一种用于检测人制造技术

本发明专利技术属于基因检测技术领域，尤其是涉及一种用于检测人

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测人CYP3A5基因c.6986A>G位点的试剂盒及其检测方法和应用


[0001]本专利技术属于基因检测
，尤其是涉及一种用于检测人
CYP3A5
基因
c.6986A>G
位点的试剂盒及其检测方法和应用
。

技术介绍

[0002]他克莫司
(Tac
，又名
FK506)
是继环孢素
(CsA)
后的又一钙神经蛋白抑制剂
(CNI)
，因其具有更高的移植物存活率
、
更低的排斥反应发生率及更少的副作用等优点，被广泛应用于肾移植
、
肝移植
、
心脏移植等各种器官移植术后的抗排斥治疗，近年来，也被越来越多地用于治疗肾小球肾炎和其他风湿性免疫疾病如狼疮肾炎
、
类风湿性关节炎等
。
但是其首过效应显著，口服生物利用度介于4％
‑
89
％，个体化差异显著，造成此差异的原因，除了传统上的病理
、
生理
、
性别
、
年龄
、
身高
、
体重
、
依从性等方面外，遗传因素是影响他克莫司反应差异的重要因素
。
[0003]细胞色素
P450
酶系
3A(cytochrome P450 3A
，
CYP3A)
是肝内重要的代谢酶，占细胞色素
P450
超家族酶系的
30
％以上，参与了体内
50
％以上的药物代谢
。
在
CYP3A
中，又以
CYP3A5
在体内分布最广且相关研究较多，其在肝脏
、
小肠
、
肾脏中表达丰富，参与了
CYP3A
酶系
50
％以上的代谢活动，但是由于人群中广泛存在的
CYP3A5
的单核苷酸多态性，使其参与的药物代谢具有明显的个体差异
。CYP3A5
编码基因存在多个单核苷酸多态性位点
(SNPs)
，其中最常见的突变是
CYP3A5*3(c.6986A
＞
G
，
rs776746)
位点的突变，该位点的突变使得
mRNA
剪切位点发生改变，导致
CYP3A5
蛋白表达受阻，酶活性发生变化
。
多项研究数据表明他克莫司药物代谢差异与
CYP3A5
基因多态性相关
。
携带
CYP3A5
基因
GG
基因型的个体对他克莫司的代谢较慢，使用正常剂量即可达到药物所需血药浓度；携带
CYP3A5
基因
AA
基因型或
AG
基因型的个体对他克莫司的代谢正常或稍慢，均需较高剂量才可以达到药物所需血药浓度
。
因此，对患者进行
CYP3A5
基因分型具有重要的临床意义
。
[0004]目前已经公开的用于检测
CYP3A5
基因多态性检测的试剂盒检测技术包括了焦磷酸测序
、
凝胶电泳技术
、
基因芯片技术等等，如中国专利
CN105176991A
公开了焦磷酸测序法检测
CYP3A5
基因分型的引物对及试剂盒，其检测结果尽管具有很高的精度，但是其依赖于大型精密仪器设备
、
固定实验室以及专业操作人员，成本较高步骤繁琐且耗时较长
。
中国专利
CN103122389B
公开了一种用于
CYP3A5SNP rs776746
分型快速检测的试剂盒和检测方法，使用该试剂盒来配制
25
μ
L
的
CYP3A5SNP(rs776746)
分型检测反应体系，然后对配制好的反应体系进行
PCR
扩增反应，最后对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，由此可知，该试剂盒的检测方法需要工作人员现场配制
PCR
反应体系，步骤繁琐且容易出错，给工作人员带来了较多的不便之处
。
中国专利
CN101619352B
公开了一种基于等位基因特异性扩增的双探针基因突变检测方法及其专用芯片和试剂盒，其公开了以待检测的来自于人体组织的基因组为模板，用针对特定突变位点设计的引物组和没有
3'
‑
5'
端外切酶活性的
DNA
聚合酶进行多重等位基因特异性
PCR
扩增，然后将得到的
PCR
产物与基因芯片上的寡核苷酸探针
(
等位基因
特异性探针
)
进行杂交，根据杂交结果确定各基因位点的突变类型，该方法操作过程繁琐，难以实现批量化与自动化，结果判读方便，假阳性概率高
。
[0005]因此有必要开发一种操作简单
、
特异性强
、
灵敏度高
、
通量高
、
可靠性强和成本低的检测人
CYP3A5
基因
c.6986A>G
位点的试剂盒，为医院及其它检测机构提供新的检测方案
。

技术实现思路

[0006]本专利技术针对现有技术的不足，提供了一种检测人
CYP3A5
基因
c.6986A>G
位点的试剂盒及其检测方法和应用
。
该试剂盒操作简单
、
体系稳定
、
特异性强
、
灵敏度高
、
准确度高
、
通量高
、
成本低且适用广泛
。
[0007]为此，本专利技术第一方面提供了一种用于检测人
CYP3A5
基因
c.6986A>G
位点的试剂盒，包括：用于检测
CYP3A5
基因
c.6986A>G
位点的
PCR
扩增混合液1和用于检测
CYP3A5
基因
c.6986A>G
位点的
PCR
扩增混合液
2。
[0008]在本专利技术的一些实施方式中，所述
PCR
扩增混合液1包括检测
CYP3A5
基因
c.6986A>G
位点的野生型引物探针组
、Taq
酶
、Tris
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种用于检测人
CYP3A5
基因
c.6986A>G
位点的试剂盒，其特征在于，包括：用于检测
CYP3A5
基因
c.6986A>G
位点的
PCR
扩增混合液1和用于检测
CYP3A5
基因
c.6986A>G
位点的
PCR
扩增混合液
2。2.
根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述
PCR
扩增混合液1包括检测
CYP3A5
基因
c.6986A>G
位点的野生型引物探针组
、Taq
酶
、Tris
工作液
、MgCl2、dNTPs
和
Buffer
；优选地，所述野生型引物探针组包括野生型引物
、
公用引物和探针
。
和
/
或，所述
PCR
扩增混合液2包括检测
CYP3A5
基因
c.6986A>G
位点的突变型引物探针组
、Taq
酶
、Tris
工作液
、MgCl2、dNTPs
和
Buffer
；优选地，所述突变型引物探针组包括突变型引物
、
公用引物和探针
。3.
根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述检测
CYP3A5
基因
c.6986A>G
位点的野生型引物包括如
SEQ ID NO.1
所示序列的野生型引物；和
/
或，所述检测
CYP3A5
基因
c.6986A>G
位点的突变型引物包括如
SEQ ID NO.2
所示序列的突变型引物；和
/
或，所述公用引物包括如
SEQ ID NO.3
所示序列的公用引物；和
/
或，所述检测
CYP3A5
基因
c.6986A>G
位点的探针包括如
SEQ ID NO.4
所示序列的探针
。4.
根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述
PCR
扩增混合液1和所述
PCR
扩增混合液2中
Taq
酶的浓度为
0.27
‑
0.33U/
μ
L。5.
根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述
PCR
扩增混合液1和
PCR
扩增混合液2还包括检测内标的引物探针组，所述内标包括
RPPH
；优选地，所述检测内标的引物包括如
SEQ ID NO.5
‑6所示序列的内标引物；和
/
或，所述检测内标的探针包括如
SEQ ID NO.7
所示序列的内标探针
。6.
根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：李红东，郭晓荣，邓波，王鸿，张浩奇，杨静静，范亮波，李明，
申请(专利权)人：西安天隆科技有限公司，
类型：发明
国别省市：