用于预防和治疗过敏性疾病的旋毛虫衍生丝氨酸蛋白酶制造技术

本发明专利技术适用于生物技术领域，提供了用于预防和治疗过敏性疾病的旋毛虫衍生丝氨酸蛋白酶，包括重组丝氨酸蛋白酶表达载体的构建、重组丝氨酸蛋白酶的表达和纯化、过敏性哮喘模型的建立以及重组丝氨酸蛋白酶的预防和治疗作用研究。结果显示旋毛虫衍生的丝氨酸蛋白酶可以显著抑制小鼠的过敏性炎症反应。本发明专利技术可用于过敏性炎症的免疫调控研究和人类及动物过敏性疾病相关治疗剂的制备研究，对过敏性疾病的防治具有重要意义。的防治具有重要意义。的防治具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
用于预防和治疗过敏性疾病的旋毛虫衍生丝氨酸蛋白酶


[0001]本专利技术属于生物
，尤其涉及用于预防和治疗过敏性疾病的旋毛虫衍生丝氨酸蛋白酶。

技术介绍

[0002]旋毛虫病主要通过生食或半生食含有旋毛虫感染性包囊的肉制品传播。旋毛虫的中间宿主和终末宿主是同一宿主，感染旋毛虫后，感染性幼虫在肠道内经历四次蜕皮发育为成虫，然后雌雄交配完成受精，产生的新生幼虫通过宿主的循环系统迁移到横纹肌，新生幼虫进入肌细胞形成包囊。旋毛虫在长期寄生过程中形成了一套完善的免疫逃避机制，包括诱导Th2型免疫应答或免疫抑制应答，由于不同发育时期的旋毛虫所面临的免疫环境不同，因此旋毛虫可以分泌具有期特异性的分泌排泄抗原来调节不同的免疫应答反应，进而为虫体提供一个有利于寄生生活的免疫微环境。
[0003]过敏性疾病是一类2型免疫介导的炎症反应，“特异性行军”是其发病的特征之一，即由早期的过敏性皮炎发展为其他特异性疾病，如过敏性鼻炎和过敏性哮喘。目前过敏性疾病的临床治疗选择包括过敏原免疫治疗、糖皮质激素。随着对过敏性哮喘发病机制的进一步研究，靶向关键免疫效应器本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.旋毛虫衍生丝氨酸蛋白酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1）构建丝氨酸蛋白酶的表达载体：使用Trizol提取第6天旋毛虫的mRNA并逆转录成cDNA，通过含有XhoI和NdeI内切酶位点的丝氨酸蛋白酶的特异性上下游引物对cDNA进行PCR扩增反应，获取目的基因，通过双酶切的方式将目的基因连接到表达载体Pet28a，并转入大肠杆菌BL21(DE3)中；步骤2）表达并纯化重组蛋白，具体包括：步骤2.1）表达重组蛋白：以1%的比例将步骤1)中构建的菌株接种到含有硫酸卡那霉素的LB培养基中，并在37℃下培养2~3h，当培养基OD600nm达到0.4~0.6时，加入终浓度为0.1nmol的IPTG，继续培养6~8h进行蛋白的诱导表达，然后离心收集菌液，使用超声破碎仪破碎菌体并释放不溶于水的包涵体蛋白，通过含有8mol尿素的binding溶液溶解包涵体，以备纯化使用；步骤2.2）纯化重组蛋白：使用
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KTA pure全自动蛋白质分离纯化系统对带有his标签的重组蛋白进行Ni柱亲和层析纯化及蛋白复性。2.根据权利要求1所述的旋毛虫衍生丝氨酸蛋白酶的制备方法，其特征在于，所述步骤2.2）的具体操作为：首先，启动
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KTA pure全自动蛋白质分离纯化系统并安装Ni柱，然后连接binding溶液并调整流速为0.6ml/min，采用注射器加样的方式将待纯化的蛋白样本注射到纯化系统中，重组蛋白与Ni柱结合，使用80mM的咪唑溶液进行杂蛋白的洗脱，然后采用500mM的咪唑溶液进行重组蛋白的洗脱，洗脱的重组蛋白采用PBS透析及离心浓缩，最终封装到EP管，在
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【专利技术属性】
技术研发人员：徐凝，刘明远，金雪敏，白雪，刘一，李辰，丁静，杨勇，刘晓雷，王学林，石文杰，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：