具有双重肝癌靶向性的甘草次酸-转铁蛋白纳米粒及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了具有双重肝癌靶向性的甘草次酸

【技术实现步骤摘要】
具有双重肝癌靶向性的甘草次酸
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转铁蛋白纳米粒及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于抗肿瘤
，具体涉及一种甘草次酸受体(GA
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R)和转铁蛋白受体(Tf
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R)共介导的肝癌细胞靶向纳米粒的制备方法及应用。

技术介绍

[0002]我国是肝癌的高发区，五年生存率仅为10.1％，死亡人数占全球肝癌发病死亡人数的45％。早期肝癌的首选治疗是肝移植和手术切除，但肝供体短缺，手术切除的2年复发率高达50％；肝癌又因发病隐匿，早期诊断困难，发展迅速等特点，使患者在确诊时就已丧失手术机会。因此，化疗成为肝癌治疗的重要手段。全身性化疗或多种疗法的联合治疗被推荐作为中晚期肝癌一线治疗方案，然而当前临床所应用的化疗药物普遍生物利用率低、靶向性差，发挥疗效的同时伴随较严重的全身性毒副作用，如骨髓抑制、胃肠道反应、超敏反应等，严重限制了其治疗效果和临床应用。甚至作为晚期肝癌一线标准治疗方案的小分子多靶点靶向治疗药物——索拉非尼，不良反应频发，临床医生使用时需充分权衡利与弊。因此，开发高效、低毒、稳定的药物肝靶向递送载体，对于提升化疗效果至关重要，对于我国肝癌的治疗尤为必要。
[0003]GA
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R、Tf
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R在肝细胞表面高表达，在肝癌细胞表面更加过量表达，且表达不受生理条件影响，为肝癌靶向的药物递送系统提供了高特异性靶点。国内外基于GA
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R、Tf
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R的肝癌靶向给药系统研究，主要集中在单配体修饰的聚合物制备载药(或基因)纳米粒子方面。然而细胞表面用于和配体结合的相应受体数量有限，加之细胞质膜和内涵体之间的受体循环，导致了即使增加配体比例也无济于事的饱和现象，极大地限制了细胞对载体的摄取能力，因此，单个配体修饰的纳米粒子进行受体
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配体特异性识别能力有限。另外，并不是所有的靶向受体都仅仅在靶细胞上过量表达，这会导致单配体修饰纳米粒子与靶向受体结合的不足。

技术实现思路

[0004]为了克服目前临床肝癌化疗药物的靶向性局限，本专利技术基于肝癌细胞表面过量表达的GA
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R和Tf
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R双受体介导设计，提供了一种甘草次酸
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转铁蛋白(GA
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Tf)双重肝癌靶向纳米载体的制备方法。筛选最佳偶联量发挥甘草次酸和转铁蛋白的双重靶向作用，同时两者结合又做为包裹材料，大大简化了常规纳米制剂的复杂的制备工艺。相较于单配体靶向，进一步改善肿瘤靶向特异性；相较于常规纳米粒的修饰与制备流程，本专利技术制备工艺简化，粒径小；此外，甘草次酸自身又具备良好的抗肝癌药理活性及保肝功效，与负载药物发挥协同治疗作用，进而增强抗肿瘤疗效和减少耐药性的产生，具有很好的应用前景。
[0005]本专利技术的技术方案可以通过以下技术方案实现：
[0006]一种甘草次酸
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转铁蛋白(GA
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Tf)双重肝癌靶向纳米载体的制备方法，该方法包括以下步骤：
[0007](1)以甲醇或乙醇为溶剂溶解甘草次酸制备甘草次酸溶液，将1
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乙基
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(3
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二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐与N
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羟基琥珀酰亚胺磺酸钠盐用pH 4.0～7.8的PBS缓冲液溶解后(优选为用pH5.8～7.8的PBS缓冲液溶解)，滴加入所述的甘草次酸溶液中，避光搅拌反应得到反应液A；
[0008](2)将转铁蛋白用pH7.4的PBS缓冲液溶解后，避光滴加所述的A反应液，有机相不超过40％(以保证转铁蛋白的稳定性)，搅拌反应后，使用超滤纯化、洗涤、冷冻干燥，得到甘草次酸
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转铁蛋白(GA
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Tf)双重肝癌靶向纳米载体。
[0009]作为一种优选技术方案，所述甘草次酸与转铁蛋白的物质的量之比为150:1～400:1。进一步优选的，所述甘草次酸与转铁蛋白的物质的量之比为150:1～300:1。更进一步优选的，所述甘草次酸与转铁蛋白的物质的量之比为200:1。
[0010]作为一种优选技术方案，所述的甘草次酸与1
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乙基
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(3
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二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐的摩尔比为1:1～1:3，与N
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羟基琥珀酰亚胺磺酸钠盐的摩尔比为1:1.5～1:2.5。进一步优选的，所述的甘草次酸与1
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乙基
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(3
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二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐的摩尔比为1:2～2.5，与N
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羟基琥珀酰亚胺磺酸钠盐的摩尔比为1:2～2.5。
[0011]作为一种优选技术方案，步骤(1)中所述避光搅拌反应的条件为室温密封避光搅拌反应18～24h。进一步优选的，室温密封避光搅拌反应24h。
[0012]作为一种优选技术方案，步骤(2)中所述搅拌反应的条件为4℃，搅拌反应32～48小时。进一步优选的，所述搅拌反应的条件为4℃，搅拌反应36小时。步骤(2)中所述超滤纯化的条件为：离心转速8000～12000rpm，离心时间8～15min。进一步优选为，离心转速8000rpm，离心时间10min。
[0013]作为一种优选技术方案，步骤(2)中所述洗涤的方法为20％～40％(v/v)甲醇或20％～40％(v/v)乙醇洗涤两次，超纯水洗涤一次。进一步优选为，采用40％(v/v)甲醇或40％(v/v)乙醇洗涤。
[0014]上述方法制备的甘草次酸
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转铁蛋白(GA
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Tf)双重肝癌靶向纳米载体。
[0015]上述的甘草次酸
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转铁蛋白(GA
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Tf)双重肝癌靶向纳米载体在制备治疗肝癌药物中的应用。
[0016]本专利技术最优选技术方案的工艺条件为：甘草次酸与转铁蛋白的物质的量之比为200:1。甘草次酸以甲醇或乙醇为溶剂溶解，甘草次酸与1
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乙基
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(3
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二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐的摩尔比为1:2.5，与N
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羟基琥珀酰亚胺磺酸钠盐的摩尔比为1:2.5，二者以pH7.8 PBS缓冲液溶解，滴加入甘草次酸溶液中，于室温密封避光搅拌反应24h，得到反应液A；转铁蛋白以pH7.4 PBS溶解后，避光滴加A反应液，有机相不超过40％，4℃，搅拌反应36小时。使用超滤纯化，离心转速8000rpm，离心时间10min，40％甲醇或40％乙醇洗涤两次，超纯水洗涤一次。冷冻干燥。
[0017]本专利技术所述的室温为25
±
10℃。
[0018]本专利技术的有益效果
[0019]本专利技术提供了一种甘草次酸
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转铁蛋白(GA
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Tf)双重肝癌靶向纳米载体的制备方法及应用，此纳米载体利用甘草次酸和转铁蛋白的靶向作用，同时本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种甘草次酸
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转铁蛋白(GA
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Tf)双重肝癌靶向纳米载体的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)以甲醇或乙醇为溶剂溶解甘草次酸制备甘草次酸溶液，将1
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乙基
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(3
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二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐与N
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羟基琥珀酰亚胺磺酸钠盐用pH 4.0～7.8的PBS缓冲液溶解后，滴加入所述的甘草次酸溶液中，避光搅拌反应得到反应液A；(2)将转铁蛋白用pH7.4的PBS缓冲液溶解后，避光滴加所述的A反应液，有机相不超过40％，搅拌反应后，使用超滤纯化、洗涤、冷冻干燥，得到甘草次酸
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转铁蛋白(GA
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Tf)双重肝癌靶向纳米载体。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述甘草次酸与转铁蛋白的物质的量之比为150:1～400:1。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的甘草次酸与1
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乙基
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【专利技术属性】
技术研发人员：李莎莎，崔鑫，程煜凤，李新霞，李飞，
申请(专利权)人：新疆医科大学，
类型：发明
国别省市：