一种用于酱油酿造的合成微生物组制造技术

本发明专利技术公开了一种一种用于酱油酿造的合成微生物组，属于发酵工程技术领域。本发明专利技术提供的合成微生物组包括：包括表皮葡萄球菌、粉状米勒酵母、曼氏毕赤酵母、易变假丝酵母、植物乳杆菌、类肠膜魏斯氏菌、乳酸片球菌、解淀粉芽孢杆菌、鲁氏接合酵母和米曲霉。该微生物组经过扩大培养后可应用于酱醪的发酵，可改良或提高酱油的质量，快速提高酱醪中有益菌的丰度，促进酱醪微生态的优化及稳定，提高酱油的品质，还可以用于生产低盐酱油，有广阔的应用前景。景。景。

【技术实现步骤摘要】
一种用于酱油酿造的合成微生物组


[0001]本专利技术涉及一种用于酱油酿造的合成微生物组，属于发酵工程


技术介绍

[0002]酱油起源于中国，由酱演变而来，生产历史悠久且具有民族特色，其发展凝聚着我国劳动人民的智慧。近年来，酱油因其味道鲜美、口感醇厚，其消费市场从亚洲扩张到欧美国家，深受各国人民喜爱。酱油是在丝状真菌(酱油曲霉或米曲霉)产生的复杂酶系作用下，把富含蛋白质和淀粉的原料(大豆和小麦)水解、催化成各种小分子物质，然后经过酱醪中多种微生物的发酵酿制而成。然而酱油的开放式自然发酵导致酱油容易受到环境、腐败微生物等因素的影响，从而导致酱油的品质不稳定。
[0003]一些研究者常采用“自上而下”的思路，通过在特定的培养基中传代驯化的方法富集酱醪微生物群落，使有益菌的比例不断增加，杂菌丰度不断减少，从而构建功能菌群。与自然发酵酱醪相比，其优点是可人工扩大培养，作为新酱醪的接种物。但是，这种方法富集的微生物群落中既有优质酱醪所需要有益的微生物，也有许多有害的微生物群落结构不够稳定，尤其是扩大培养时群落结构容易改变失衡，从而影响应用效果。此外，也有筛选单一菌种(比如产4
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乙基愈创木酚的易变假斯酵母)，经扩大培养后，添加至酱醪中提高其在酱醪中含量。但是，由于酱醪发酵是一个开放的发酵环境，本身含有复杂多样的各种微生物，单一菌种添加协同发酵虽然可以提高酱油的品质和风味，但是添加的时间、添加量以及不同的微生物，对酱油品质和风味改善都有不同，并不能达到酱油的可控发酵。近年来，兴起一种“自下而上”的构建复合菌剂的新策略，使用自然产生或工程微生物组装设计的微生物组合，通过多个微生物之间的相互作用构建合成微生物组，实现单一菌种无法完成的精准调控和提高酱油品质。通过实验室试验确定功能后，添加到环境中，可快速发挥其生物性能，起到生态调控或群落优化的目的。合成微生物群落结构更加简单稳定，没有冗余微生物，易于扩大培养；同时又比单一菌种的环境适应性强，可以实现一些单一菌种无法完成的功能。因此，从酱醪发酵体系中，如自然发酵酱醪中分离相应的功能菌，进行设计和组合，构建合成微生物组，用于酱醪的可控发酵是一种有潜力的策略。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供了一种用于酱油发酵的合成微生物组，包括以下微生物：
[0005](1)表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)HC
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1，已于2023年4月6日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2023465；
[0006](2)粉状米勒酵母(Millerozyma farinosa)JL
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21，已于2023年4月6日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2023466；
[0007](3)曼氏毕赤酵母(Pichia manshurica)JL
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12，已于2023年4月6日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2023467；
[0008](4)易变假丝酵母(Candida versatilis)JL
‑
19，已于2023年4月10日保藏于中国
典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2023511；
[0009](5)植物乳杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)JL
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20，已于2023年4月10日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2023512；
[0010](6)类肠膜魏斯氏菌(Weissella paramesenteroides)JL
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5，已于2021年6月9日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2021707，并公开于公开号为CN113913332A的专利申请文件中；
[0011](7)乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)WT
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1，已于2022年12月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO：26263；
[0012](8)解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)JDF
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2，已于2021年6月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2021737公开于公开号为CN113913332A的专利申请文件中；
[0013](9)鲁氏接合酵母(Zygosaccharomyces rouxii)ZQ01，公开于《酱油中氨基甲酸乙酯的产生机制和消除策略研究》，申请人承诺自申请日起20年内向公众发放该生物材料；
[0014](10)米曲霉(Aspergillus oryzae)沪酿3.042：购自于中国微生物保藏中心，货号：Bio
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52622。
[0015]在一种实施方式中，所述合成微生物组的总细菌浓度保持在1
×
107～1
×
109CFU/mL，总真菌的浓度保持在1
×
106～1
×
107CFU/mL。
[0016]在一种实施方式中，所述合成微生物组中，真菌和细菌的数量比为1:1；其中，真菌的相对丰度为：A.oryzae沪酿3.042 20％～30％；Z.rouxii ZQ01 10％～20％；C.versatilis JL
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19
[0017]10％～20％；P.manshurica JL
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12 5％～10％；M.faronisa JL
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21 5％～10％；细菌相对丰度：W.paramesenteroides JL
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5 20％～30％；P.acidilactici WT
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1 10％～20％；L.plantarum JL
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20
[0018]10％～20％；B.amyloliquefaciens JDF
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2 5％～10％；S.epidermidis HC
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1 5％～10％。
[0019]本专利技术还要求保护所述合成微生物组的制备方法。
[0020]在一种实施方式中，所述合成微生物组的构建包括如下步骤：
[0021]S1：将A.oryzae沪酿3.042、Z.rouxii ZQ01、C.versatilis JL
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19、P.manshurica JL
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12和M.faronisa JL
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21接种到YPD培养基中，30～35℃摇床220rpm/min培养3～5天后，按等比例混合得到真菌复合菌液；
[0022]S2：将真菌复合菌液连续传代20次，即获得稳定的真菌复合菌液，其中，A.oryza本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于酱油发酵的合成微生物组，其特征在于，包括表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)、粉状米勒酵母(Millerozyma farinosa)、曼氏毕赤酵母(Pichia manshurica)、易变假丝酵母(Candida versatilis)、植物乳杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)、类肠膜魏斯氏菌(Weissella paramesenteroides)、乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、鲁氏接合酵母(Zygosaccharomyces rouxii)和米曲霉(Aspergillus oryzae)。2.根据权利要求1所述的合成微生物组，其特征在于，包括以下微生物：(1)表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)HC
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1，已于2023年4月6日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2023465；(2)粉状米勒酵母(Millerozyma farinosa)JL
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21，已于2023年4月6日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2023466；(3)曼氏毕赤酵母(Pichia manshurica)JL
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12，已于2023年4月6日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2023467；(4)易变假丝酵母(Candida versatilis)JL
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19，已于2023年4月10日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2023511；(5)植物乳杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)JL
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20，已于2023年4月10日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2023512；(6)类肠膜魏斯氏菌(Weissella paramesenteroides)JL
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5，已于2021年6月9日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2021707；(7)乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)WT
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1，已于2022年12月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO：26263；(8)解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)JDF
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2，已于2021年6月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 202173；(9)鲁氏接合酵母(Zygosaccharomyces rouxii)ZQ01；(10)米曲霉(Aspergillus oryzae)沪酿3.042。3.根据权利要求1或2所述的合成微生物组，其特征在于，所述合成微生物组的总细菌浓度为1
×
107～1
×
109CFU/mL，总真菌的浓度为1
×
106～1
×
107CFU/mL。4.一种制备权利要求2或3所述合成微生物组的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：将A.oryzae沪酿3.042、Z.rouxii ZQ01、C.versatilis JL
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【专利技术属性】
技术研发人员：方芳，胡光耀，韦林艳，堵国成，陈坚，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：