一种小麦条锈菌夏孢子保存的方法技术

本发明专利技术提供了一种小麦条锈菌夏孢子保存的方法，涉及专性寄生真菌的保存技术领域。步骤为：将小麦条锈菌夏孢子与电子氟化液混合，得到菌悬浮保存液；将得到的菌悬浮保存液在4～6℃下保存。采用本发明专利技术的方法降低夏孢子保存的难度和费用，实现短期内夏孢子的“即时性”。。。

【技术实现步骤摘要】
一种小麦条锈菌夏孢子保存的方法


[0001]本专利技术涉及专性寄生真菌的保存
，特别是涉及一种小麦条锈菌夏孢子保存的方法。

技术介绍

[0002]由小麦条锈菌(Puccinia striiformis f.sp.tritici)引起的小麦条锈病是全球小麦上最重要的病害之一，也是我国小麦上危害最重的病害之一。具有发生范围广、流行的频率高、病原菌毒性变异快和危害损失重等特点。小麦条锈菌是专性寄生菌，不能人工培养，只能在活体上寄生。用于研究时只能收集小麦叶片上产生的夏孢子，而夏孢子存活的时间一般较短，在干燥的室温环境下大约可存活1个月。因此，夏孢子的保存是小麦条锈病研究中的重要环节，以保证夏孢子具有较高的存活力和致病性。尤其是在小麦抗病遗传研究中，经常面临利用同一个病原菌小种在同一年内的不同时期对不同遗传群体或小麦品种进行抗性鉴定。目前，小麦条锈菌的保存有3种方法，第一种是将条锈菌在感病小麦上周年繁殖；第二种方法是将新鲜的夏孢子抽真空后封管然后液氮保存，该方法可以维持夏孢子活力5～8年；第三种方法是将干燥后的夏孢子真空封闭，然后在冷冻条件下(
‑
20℃)保存，可以维持夏孢子活力3
‑
4年。
[0003]上述三种方法各有其缺点或不足。方法一，由于条锈菌夏孢子的萌发最适宜温度范围是5
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12℃，此方法需要在低温室内进行且每隔30d左右繁殖一次，耗费大量的人力、物力；方法二和三都需要特殊的抽真空和封管装置，且需要熟练的操作技能，一般实验室无法满足；此外，方法三在保存过程中需要定期补充液氮，费用昂贵。因此，需要建立一种简便有效、低成本的条锈菌保存方法来满足短期如1年内随时可以使用的夏孢子。

技术实现思路

[0004]为了解决上述问题，本专利技术提供了一种小麦条锈菌夏孢子保存的方法，采用本专利技术的方法降低夏孢子保存的难度和费用，实现短期内夏孢子的“即时性”。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0006]本专利技术提供了一种小麦条锈菌夏孢子保存的方法，步骤为：
[0007]1)将小麦条锈菌夏孢子与电子氟化液混合，得到菌悬浮保存液；
[0008]2)将所述步骤1)得到的菌悬浮保存液在4～6℃下保存。
[0009]优选的，所述步骤1)菌悬浮保存液中小麦条锈菌夏孢子的浓度为0.4mg/mL。
[0010]优选的，所述步骤1)小麦条锈菌夏孢子包括中国条锈病34号生理小种夏孢子。
[0011]本专利技术提供的方法保存的机理为：小麦条锈菌夏孢子浸没在电子氟化液中，通过隔绝空气保障夏孢子与水分的结合，避免夏孢子萌发。
[0012]有益效果：
[0013]采用本专利技术的方法降低夏孢子保存的难度和费用，实现短期内夏孢子的“即时性”。
附图说明
[0014]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0015]图1为保存的夏孢子悬浮液；
[0016]图2为保存12个月的小麦夏孢子接种感病品种铭贤169后的发病情况。
具体实施方式
[0017]一种小麦条锈菌夏孢子保存的方法，其特征在于，步骤为：
[0018]1)将小麦条锈菌夏孢子与电子氟化液混合，得到菌悬浮保存液；
[0019]2)将所述步骤1)得到的菌悬浮保存液在4～6℃下保存。
[0020]本专利技术将小麦条锈菌夏孢子与电子氟化液混合，得到菌悬浮保存液。本专利技术对所述电子氟化液的来源没有特殊限定，采用常规市售产品即可，如3M公司的Novec
TM
7100(甲基九氟丁基醚，C4F9OCH3，比利时生产)。在本专利技术中，所述小麦条锈菌夏孢子优选包括中国条锈病34号生理小种夏孢子。在本专利技术中，所述菌悬浮保存液中小麦条锈菌夏孢子的浓度优选为0.4mg/mL。本专利技术优选将所述菌悬浮保存液置于螺旋管中进行保存，本专利技术对所述螺旋管的规格没有特殊限定，本领域技术人员根据菌悬浮保存液体积常规选择即可。
[0021]本专利技术将得到的菌悬浮保存液在4～6℃下保存。本专利技术优选将所述菌悬浮保存液存放在冰箱冷藏室内保存。
[0022]为了进一步说明本专利技术，下面结合实施例对本专利技术进行详细地描述，但不能将它们理解为对本专利技术保护范围的限定。
[0023]实施例1
[0024]1、小麦条锈菌夏孢子的繁殖与收集：
[0025]取直径为9cm的花盆装营养土比例为自然土：营养土：蛭石的比例(5：2：1)，用于种植对条锈病表现高感的品种铭贤169。每盆30
‑
40粒种子，用营养土覆盖，花洒浇水，后转到人工气候室(昼15～20℃/夜11～15℃；光照时间12～14h/d，光强5000～6000lx)培养。待苗子长到1叶1心期时利用电子氟化液(Novec
TM 7100)将中国条锈菌34号生理小种(Chinese yellow rust race 34,CYR34)夏孢子配制成0.4mg/mL孢子悬浮液喷雾接种，每盆材料大约接种1mg夏孢子，接种后置于10℃接种间黑暗保湿24h，转到人工气候室(昼15～18℃/夜11～14℃；光照时间12～14h/d，光强5000～6000lx)继续潜育培养，15d后叶片上布满夏孢子堆，破裂产生大量夏孢子。将欲收夏孢子的苗的花盆横放在一圆柱形固定器，使之与收菌台形成20cm左右高度的距离，用接菌针从叶片根部轻轻搅动叶片，使小麦叶片上的孢子落入玻璃罩中，小心移出并轻轻敲打玻璃罩，促使菌呈线状以便于收集至称量纸中，摊开干燥。
[0026]2、小麦条锈菌夏孢子的保存：
[0027]1)干燥后的条锈菌夏孢子，利用网筛除去杂质后备用；
[0028]2)利用分析天平准确称取0.8mg夏孢子后装入螺旋管；
[0029]3)向装有夏孢子的螺旋管内加入2mL电子氟化液，摇匀，配置成0.4mg/mL的悬浮保存液；
[0030]4)将装有小麦条锈菌电子氟化液的螺旋管存放在冰箱冷藏室内(4～6℃)，保存15管。
[0031]3、保存的小麦条锈菌的繁殖：
[0032]条锈菌夏孢子分别在保存后的第0、1、4、7、10个月后分别接种感病品种铭贤169，操作步骤见“1、小麦条锈菌夏孢子的繁殖与收集”，培养15d后统计发病率，每个处理3次重复。
[0033]结果表明，在保存1、4、7、10个月后夏孢子的发病率与新鲜夏孢子(即0个月)无显著差异，见表1。因此，该方法克服了之前保存方法的缺点，操作简便、费用低廉。
[0034]表1不同保存时间的小麦条锈菌夏孢子接种麦苗的发病情况
[0035]保存时间(月)接种株数发病株数发病率(％)0969497.921939197.8549090100.00710510095.2410898696.63
[0036]尽管上述实施例对本专利技术做出了详尽的描述，但它仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部实施例，人本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种小麦条锈菌夏孢子保存的方法，其特征在于，步骤为：1)将小麦条锈菌夏孢子与电子氟化液混合，得到菌悬浮保存液；2)将所述步骤1)得到的菌悬浮保存液在4～6℃下保存。2.根据权利要求1所述的方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：王凤涛，蔺瑞明，冯晶，李翠红，
申请(专利权)人：中国农业科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：