【技术实现步骤摘要】
寡糖类抗生素everninomicin高产菌株的构建及活性的应用
[0001]本专利技术属于生物制药领域，具体涉及抗生素everninomicin D(1)、everninomicin E(2)、everninomicin F(3)、everninomicin G(4)和everninomicin M(5)高产菌株的构建及其制备方法和活性应用。
技术介绍
[0002]由小单孢菌产生的everninomicin(EVN)类化合物具有强大的抗菌活性且靶向细菌的核糖体。EVN类化合物具有高度修饰的八糖支架及独特的核糖体结合位点，该位点与目前用于人类治疗的任何其他抗生素不同，从而使其成为一种缺乏交叉耐药性的潜力先导药物。然而，小单孢菌天然菌株中EVNs的产量极低，阻碍了此类化合物的有效制备和详细的构效关系分析。为了克服EVNs产量过低这一难题，
技术实现思路
[0003]本专利技术的目的是克服现有技术中的缺陷，提供寡糖类抗生素everninomicin高产菌株的构建及活性的应用。
[0004]本专利技术的第一...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.寡糖类抗生素everninomicin类化合物EVNs，其结构如式(I)中的任一所示：其中化合物1为EVN D，化合物2为EVN E，化合物3为EVN F，化合物4为EVN G，化合物5为EVN M。2.寡糖类抗生素everninomicin高产菌株，其特征在于，是将evm基因簇中的evmS9至evmM2基因簇片段的cosmid质粒pCSG3310转入到小单孢菌Micromonospora sp.SCSIO07395中，得到重组小单孢菌SCSIO 07395
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plus；或将evmS9至evmM2基因簇片段的cosmid质粒pCSG3310中的evmGT3基因缺失获得质粒pCSG3313，将质粒pCSG3313重复转入一次以上到小单孢菌Micromonospora sp.SCSIO 07395中，获得重组小单孢菌ΔevmGT3，所述evm基因簇序列如SEQ ID NO.1所示。3.根据权利要求2所述的寡糖类抗生素everninomicin高产菌株，其特征在于，是将evmS9至evmM2基因簇片段的cosmid质粒pCSG3310中的evmGT3基因缺失获得质粒pCSG3313，将质粒pCSG3313转入到小单孢菌Micromonospora sp.SCSIO 07395中，获得重组小单孢菌ΔevmGT3，再将质粒pCSG3313再次转入重组小单孢菌ΔevmGT3中获得ΔevmGT3
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plus。4.寡糖类抗生素everninomicin高产菌株SCSIO 07395
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plus的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：将包含evmS9至evmM2基因簇片段cosmid质粒pCSG3310的质粒通过大肠杆菌S17
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1接合转移导入到野生型菌株SCSIO 07395中，得到菌株SCSIO 07395
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plus。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，将cosmid质粒pCSG3310转化导入大肠杆菌S17
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1中，与野生型菌株SCSIO 07395进行菌丝体接合转移，20h后使用萘啶酮酸和卡那霉素覆盖；6
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9d后观察接合子，并利用抗性验证获得基因簇部分倍增的重组菌株后，在卡那霉素平板上扩培；所述cosmid质粒pCSG3310的制备：利用MaxPlax
TM
噬菌体包装试剂盒，构建SuperCos1为载体的cosmid文库，通过07395_screen_1_F/R和07395_screen_2_F/R两对筛库引物，获得包含evmS9至evmM2片段的cosmid质粒pCSG3310；将pCSG3310转化导入大肠杆菌S17
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1中，与SCSIO 07395进行菌丝体接合转移，20h后使用萘啶酮酸和卡那霉素覆盖；6
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9d后观察接合子，并利用抗性筛选获得预期的基因簇部分倍增重组菌株，随后在卡那霉素平板上扩培菌种。6.寡糖类抗生素everninomicin高产菌株ΔevmGT3
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plus的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：将evmS9至evmM2基因簇片段的cosmid质粒pCSG3310中的evmGT3基因缺失获得质粒pCSG3313，将质粒pCSG3313通过大肠杆菌S17
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1接合转移导入到小单孢菌Micromonospora sp.SCSIO 07395中，获得重组小单孢菌ΔevmGT3，再将质粒pCSG3313通过
大肠杆菌S17
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【专利技术属性】
技术研发人员：张长生，朱梦奕，王利娟，张海波，张丽萍，朱义广，
申请(专利权)人：中国科学院南海海洋研究所，
类型：发明
国别省市：
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