giemsa
染液
。
[0017]实验小鼠雄性
40
只，体重
20
±
5g
，分为
A、B、C、D
四组，
A
组对照组，
B
组低剂量组，
C
组中剂量组，
D
组高剂量组，
A、B、C、D
四组小鼠均适应环境饲养7天，然后
B
组小鼠每天饲喂嗜酸乳杆菌
LS001
菌悬液（总菌数不少于3×
109个
/mL
）
0.5mL
，
C
组小鼠每天饲喂嗜酸乳杆菌
LS001
菌悬液（总菌数不少于9×
109个
/mL
）
0.5mL
，
D
组小鼠每天饲喂嗜酸乳杆菌
LS001
菌悬液（总菌数不少于
2.7
×
10
10
个
/mL
）
0.5mL
，
A
组小鼠饲喂相同体积的蒸馏水
。
[0018]实验步骤
S1、
鸡红细胞悬液制备，取鸡血置于有玻璃珠的锥形瓶中，朝一个方向充分摇动，以脱纤维
。
用生理盐水洗涤2～3次，离心（
2000r/min
，
10min
），去上清，用生理盐水配成
20%
（
v/v
）的鸡红细胞悬液
。
[0019]S2、
吞噬功能测定，每只小鼠腹腔注射
20%
鸡红细胞悬液
1mL。
间隔
30min
‑
1.5h
，颈椎脱臼处死动物，将其仰位固定于鼠板上，正中剪开腹壁皮肤，经腹腔注入生理盐水
2mL
，转动鼠板
1min。
然后吸出腹腔洗液
1mL
，平均分滴于2片载玻片上，放入垫有湿沙布的搪瓷盒内，移置
37℃
孵箱温育
30min。
孵毕，于生理盐水中漂洗，以除去未贴片细胞
。
晾干，以
1:1
丙酮甲醇溶液固定，
4%
（
v/v
）
Giemsa
‑
磷酸缓冲液染色
3min
，再用蒸馏水漂洗晾干
。
[0020]S3、
油镜下计数巨噬细胞，每张片计数
100
个，按下式计算吞噬百分率和吞噬指数
。
[0021]；
。
[0022]在计数时，应同时观察鸡红细胞被消化的程度
。
借以判定巨噬细胞吞噬与消化功能，通常分为4级：
I
级：未消化
。
被吞噬的鸡红细胞完整，胞质浅红或浅黄带绿色，胞核浅紫色
。
[0023]II
级：轻度消化
。
胞质浅黄绿色
、
胞核固缩呈紫蓝色
。
[0024]III
级：重度消化
。
胞质淡染，胞核淡浅灰色
。
[0025]IV
级：完全消化
。
巨噬细胞内仅见形态类似鸡红细胞大小的空泡，边缘整齐，胞核隐约可见
。
[0026]以吞噬百分率或吞噬指数表示小鼠巨噬细胞的吞噬能力
。
结果如表1所示：表 1
；注：
*
与对照组比较，
P
＜
0.05。
[0027]由表1可知，本专利技术在喂食嗜酸乳杆菌
LS001
菌悬液后，能增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能，随着喂食嗜酸乳杆菌
LS001
菌悬液剂量（总菌数）的增加，小鼠的吞噬功能增强，低
、
中
、
高剂量组与对照组相比均有显著差异性（
P
＜
0.05
）
。
[0028]实施例
4 嗜酸乳杆菌
LS001
抗过敏功能试验实验动物小鼠，雄性，体重
18
‑
20g
，
36
只
。
[0029]试剂与仪器卵清白蛋白（
OVA
）；氢氧化铝：分析纯；无菌生理盐水；...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
嗜酸乳杆菌
LS001
后生元在制备抗过敏药物中的应用，其特征在于：嗜酸乳杆菌
LS001
后生元是由嗜酸乳杆菌
LS001
经处理得到的，嗜酸乳杆菌
LS001
保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为
CGMCC No.23649
，保藏日期为
2021
年
10

【专利技术属性】
技术研发人员：韩清波，郭芳先，李华文，马乐辉，刘瑞峰，李云旭，王海波，陈艺，高国久，刘金昉，
申请(专利权)人：天津小薇生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：