一株降解甘露聚糖的弧菌属细菌及其培养方法与应用技术

本发明专利技术涉及一株降解甘露聚糖的弧菌属细菌及其培养方法与应用，属于微生物技术领域。本发明专利技术的弧菌(Vibrio sp.)SG

【技术实现步骤摘要】
NO.25076。
[0008]根据本专利技术优选的，所述弧菌(Vibrio sp.)SG
‑
5的16S rRNA基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0009]弧菌(Vibrio sp.)SG
‑
5，革兰氏染色阴性，该菌株在平板上形成圆形菌落，扁平，表面较光滑，湿润，整体呈淡黄色。
[0010]上述弧菌(Vibrio sp.)SG
‑
5的培养方法，包括如下步骤：
[0011](1)将弧菌(Vibrio sp.)SG
‑
5划线至初筛固体培养基上，25～30℃倒置培养24～48h，制得活化菌株；
[0012](2)挑取步骤(1)制得的活化菌株，接种至初筛液体培养基中，在温度为25～30℃、转速为180～220转/分钟的条件下，摇床培养12～18h，制得种子液；
[0013](3)将步骤(2)制得的种子液，按1～5％的体积百分比接种于发酵培养基中，在温度为25～30℃、转速为180～220转/分钟的条件下，扩大培养3～5天，制得弧菌(Vibrio sp.)SG
‑
5菌液。
[0014]根据本专利技术优选的，所述步骤(1)中的初筛固体培养基，每升组分如下：
[0015]酵母提取物5g，胰蛋白胨10g，魔芋葡甘聚糖2g，琼脂15g，余量人工海水，pH 7.2。
[0016]进一步优选的，所述人工海水组分如下：
[0017]KH2PO
4 3.0g，K2HPO4·
3H2O 7.0g、(NH4)2SO
4 2.0g、NaCl 30.0g、FeSO4·
7H2O 0.01g，MgSO4·
12H2O 0.01g，ddH2O 1000mL。
[0018]根据本专利技术优选的，所述步骤(2)中的初筛液体培养基，每升组分如下：
[0019]酵母提取物5g，胰蛋白胨10g，魔芋葡甘聚糖2g，余量人工海水，pH 7.2。
[0020]进一步优选的，所述人工海水组分如下：
[0021]KH2PO
4 3.0g，K2HPO4·
3H2O 7.0g、(NH4)2SO
4 2.0g、NaCl 30.0g、FeSO4·
7H2O 0.01g，MgSO4·
12H2O 0.01g，ddH2O 1000mL。
[0022]根据本专利技术优选的，所述步骤(3)中的发酵培养基，每升组分如下：
[0023]酵母提取物5g，蛋白胨10g，余量人工海水，pH 7.2。
[0024]进一步优选的，所述人工海水组分如下：
[0025]KH2PO
4 3.0g，K2HPO4·
3H2O 7.0g、(NH4)2SO
4 2.0g、NaCl 30.0g、FeSO4·
7H2O 0.01g，MgSO4·
12H2O 0.01g，ddH2O 1000mL。
[0026]弧菌(Vibrio sp.)SG
‑
5，经测定，其16S rRNA基因的序列长度为1509bp，如SEQ ID NO.1所示。通过使用美国生物工程信息中心(National Center for Biotechnology Information，NCBI)BLASTN程序搜索比对，证明本专利技术菌株的16S rRNA基因序列与NCBI注册的弧菌标准菌株(Vibrio)16S rRNA基因序列具有较高的同源性，其中与标准菌株Vibrio kanaloae LMG 20539亲缘关系最相似，其序列的一致性为98.59％。
[0027]弧菌(Vibrio sp.)SG
‑
5，采用16S rRNA基因构建系统发育树，结果如图3所示。结果表明，菌株SG
‑
5与弧菌属的模式菌株聚类，且位于该属的分支内部。因此，将菌株SG
‑
5鉴定至弧菌属。
[0028]上述弧菌(Vibrio sp.)SG
‑
5在制备降解甘露聚糖酶制剂中的应用。
[0029]根据本专利技术优选的，所述应用，步骤如下：
[0030]1)取上述弧菌(Vibrio sp.)SG
‑
5菌液，按1～5％的体积百分比接种于发酵培养基
中，在温度为25～30℃、转速为180～220转/分钟的条件下，扩大培养3～7天，制得弧菌(Vibrio sp.)SG
‑
5发酵液；
[0031]2)取步骤1)制得的弧菌(Vibrio sp.)SG
‑
5发酵液，固液分离，取液体，加入硫酸铵，使浓度达到饱和度的80％，离心，收集沉淀，用20～50倍体积的TGE缓冲液重悬沉淀，透析去除硫酸铵，制得胞外酶制剂，即降解甘露聚糖酶制剂。
[0032]根据本专利技术优选的，所述步骤1)中的发酵培养基，每升组分如下：
[0033]酵母提取物5g，蛋白胨10g，余量人工海水，pH 7.2。
[0034]进一步优选的，所述人工海水组分如下：
[0035]KH2PO
4 3.0g，K2HPO4·
3H2O 7.0g、(NH4)2SO
4 2.0g、NaCl 30.0g、FeSO4·
7H2O 0.01g，MgSO4·
12H2O 0.01g，ddH2O 1000mL。
[0036]根据本专利技术优选的，所述步骤2)中，固液分离的条件为：12,000
×
g，4℃离心5～20min。
[0037]根据本专利技术优选的，所述步骤2)中，离心为：15,000
×
g，4℃离心15～30min。
[0038]根据本专利技术优选的，所述步骤2)中，TGE缓冲液组分如下：
[0039]50mM Tris，50mM NaCl，0.5mM EDTA，5mM DTT(二硫苏糖醇)，5.0％(v/v)甘油，ddH2O 1000mL，pH 7.9。
[0040]根据本专利技术优选的，所述步骤2)中，透析为采用分子截留量10,000Da的透析袋，进行搅拌透析。
[0041]上述弧菌(Vibrio sp.)SG
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5或上述降解甘露聚糖酶制剂在降解微生物来源的多糖、海藻来源的多糖、高等植物来源的多糖和/或动物来源的多糖中的应用。
[0042]根据本专利技术优选的，所述高等植物多糖为微晶纤维素、纤维素、羧甲基纤维素、果胶、木聚糖、淀粉、魔芋葡甘聚糖、槐豆胶；海藻多糖为琼脂糖、褐藻胶、卡拉胶、λ型
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卡拉胶、κ型
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卡拉胶、ι型
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卡拉胶；动物多糖为透明质酸、硫酸软骨素A、硫酸软骨素C、硫酸软骨素E、几丁质、壳聚糖；微生物多糖为黄原胶。
[0043]上述降解甘露聚糖酶制剂在降解魔芋葡甘聚糖或槐豆胶中的应用。
[0044]根据本专利技术优选的，所述降解甘露聚糖本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株弧菌(Vibrio sp.)SG
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5，于2022年06月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号：CGMCC NO.25076；优选的，所述弧菌SG
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5的16S rRNA基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.如权利要求1所述的弧菌SG
‑
5的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将弧菌SG
‑
5划线至初筛固体培养基上，25～30℃倒置培养24～48h，制得活化菌株；(2)挑取步骤(1)制得的活化菌株，接种至初筛液体培养基中，在温度为25～30℃、转速为180～220转/分钟的条件下，摇床培养12～18h，制得种子液；(3)将步骤(2)制得的种子液，按1～5％的体积百分比接种于发酵培养基中，在温度为25～30℃、转速为180～220转/分钟的条件下，扩大培养3～5天，制得弧菌SG
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5菌液。3.如权利要求3所述的培养方法，其特征在于，满足以下条件之一项或多项：i.步骤(1)中的初筛固体培养基，每升组分如下：酵母提取物5g，胰蛋白胨10g，魔芋葡甘聚糖2g，琼脂15g，余量人工海水，pH 7.2；ii.步骤(2)中的初筛液体培养基，每升组分如下：酵母提取物5g，胰蛋白胨10g，魔芋葡甘聚糖2g，余量人工海水，pH 7.2；iii.步骤(3)中的发酵培养基，每升组分如下：酵母提取物5g，蛋白胨10g，余量人工海水，pH 7.2；进一步优选的，所述人工海水组分如下：KH2PO
4 3.0g，K2HPO4·
3H2O 7.0g、(NH4)2SO
4 2.0g、NaCl 30.0g、FeSO4·
7H2O 0.01g，MgSO4·
12H2O 0.01g，ddH2O 1000mL。4.权利要求1所述的弧菌SG
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5在制备降解甘露聚糖酶制剂中的应用。5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤如下：1)取弧菌SG
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5菌液，按1～5％的体积百分比接种于发酵培养基中，在温度为25～30℃、转速为180～220转/分钟的条件下，扩大培养3～7天，制得弧菌SG
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【专利技术属性】
技术研发人员：程媛媛，韩文君，古静燕，于克学，马冉，卫洁，
申请(专利权)人：山东农业工程学院，
类型：发明
国别省市：