用于检测膀胱癌相关基因甲基化的核酸组合物及其相应的试剂盒和用途制造技术

本申请提供了一种用于检测膀胱癌的组合物及其用途，所述组合物包括：用于检测目标基因甲基化状态的核酸，其中，所述目标基因为KCNQ5基因。本申请还提供了包括所述组合物的试剂盒，以及所述组合物在制备用于体外检测膀胱癌的试剂盒中的用途。胱癌的试剂盒中的用途。

【技术实现步骤摘要】
用于检测膀胱癌相关基因甲基化的核酸组合物及其相应的试剂盒和用途


[0001]本申请属于分子生物学领域，涉及基因检测，具体的是涉及一种用于检测膀胱癌相关基因甲基化的核酸组合物及其相应的试剂盒和用途。

技术介绍

[0002]膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一。世界范围内，膀胱癌发病率位居恶性肿瘤的第9位，男性恶性肿瘤的第7位(9.5/10万)，女性为10位以后(2.410/10万)；死亡率居恶性肿瘤的第13位，男性死亡率为(3.2/10万)，女性为(0.9/10万)。膀胱癌存在地域及性别的差异。各年龄段均可发病，高发年龄50～70岁，男性发病率为女性的3～4倍。相同分期的膀胱癌患者，男性预后优于女性患者。膀胱癌是严重威胁人民健康的恶性肿瘤之一，早期膀胱癌患者如果能得到及时诊断，可以增加手术保留膀胱的机会，提高患者生活质量和总体生存率。
[0003]目前临床上应用于膀胱癌筛查和诊断的手段主要包括尿细胞学检查，肿瘤标记物检查以及影像学检查(包括超声检查、CT及CT尿路造影(computed tomogr aphy urography，CTU)、MRI及磁共振尿路成像(magnetic resonance urography，MRU)、静脉尿路造影(intravenous urography，IVU)、胸部X线摄片或胸部CT等)。其中，尿脱落细胞学检查的敏感性为13％～75％，特异性为85％～100％。其敏感性与肿瘤分级呈正相关，高级别肿瘤(包括原位癌)阳性率达84％；G1和低级别肿瘤的敏感性为16％。另外，因尿液肿瘤标志物检测的敏感性高但特异性较低，临床上尚未广泛应用。目前膀胱镜检查和活检是诊断膀胱癌最可靠的方法。但这种有创筛查有可能引起泌尿男生殖系统感染、尿道及膀胱出血、尿道损伤和尿道狭窄等并发症。

技术实现思路

[0004]基于现有膀胱癌检测中存在的问题，本申请的目的在于提供一种无创且准确率较高的筛查手段，即通过本申请的用于体外检测膀胱癌的组合物进行膀胱癌的筛查。
[0005]本申请具体技术方案如下：
[0006]1.一种用于体外检测膀胱癌的组合物，所述组合物包括：
[0007]用于检测目标基因甲基化状态的核酸，
[0008]其中，所述目标基因甲基化状态由所述目标基因的靶序列的甲基化来表征，
[0009]其中，所述目标基因为KCNQ5。
[0010]2.根据项1所述的组合物，其中，所述KCNQ5基因的靶序列为如SEQ ID NOs:1
‑
4中任一项所示的序列或包含SEQ ID NOs:1
‑
4中任一项所示的序列。
[0011]3.根据项1或2所述的组合物，其中，所述用于检测目标基因甲基化状态的核酸包括：
[0012]引物，所述引物为所述目标基因的靶序列中的至少9个核苷酸的片段，所述片段包
含至少一个CpG二核苷酸序列。
[0013]4.根据项1
‑
3中任一项所述的组合物，其中，所述用于检测目标基因甲基化状态的核酸包括：
[0014]探针，所述探针为在中等严紧或严紧条件下杂交于所述目标基因的靶序列中的至少15个核苷酸的片段，
[0015]所述片段包含至少一个CpG二核苷酸序列。
[0016]5.根据项1
‑
4中任一项所述的组合物，其还包括：
[0017]将目标基因的靶序列的5位未甲基化胞嘧啶碱基转化为尿嘧啶的试剂。
[0018]6.根据项1
‑
5中任一项所述的组合物，其中所述用于检测目标基因甲基化状态的核酸还包括：
[0019]优先与处于非甲基化状态的靶序列结合的阻断剂。
[0020]7.根据项3所述的组合物，其中，
[0021]所述至少9个核苷酸的片段，其为如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的序列。
[0022]8.根据项4所述的组合物，其中，所述至少15个核苷酸的片段，其为如SEQ ID NO:7所述的序列。
[0023]9.一种用于体外检测膀胱癌的寡核苷酸，其包括：
[0024]SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4或其互补序列中的至少9个核苷酸且包含至少一个CpG二核苷酸序列的片段。
[0025]10.根据项9所述的寡核苷酸，其还包括：
[0026]在中等严紧或严紧条件下杂交于所述SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4或其互补序列中的至少15个核苷酸且包含至少一个CpG二核苷酸序列的片段。
[0027]11.根据项9或10所述的寡核苷酸，其还包括：
[0028]优先与处于非甲基化状态的靶序列结合的阻断剂。
[0029]12.一种用于体外检测膀胱癌的寡核苷酸，其包括：
[0030]SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6的序列。
[0031]13.根据项12所述的寡核苷酸，其还包括：
[0032]SEQ ID NO:7的序列。
[0033]14.一种试剂盒，其包括项1
‑
8中任一项所述的组合物或包括项9
‑
13中任一项所述的寡核苷酸。
[0034]15.根据项14所述的试剂盒，其还包含选自下述的至少一种其它组分：
[0035]三磷酸核苷、DNA聚合酶和所述DNA聚合酶功能所需的缓冲液。
[0036]16.根据项14或15所述的试剂盒，其中，所述试剂盒用于检测的样本包括：细胞系、组织学切片、组织活检/石蜡包埋的组织、体液、粪便、结肠流出物、尿、血浆、血清、全血、分离的血细胞、从血液中分离的细胞，或其组合。
[0037]17.根据项14
‑
16任一项所述的试剂盒，其还包含：说明书。
[0038]18.根据项1
‑
8中任一项所述的组合物或项9
‑
13中任一项所述的寡核苷酸在制备用于体外检测膀胱癌的试剂盒中的用途。
[0039]19.根据项18所述的用途，其中，所述用于体外检测膀胱癌的试剂盒通过包括如下
步骤的方法来检测膀胱癌：
[0040]1)分离待测生物样品中的包括目标基因的靶序列或其片段的DNA样品；
[0041]2)确定所述目标基因的靶序列的甲基化状态；
[0042]3)通过所述目标基因的靶序列的甲基化状态的检测结果判断生物样品的状态，从而实现对膀胱癌的体外检测。
[0043]20.根据项19所述的用途，其中，所述方法包括如下步骤：
[0044]提取待测生物样品的基因组DNA；
[0045]使用试剂处理提取的基因组DNA，使5位未甲基化的胞嘧啶碱基转化为尿嘧啶或其它碱基；
[0046]将试剂处理过的DNA样品与DNA聚合酶和目标基因的靶序列的引物接触，进行DNA聚合反本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于体外检测膀胱癌的组合物，所述组合物包括：用于检测目标基因甲基化状态的核酸，其中，所述目标基因甲基化状态由所述目标基因的靶序列的甲基化来表征，其中，所述目标基因为KCNQ5。2.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述KCNQ5基因的靶序列为如SEQ ID NOs:1
‑
4中任一项所示的序列或包含SEQ ID NOs:1
‑
4中任一项所示的序列。3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中，所述用于检测目标基因甲基化状态的核酸包括：引物，所述引物为所述目标基因的靶序列中的至少9个核苷酸的片段，所述片段包含至少一个CpG二核苷酸序列。4.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的组合物，其中，所述用于检测目标基因甲基化状态的核酸包括：探针，所述探针为在中等严紧或严紧条件下杂交于所述目标基因的靶序列中的至少15个核苷酸的片段，所述片段包含至少一个CpG二核苷酸序列。5.根据权利要求1
‑
4中任一项所述的组合物，其还包括：将目标基因的靶序列的5位未甲基化胞嘧啶碱基转化为尿嘧啶的试剂。6.根据权利要求1
‑
5中任一项所述的组合物，其中所述用于检测目标基因甲基化状态的核酸还包括：优先与处于非甲基化状态的靶序列结合的阻断剂；优选地，所述至少9个核苷酸的片段，其为如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的序列；优选地，所述至少15个核苷酸的片段，其为如SEQ ID NO:7所述的序列。7.一种用于体外检测膀胱癌的寡核苷酸，其包括：SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4或其互补序列中的至少9个核苷酸且包含至少一个CpG二核苷酸序列的片段；优选地，其还包括：在中等严紧或严紧条件下杂交于所述SEQ ID N...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴宁宁，刘斯文，蔡海利，吴振，周光朋，杨亚东，李永君，
申请(专利权)人：博尔诚北京科技有限公司，
类型：发明
国别省市：