一种抗SVA病毒羊栖菜多糖及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种抗SVA病毒羊栖菜多糖及其制备方法与应用，纯化的分子量为100kDa以上的羊栖菜多糖抗SVA病毒效果最好，具有抗SVA病毒活性高、细胞毒性低的特点。细胞毒性低的特点。细胞毒性低的特点。

【技术实现步骤摘要】
一种抗SVA病毒羊栖菜多糖及其制备方法与应用


[0001]本专利技术属于植物提取物及应用的
，具体涉及一种抗
SVA
病毒羊栖菜多糖及其制备方法与应用
。

技术介绍

[0002]这里的陈述仅提供与本专利技术相关的
技术介绍
，而不必然地构成现有技术
。
[0003]A
型塞内卡病毒
(Senecavirus A
，
SVA)
，又被称为塞内加谷病毒
(Seneca valley virus
，
SVV)
，感染猪会引发猪水疱类疾病，主要影响新生仔猪，会导致新生仔猪食欲减退
、
嗜睡
、
口鼻和蹄冠部发生溃疡等症状，严重时会导致仔猪死亡，对养猪业影响巨大
。
此外，老鼠和苍蝇也可以携带病毒，在人和牛
、
羊等动物中检测到过
SVA
中和抗体
。SVA
在
2002
年由美国
Neotropix
公司在细胞中培养腺病毒5载体时发现，并被命名为
SVV
‑
001
，该病毒属于小
RNA
病毒科，同科的还有口蹄疫病毒等
。
我国于
2015
年从广东省首次发现由
SVA
导致的猪水疱病，此后湖北省
、
山东省
、
黑龙江省等地也相继出现猪水疱病例并分离出了r/>SVA。
[0004]SVA
作为一种新型病毒，传播途径
、
宿主范围等方面还尚未完全掌握，且没有商品化疫苗和特效药物，一旦爆发，将造成巨大的危害
。
目前对于
SVA
的研究主要集中在疫苗开发，药物研究较少，开发天然产物活性成分是抗病毒药物研发的一个重要途径
。
多糖广泛存在于动物
、
植物
、
细菌和真菌内，具有多重生物活性，其中部分多糖表现出了一定抗病毒活性，能对病毒生命周期多个环节发挥拮抗作用，且能通过调节免疫反应
、
炎症反应等发挥抗病毒作用，是目前抗病毒药物的研究热点
。
[0005]羊栖菜
(Sargassum fusiforme)
隶属于海藻中的褐藻门，属于墨角藻目，马尾藻科，别名鹿角尖
、
海菜芽等
。
主要分布在我国东南沿海地区及黄海
、
渤海边缘，产量多，来源广泛
。《
神农本草经
》
记载了羊栖菜的食疗性质和使用方法
。
现代研究表明羊栖菜多糖具有抗
J
亚群鸡白血病病毒
、
呼吸道合胞病毒
、
单纯疱疹病毒
、
肠道病毒
71
型
、
柯萨奇病毒等病毒作用，目前尚未有专利或文献报道羊栖菜多糖在抗
SVA
病毒方面的应用
。

技术实现思路

[0006]本专利技术对羊栖菜多糖进行提取分离及抗
SVA
病毒活性和机制进行探究，结果显示对病毒具有显著的抑制作用
。
但专利技术人在深入研究羊栖菜的抗
SVA
病毒作用机理过程中，发现传统方法制备得到的混合物羊栖菜多糖分子量跨度大，最低分子量在
1kDa
以下，最高分子量可达几千
kDa
，不但影响抗
SVA
病毒的活性，而且增强了细胞毒性
。
[0007]本专利技术实施例的目的是提供一种抗
SVA
病毒的羊栖菜多糖及其制备方法与应用
。
[0008]为了实现上述目的，本专利技术实施例提供了如下技术方案：
[0009]一种抗
SVA
病毒的羊栖菜多糖的制备方法，包括，
[0010]步骤
1:
将羊栖菜洗净烘干，与蒸馏水进行混合，加热并持续沸腾2‑
4h
，收集清液；清液浓缩
、
冷冻干燥，获得羊栖菜粗多糖；
[0011]步骤
2:
取所述羊栖菜粗多糖，用蒸馏水溶解，离心后取上清液，将上清液透过
100KDa
分子截留板；用蒸馏水冲洗分子截留板，收集分子量为
100kDa
以上的羊栖菜粗多糖溶液，将溶液浓缩，冷冻干燥，获得分子量为
100kDa
以上的羊栖菜粗多糖；
[0012]将步骤2获得的分子量
100kDa
以上的羊栖菜粗多糖进行纯化，获得获得纯化后的羊栖菜多糖
。
[0013]在一些实施例中，所述纯化采用水提醇沉法或
Sevag
法去蛋白，获得纯化的羊栖菜多糖
。
[0014]羊栖菜主要分布在我国东南沿海地区及黄海
、
渤海边缘，产量多，来源广泛，羊栖菜多糖从羊栖菜中提取成本更低
。
本申请以羊栖菜为原料通过蒸馏法提取制备羊栖菜粗多糖，羊栖菜多糖随着分子量的提升抗病毒效果逐步增强，粗多糖纯化过程脂溶性成分下降，导致对细胞毒性降低，经过纯化后对细胞的毒性降低，经过试验，专利技术人发现，本申请制备的纯化后的分子量为
100kDa
以上的羊栖菜多糖对抗病毒效果最好，具有抗
SVA
病毒活性高
、
细胞毒性低的特点
。
[0015]所述水提醇沉法为：将
100g
粗多糖加至
5L
三口烧瓶，加入
2L
水加热至
60℃
，搅拌到多糖完全溶解，在
60℃
下缓慢滴加
4L
无水乙醇，搅拌
2h
后，沉降过夜
。
将沉降后的多糖进行过滤，
70℃
烘干，重复4次
。
[0016]所述
Sevag
法去蛋白：将
10g
烘干后的粗多糖加至
500mL
三口烧瓶中，加入
250mL
水，搅拌溶解，加入
10mL
氯仿，
2mL
正丁醇，剧烈搅拌
2h
，离心，分去水层和溶剂层交界处的变性蛋白质
。
重复操作五次，收集有机层，浓缩，冷冻干燥
。
[0017]在一些实施例中，步骤1中烘干羊栖菜与蒸馏水的料液比为
0.5
‑
5∶150
，优选为
1∶150
；
[0018]或，步骤1中羊栖菜与蒸馏水混合后，加热沸腾
3h。
优化羊栖菜多糖的提取方法，提高分子量为
100kDa
以上的羊本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种抗
SVA
病毒的羊栖菜多糖的制备方法，其特征在于，步骤
1:
将羊栖菜洗净烘干，与蒸馏水进行混合，加热并持续沸腾2‑
4h
，收集清液；清液浓缩
、
冷冻干燥，获得羊栖菜粗多糖；步骤
2:
取所述羊栖菜粗多糖，用蒸馏水溶解，离心后取上清液，将上清液透过
100KDa
分子截留板；用蒸馏水冲洗分子截留板，收集分子量为
100kDa
以上的羊栖菜粗多糖溶液，将溶液浓缩，冷冻干燥，获得分子量为
100kDa
以上的羊栖菜粗多糖；将步骤2获得的分子量
100kDa
以上的羊栖菜粗多糖进行纯化，获得纯化后的羊栖菜多糖
。2.
如权利要求1所述的羊栖菜多糖的制备方法，其特征在于，所述纯化采用水提醇沉法或
Sevag
法去蛋白
。3.
如权利要求1所述的羊栖菜多糖的制备方法，其特征在于，步骤1中烘干羊栖菜与蒸馏水的料液比为
0.5
‑
5∶150
，优选为
1∶150
；或，步骤1中羊栖菜与蒸馏水混合后，加...

【专利技术属性】
技术研发人员：张亮，张诗悦，杨宏军，陈九，杨少华，刘清政，
申请(专利权)人：山东省农业科学院畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：