一种穿膜肽制造技术

本发明专利技术公开了一种穿膜肽

【技术实现步骤摘要】
一种穿膜肽R9以非融合形式递送蛋白质分子的递送方法


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种穿膜肽
R9
以非融合形式递送蛋白质分子的递送方法
。

技术介绍

[0002]细胞穿膜肽是具有穿越细胞膜能力的短肽
(
一般少于
30
个氨基酸
)
，一般带有正电荷
。
由于其特殊的穿膜能力，细胞穿膜肽一直受到人们的广泛关注，并被应用于各类分子的递送，包括蛋白质
、
核酸和小分子化合物
。
目前细胞穿膜肽可以通过共价结合和非共价结合的方式与被递送分子的蛋白质分子进行连接，其中应用最为广泛的是将穿膜肽与蛋白质通过融合表达形式连接，然后利用融合蛋白进行体内体外递送
。
因为这种方式对于穿膜肽和被递送分子的理化性质
、
分子量和结构等的要求不高，因此这种方式目前是使用最广泛的
。
[0003]穿膜肽与被递送分子的结合方式分为共价结合，如将穿膜肽和蛋白质分子进行融合表达，以及通过简单的混合形成的非共价结合这两种方式
。
目前穿膜肽一般会采用共价结合的方式进行分子的跨膜递送，通过构建
TAT
与
RNA
结合蛋白
(HuR)
的融合蛋白来通过竞争性阻断
HuR
与其伴侣的相互作用来抑制促炎基因表达
。
但是因为非共价结合方式的便捷性，关于其研究也在逐渐引起关注r/>。
人乳头瘤病毒
HPV
的癌蛋白
E7
与
Pep
‑1的复合物通过离子键等相互作用形成稳定的纳米颗粒，并以
293
：1的摩尔比
(E7
：
Pep
‑
1)
有效地转染在
HEK
‑
1T
细胞系中
。
有研究者利用生物素化的
TAT
与亲和素进行亲和作用，将其递送到
RBL
‑
2H3
细胞内部
。
科学家们研究了不同长度精氨酸序列的穿膜能力，结果发现少于6个精氨酸的小肽的穿膜能力较差
。Wender
等人通过动力学测量发现，聚9精氨酸
(R9
穿膜肽
)
的穿膜能力更好
(P A Wender DJM
等，
Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America,2000,97(24):13003
‑
8)。
因此
R9
作为一种阳离子型的递送载体已经被用于递送各种分子，例如，
R9
可以递送存活素至神经母细胞瘤细胞中，增加了细胞增殖和分裂
(Baratchi S
等，
J Neuroimmunol,2010,227(1
‑
2):120
‑
32)
；
R9
也被用来递送整合素至
TK
‑7细胞中，从而降低炎症活性
(Krissansen GW
等
,Eur J Immunol,2006,36(8):2203
‑
14)。

技术实现思路

[0004]针对现有技术的问题，本专利技术提供了一种穿膜肽
R9
以非融合形式递送蛋白质分子的递送方法
。
[0005]为了解决现有技术的问题，本专利技术提供了如下技术方案：本专利技术的一种穿膜肽
R9
以非融合形式递送蛋白质分子的递送方法，包括如下步骤：通过简单混合穿膜肽
R9
与蛋白质分子，通过非键合作用实现蛋白质的操作简便
、
成本低和安全性好的跨膜递送
。
[0006]进一步地，所述的穿膜肽
R9
的氨基酸序列如
SEQ ID NO
：1所示，所述的蛋白质分子为
EGFP
或
A5
‑
RFP(Annexin5
‑
RFP)
或
A5
‑
EGFP(Annexin5
‑
EGFP)。
[0007]进一步地，所述的蛋白质分子为分子量为
26.7Kda
的
EGFP
蛋白
、64.5KDa
的
A5
‑
RFP
蛋白质或分子量为
67KDa
的
A5
‑
EGFP
蛋白质；穿膜肽
R9
在非融合形式下可以成功地将蛋白质递送进入不同细胞系内
。
[0008]更进一步地，所述的细胞系为
A549
细胞系
、B16F10
细胞系
、MCF
‑7细胞系
、HCE
‑
T
细胞系或
Hacat
细胞系
。
[0009]进一步地，所述的穿膜肽
R9
递送蛋白质进入细胞的能力与穿膜肽
R9
肽浓度呈现正相关
。
[0010]进一步地，所述的穿膜肽
R9
以非融合形式递送蛋白质分子进入细胞器线粒体
。
[0011]更进一步地，在未对穿膜肽
R9
进行任何修饰的情况下，便实现了分子量为
26.7KDa、64.5KDa
或
67KDa
的蛋白质的跨膜递送
。
[0012]本专利技术所述的基于穿膜肽
R9
或
R9
衍生的穿膜肽以非融合形式递送蛋白质分子的递送方法在活体动物及其角膜组织和皮肤组织递送药物中的应用
。
[0013]本专利技术所述的基于穿膜肽
R9
或
R9
衍生的穿膜肽以非融合形式递送蛋白质分子的递送方法在药物递送中的应用
。
[0014]本专利技术所述的基于穿膜肽
R9
或
R9
衍生的穿膜肽以非融合形式递送蛋白质分子的递送方法在活体动物及其角膜组织和皮肤组织递送药物中的应用
。
[0015]本专利技术所述的基于穿膜肽
R9
或
R9
衍生的穿膜肽以非融合形式递送蛋白质分子的递送方法在药物递送中的应用
。
[0016]与现有技术相比，本专利技术具有如下优点：
(1)
本专利技术中选用的穿膜肽
R9
，
R9
是阳离子型穿膜肽
。
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种穿膜肽
R9
以非融合形式递送蛋白质分子的递送方法，其特征在于包括如下步骤：通过简单混合穿膜肽
R9
与蛋白质分子，通过非键合作用实现蛋白质的跨膜递送
。2.
根据权利要求1所述的基于穿膜肽
R9
以非融合形式递送蛋白质分子的递送方法，其特征在于：所述的穿膜肽
R9
的氨基酸序列如
SEQ ID NO
：1所示，所述的蛋白质分子为
EGFP
或
A5
‑
RFP
或
A5
‑
EGFP。3.
根据权利要求1所述的基于穿膜肽
R9
以非融合形式递送蛋白质分子的递送方法，其特征在于：所述的蛋白质分子为分子量为
26.7KDa、64.5KDa
或
67KDa
的蛋白质；穿膜肽
R9
在非融合形式下可以成功地将蛋白质递送进入不同细胞系内
。4.
根据权利要求3所述的基于穿膜肽
R9
以非融合形式递送蛋白质分子的递送方法，其特征在于：所述的细胞系为
A549
细胞系
、B16F10
细胞系
、MCF
‑7细胞系
、HCE
‑...

【专利技术属性】
技术研发人员：华子春，窦佳，
申请(专利权)人：江苏靶标生物医药研究所有限公司，
类型：发明
国别省市：