特异性检测制造技术

本发明专利技术涉及细胞免疫学

【技术实现步骤摘要】
特异性检测IL
‑
7的抗体及应用


[0001]本专利技术涉及细胞免疫学
、
分子生物学和抗体制备
，尤其涉及一种特异性检测
IL
‑7的抗体及应用
。

技术介绍

[0002]CAR
‑
T
因其在白血病等液体瘤上的巨大潜力，被认为是最有前景的肿瘤治疗方式之一，然而依然存在如免疫抑制微环境
、T
细胞效力不强及细胞毒性等难题制约着
CAR
‑
T
功效的发挥
。CAR
‑
T
疗法中影响
T
细胞功能（增殖能力和免疫功能）的一些小明星分子，如细胞因子
IL
‑
7、IL18、IL
‑
21
，
IL15
等在肿瘤免疫方面发挥功能
。
如第四代
CAR
‑
T
，在第二
/
第三代
CAR
‑
T
的基础上共表达一些关键的细胞因子，进而表现出了克服实体瘤免疫抑制微环境的能力
。T
细胞的活化以及放大作为
CAR
‑
T
细胞疗法的核心步骤之一，是目前研究的热点
。
[0003]研究发现，
IL
‑7的表达与
T
细胞增殖密切相关
。
如用
IL
‑7刺激新鲜
T
细胞，
T
细胞可剂量依赖性扩增，包括
CD4+
和
CD8+
亚群；敲除
IL
‑
7R
，
T
细胞会停止生长；转入
IL
‑7基因可促进
CD4+/CD8+T
细胞的增殖
。
但
CD4+
和
CD8+T
细胞对
IL
‑7对有不同的应答效果
。IL
‑7对
CD8+T
细胞亚群的作用要强于
CD4+
细胞亚群
。
因此，在细胞治疗领域中的细胞培养的过程中，通常会添加
IL
‑7促进细胞的增殖
。
对于
IL
‑7的残留检测成为质量控制中至关重要的环节
。
[0004]目前
IL
‑7的定量检测试剂普遍存在方法不够稳定
、
板间变异系数大以及不同基质间存在干扰等问题，开发高特异性和高亲和力的抗
IL
‑7抗体对于实现高效准确的
IL
‑7检测具有重要意义
。
[0005]有鉴于此，特提出本专利技术
。

技术实现思路

[0006]为解决上述技术问题，本专利技术提供了一种特异性检测
IL
‑7的抗体及应用
。
[0007]本专利技术以体外构建的人
IL
‑7蛋白作为免疫原进行小鼠免疫，经细胞融合与筛选
、
杂交瘤细胞亚克隆，获得表达抗体的杂交瘤细胞株
。
通过实验验证发现，该抗体能够特异性识别人
IL
‑7蛋白，而且不与其他细胞因子产生交叉反应
。
进一步地，本专利技术通过杂交瘤测序获得了该抗体的氨基酸序列及其编码基因的核苷酸序列
。
[0008]基于上述发现，本专利技术提供以下技术方案：第一方面，本专利技术提供特异性检测
IL
‑7的抗体或其抗原结合片段，所述抗体选自以下（1）和
/
或（2）：（1）重链可变区的互补决定区
CDR1、CDR2、CDR3
的氨基酸序列分别如
SEQ ID NO
：
1、2、3
所示；轻链可变区的互补决定区
CDR1、CDR2、CDR3
的氨基酸序列分别如
SEQ ID NO
：
4、5、6
所示
。
[0009]SEQ ID NO
：
1: RYWIN
；
SEQ ID NO
：
2: MIDPFDSETHYNQVFKD
；
SEQ ID NO
：
3: YFVYFDTVDF
；
SEQ ID NO
：
4: RSGQSLVHSDGNTYLH
；
SEQ ID NO
：
5: KVSNRFS
；
SEQ ID NO
：
6: SQNTHVPYT。
[0010]（2）重链可变区的互补决定区
CDR1、CDR2、CDR3
的氨基酸序列分别如
SEQ ID NO
：
7、8、9
所示；轻链可变区的互补决定区
CDR1、CDR2、CDR3
的氨基酸序列分别如
SEQ ID NO
：
10、11、12
所示
。
[0011]SEQ ID NO
：
7: DFYME
；
SEQ ID NO
：
8: ASRNKAKDYTTEYSASVKG
；
SEQ ID NO
：
9: DGREFPYWYFDV
；
SEQ ID NO
：
10: RASQDISNYLN
；
SEQ ID NO
：
11: YTSRLHS
；
SEQ ID NO
：
12: QQGNALPWT。
[0012]优选地，所述抗体选自以下（1）和
/
或（2）：（1）抗体
8E8B10
重链可变区的氨基酸序列为：
MGWSCIILFLVATATGVHSQVQLQQPGAELLRPGASVKLSCKTSGFTFTRYWINWVKQRPGQGLEWIGMIDPFDSETHYNQVFKDKATLTVDKSSSTAYMYMSSLTSEDSAVYYCARYFVYFDTVDFWGQGTSLTVSS
（
SEQ ID NO
：
13
）；轻链可变区的氨基酸序列为：
MKLPVRLLVLMLWIPASSSDVVMTQTPLSLPVSLGGQASISCRSGQSLVHSDGNTYLHWYLQRPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTNFTLKISRVEAEDLGVYFCSQNTHVPYTFGGGTKLEMK
（
SEQ ID NO
：
14
）
。
[0013本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
特异性检测
IL
‑7的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体选自以下（1）和
/
或（2）；（1）重链可变区的互补决定区
CDR1、CDR2、CDR3
的氨基酸序列分别如
SEQ ID NO
：
1、2、3
所示；轻链可变区的互补决定区
CDR1、CDR2、CDR3
的氨基酸序列分别如
SEQ ID NO
：
4、5、6
所示；（2）重链可变区的互补决定区
CDR1、CDR2、CDR3
的氨基酸序列分别如
SEQ ID NO
：
7、8、9
所示；轻链可变区的互补决定区
CDR1、CDR2、CDR3
的氨基酸序列分别如
SEQ ID NO
：
10、11、12
所示
。2.
根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体选自以下（1）和
/
或（2）；（1）重链可变区的氨基酸序列如
SEQ ID NO
：
13
所示，轻链可变区的氨基酸序列如
SEQ ID NO
：
14
所示；（2）重链可变区的氨基酸序列如
SEQ ID NO
：
15
所示，轻链可变区的氨基酸序列如
SEQ ID NO
：
16
所示
。3.
根据权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段选自
Fab、Fab'、F(ab')2、Fd、Fv、dAb、
互补决定区片段
、
单链抗体
、
单克隆抗体
、
动物源抗体
、
嵌合抗体
、<...

【专利技术属性】
技术研发人员：葛平菊，王恒玲，杜成薇，苗景赟，陈宜顶，
申请(专利权)人：北京百普赛斯生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：