一种岩生报春组织培养与快速繁殖方法技术

本发明专利技术提供了一种岩生报春（Ｐｒｉｍｕｌａ?ｓａｘａｔｉｌｉｓ）组织培养与快速繁殖方法。本发明专利技术选取北京密云雾灵山采集的岩生报春野生种子为外植体，其中种子经过消毒后进行接种培养，萌发形成岩生报春无菌苗。将无菌苗上的腋芽进行增殖，经过丛生芽诱导、继代培养进行快速繁殖；或诱导丛生芽的叶片或叶柄产生愈伤组织、进行愈伤组织的增殖和不定芽分化进行快速繁殖。本发明专利技术提供的岩生报春组织培养和快速繁殖方法，大大提高了岩生报春的育苗生产能力，缩短了成苗时间又降低了成本，为岩生报春优良单株的保存提供了技术保障。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物组织培养领域，具体地说，涉及一种岩生报春(Primula saxatilis)的组织培养和快速繁殖的方法。
技术介绍
岩生报春为报春花科报春属指叶报春组植物，被列入《中国植物红皮书(第二 版)》以及《河北省重点保护野生植物名录》。早春开花，花粉红色具有较好的观赏性，在北 京露地能顺利越夏越冬，是十分重要的观赏花卉和育种材料。岩生报春是多年生草本花卉， 一般采用播种和分株繁殖，但以播种繁殖为主，一般于9月初播种，经过营养生长于次年5 月份进入盛花期，从播种至开花时间为8个月，生长周期长，且繁殖系数低。同时，这些方法 远不能满足生产需求，且成苗不整齐。组织培养是快速繁殖优良植物品种的一条重要途径，报春花属已有不少种进行了 组织培养的相关报道，但是岩生报春的组织培养在国内外均没有相关研究与报道，因此需 要研究岩生报春的组织培养，并形成一套专门的快繁技术体系。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种岩生报春的组织培养与快速繁殖方法，提高岩生报春的 繁殖系数、生根率及移栽成活率。为了实现本专利技术目的，本专利技术的一种岩生报春组织培养和快速繁殖方法，包括种 子表面消毒后进行接种，获得无菌苗后，接种腋芽进行丛生芽的诱导，将获得的不定芽进行 生根培养和移栽。其中，所述的种子消毒包括用清水浸泡种子24h，在超净工作台内先用75%乙醇 消毒15 30s，优选为15s，无菌水冲洗5 6次，优选5次，再用质量比为0. 的升汞溶 液消毒6 8min，优选为6min，无菌水洗涤5 6次，优选为5次，接种至MS或者1/2MS培 养基中，优选为1/2MS培养基，pH为5. 9，光照条件为自然散射光2500 3000LuX加人工辅 助光1500 2000LUX。1 1. 5个月后，将种子萌发获得的无菌苗移至MS培养基中继代， PH为5. 9，光照条件为自然散射光2500 3000LUX加人工辅助光1500 2000Lux。其中，所述的丛生芽诱导具体步骤为取无菌苗腋芽接种在丛生芽诱导培养基 MS+2. 5mg/l 6-BA+l. Omg/1 NAA 中，pH 为 5. 9，光照条件为自然散射光 2500 3000Lux 加 人工辅助光1500 2000LUX ；之后移至相同培养基增殖，继代2 3次。其中，生根培养和试管苗移栽的具体步骤为将不定芽接种至生根培养基进行生 根。生根培养基为 MS 或 MS+0. 1 0. 2mg/l NAA，优选为 MS+0. lmg/1 NAA，pH 为 5. 9 6. 0， 光照条件为自然散射光2500 3000LUX加人工辅助光2500 3000Lux，光照时间为12h/ d ；温度保持在23 25°C之间。生根培养2 3周，炼苗4 5天后，移至细草炭土中培养， 保持湿度高于80%，每天喷水2 3次。本专利技术提供的岩生报春组织培养和快速繁殖方法，还包括在所述丛生芽的诱导后将丛生芽的叶片或叶柄接种至愈伤组织诱导培养基上，诱导愈伤组织，并将愈伤组织接种 至愈伤组织增殖培养基中进行增殖培养，将增殖后的愈伤组织接种到愈伤组织分化培养基 中培养，分化出不定芽。其中所述的愈伤组织诱导培养基MS+1 2. 5mg/l 6-BA+0. 5 1. 5mg/l NAA,优选 为MS+1. 5mg/l 6-BA+O. 5mg/l NAA中，pH为5. 8 5. 9，培养的光照条件为先暗培养20d， 之后转为光照培养，自然散射光2500 3000LUX加人工辅助光1500 2000Lux，光照时间 为 12h/d。其中所述的愈伤组织增殖培养基为MS+0. 5mg/l TDZ+0. 5 1. 5mg/l 2，4_D中，优 选为MS+0. 5mg/l TDZ+0. 5mg/l 2，4_D，pH为5. 8 5. 9。其中所述的愈伤组织优选为诱导 的初始黄绿色的愈伤组织。其中，所述的愈伤组织分化培养基MS+10mg/l 6_BA+2mg/lNAA上。所述的用于不 定芽的愈伤组织优选为黄绿色块状、质地疏密适中的愈伤组织。本专利技术的组织培养与快速繁殖方法繁育岩生报春，2个月内增殖系数达到3 4， 生根率达95%以上，移栽成活率为100%，极大地提高了岩生报春的繁殖系数，缩短成苗周 期，又可降低成本，为今后大面积园林应用和工厂化育苗提供了非常有效的方法；同时，以 腋芽为材料进行增殖和快繁，能够保持岩生报春的种性不变，为新品种培育中出现的较为 珍贵稀有变种的保存提供了保障。对岩生报春无菌苗叶片和叶柄进行培养及再生，使外植 体能够高频率地诱导出愈伤组织，建立高效的体细胞再生体系，为岩生报春遗传转化和细 胞工程研究创造有利条件，为利用转基因技术育种奠定了良好的基础。为今后大面积园林 应用和工厂化育苗提供了非常有效的方法；同时，为新品种培育中出现的较为珍贵稀有变 种的保存提供了保障。与现有技术相比，本专利技术岩生报春的组织培养与快速繁殖方法的优点在于1.建立了一种岩生报春的组织培养与快速繁殖方法，相比传统的报春花属植物育 苗繁殖方法，如播种繁殖和分株繁殖，极大地提高了岩生报春的繁殖系数，为科研研究和生 产栽培提供了技术支持；2.通过组织培养与快速繁殖得到的幼苗，生长强健，叶色浓绿，一致性强，成苗容 易，适应性较强，病虫害少，易于管理；3.利用组织培养与快速繁殖方法繁育岩生报春，摆脱了季节与气候的限制因素， 从而缩短了育苗周期，增加了繁殖量；4.利用组织培养与快速繁殖方法繁育岩生报春，可以保持优良种或品种的特性不 变，从而为新品种选育研究中变异保存提供了有效的方法；5.通过组培再生体系的方法建立高效的体细胞再生体系，为岩生报春遗传转化和 细胞工程研究创造有利条件；6.利用组培再生体系繁育岩生报春，为通过遗传转化技术培育新品种奠定了基 石出。附图说明图1所示为接种种子2个月后长成的无菌苗。图2所示为腋芽接种2周后开始有丛生芽的分化。图3所示为在腋芽接种40天后分化出的大量丛生芽。图4所示为叶片接种40d左右开始有形成愈伤组织。图5所示为将形成的小愈伤组织进行切除，放入增殖培养基中进行增殖。图6所示为将已增殖的愈伤组织进行分化培养。图7所示为愈伤组织在分化培养基中分化出的再生植株。图8所示为不定芽在生根培养基中的生根情况。图9所示为再生植株在温室中培养。具体实施例方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。实施例1选取岩生报春种子，在无菌条件下先用75%酒精消毒15s，无菌水冲洗5 6次， 再用质量比0. 1 %的升汞溶液消毒6min，无菌水冲洗5 6次，接种至1/2MS中，pH为5. 9， 一个月后移至MS，pH为5. 9中继代，在MS中生长一个月(图1)后形成岩生报春无菌壮苗，， 光照条件均为自然散射光2500 3000LUX加人工辅助光1500 2000Lux。实施例2选取岩生报春种子，在无菌条件下先用75 %酒精消毒30s，无菌水冲洗6次，再用 质量比为0. 1 %的升汞溶液消毒8min，无菌水冲洗6次，接种至MS中，pH为5. 9，一个月后 移至MS中继代，在MS中生长一个月后形成岩生报春无菌壮苗，光照条件均为自然散射光 2500 3000Lux加人工辅助光1500 2000Lux。实施例3以岩生报春无菌苗的腋芽为外本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种岩生报春的组织培养与快速繁殖方法，包括如下步骤：将种子表面消毒后进行接种，获得无菌苗后，接种腋芽进行丛生芽的诱导，将获得的不定芽进行生根培养和移栽，其中，所述的种子接种至１／２ＭＳ或ＭＳ培养基；所述的丛生芽诱导培养基为ＭＳ＋２．５ｍｇ／ｌ６－ＢＡ＋１．０ｍｇ／ｌ　ＮＡＡ，ｐＨ为５．９～６．０；所述的不定芽生根培养基为ＭＳ或ＭＳ＋０．１～０．２ｍｇ／ｌ　ＮＡＡ，ｐＨ　５．９～６．０。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张启翔，赵妍，潘会堂，程堂仁，王佳，董玲玲，
申请(专利权)人：北京林业大学，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]