三金属纳米酶的制备方法及细胞表面蛋白原位检测方法技术

本发明专利技术公开了三金属纳米酶的制备方法及细胞表面蛋白原位检测方法，检测方法包括：使用

【技术实现步骤摘要】
三金属纳米酶的制备方法及细胞表面蛋白原位检测方法


[0001]本专利技术涉及免疫荧光检测的
，尤其涉及一种三金属纳米酶的制备方法及细胞表面蛋白原位检测方法
。

技术介绍

[0002]免疫学分析方法是一种应用最为广泛的生物学检测方法，它基于抗体
‑
抗原的特异性识别，具有高灵敏度
、
高特异性和高通量的优势
。
荧光免疫分析的概念最初是在二十世纪四十年代由
Albert H. Coons
检测肺炎球的时候提出来的
。
普通的荧光免疫分析法，是荧光基团代替了酶
,
产生荧光信号
,
可以检测目标蛋白的存在和浓度
,
常用的荧光基团包括荧光有机染料
、
纳米粒子
、
偶联聚合物
。
荧光免疫分析凭借其较高的灵敏度广泛用于各类研究和临床诊断
。
但因该检测方法存在灵敏度低，检测范围窄等缺点，因此我们在该体系中引入了酪胺信号放大体系，即在过氧化氢存在时本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种三金属纳米酶的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
S11、
钯核制备，使用聚乙烯吡咯烷酮
、
抗坏血酸
、
溴化钾溶于水中，加入三颈烧瓶于
75
‑
85℃
预热，四氯钯酸钠快速注入反应液中，待反应溶液颜色由棕色转变为黑色即反应结束，使用丙酮和去离子水多次清洗，得到钯核溶液
。2.S12、
三金属纳米粒子制备，使用聚乙烯吡咯烷酮
、
抗坏血酸
、
溴化钾及上述钯核溶液溶于
2~10 mL
乙二醇中，在
90~120℃
条件下搅拌
30min
，然后快速升温至
180~210℃
，将 RuCl3乙二醇溶液慢慢注入上述混合溶液中，注入完毕后，再将 Na3IrCl6乙二醇溶液慢慢注入，反应结束后，使用丙酮和去离子水多次清洗，得到三金属纳米粒子作为所述三金属纳米酶
。3.
根据权利要求1所述三金属纳米酶的制备方法，其特征在于，所述使用丙酮和去离子水多次清洗，得到三金属纳米粒子作为所述三金属纳米酶之后，还包括：
S13、
三金属纳米粒子标记
scFv
制备，在三金属纳米粒子中加入
HS
‑
PEF
‑
COOH
搅拌，离心去除多余的
PEG
后加入
NHS
和
EDCI
活化，最后加入
scFv
蛋白偶联，震荡混匀
、
恒温孵育后；离心
‑
弃上清液，并加入
PBS
缓冲液，重复两次；最终得到的纳米酶标记抗体复合物，其中
Pd@Ru@Ir
三金属纳米粒子的粒径为
10~100 nm
；所述三金属纳米粒子与
scFv
之间的比例为
1 mL:(0 .0125~0.5) mg。4.
根据权利要求1或2所述三金属纳米酶的制备方法，其特征在于，所述钯核的粒径为
10~100 nm
，所述钯核外层合金壳的厚度为
1.5~10nm。5.
根据权利要求3所述三金属纳米酶的制备方法，其特征在于，所述四氯钯酸钠快速注入反应液，并在
80℃
下持续反应
2~5 h。6.
根据权利要求5所述三金属纳米酶的制备方法，其特征在于，所述
Na3IrCl6乙二醇溶液中
Na3IrCl6的浓度为 0.025~0.2 mg/mL
；所述
RuCl3乙二醇溶液中
RuCl3的浓度为
0.015~0.1 mg/mL
，
Na3IrCl6乙二醇溶液及

【专利技术属性】
技术研发人员：李杉，罗萌，张雷，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：