一株酸鱼乳杆菌PKC6及其应用制造技术

本发明专利技术属于微生物技术领域，具体涉及一株酸鱼乳杆菌PKC6及其应用。该酸鱼乳杆菌PKC6保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.27201。本发明专利技术筛选出的新菌株酸鱼乳杆菌PKC6，对庆大霉素、多粘菌素B、万古霉素、卡那霉素和诺氟沙星有耐药性，对氨苄西林、青霉素、头孢氨苄和多西环素有敏感性，且对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌都有很好的抑制效果；本发明专利技术筛选的菌株，同复合酶进行复配后，共发酵棕榈粕后，能够大大提高发酵产物中的营养成分含量，并对饲养动物的肠道发育均有较明显的促进效果，从而达到提高饲料的适口性、促进肠道发育的目的。促进肠道发育的目的。促进肠道发育的目的。

【技术实现步骤摘要】
一株酸鱼乳杆菌PKC6及其应用


[0001]本专利技术属于微生物
，具体涉及一株酸鱼乳杆菌PKC6及其应用。

技术介绍

[0002]近年来，饲料出现供应不足和价格上涨等现象，使得畜牧业的生产成本不断增加，严重制约了畜牧业的发展。玉米、豆粕等常规饲料原料的价格上涨，迫使人们尝试使用一些廉价的农副产品和工业废渣来代替大豆等饲料原料。
[0003]棕榈粕（Palm kernel cake，PKC）因其产量丰富和价格低廉，成为人们关注的对象。PKC粗蛋白含量在16%左右，介于大豆和玉米之间，其粗脂肪含量大于两者，所以将其归类于能量饲料，而且棕榈粕营养成分类似于玉米麸皮，其蛋白含量被认为足以满足大多数反刍动物的需求。然而，棕榈粕中的碳水化合物大多是非淀粉多糖，且大部分是以β
‑
甘露聚糖为主的抗营养因子。这些抗营养因子的存在，限制了畜禽对营养物质的消化利用。通过微生物发酵方式可以降解棕榈粕中的抗营养物质，改善其营养性能，提高适口性，提高饲料利用率，实现节本增效。
[0004]目前，在畜牧行业，饲料原料供给不足问题尤为突出，所以针对饲用酶这个问题的研究，发挥饲用酶制剂的优势来解决养殖中的饲料原料的供给问题，成为了该行业亟待解决的问题。

技术实现思路

[0005]针对现有技术中存在的问题，本专利技术提供了一株酸鱼乳杆菌PKC6。
[0006]本专利技术还提供了上述酸鱼乳杆菌PKC6在发酵棕榈粕中的应用。
[0007]本专利技术为了实现上述目的所采用的技术方案为：本专利技术提供了一株酸鱼乳杆菌PKC6，所述酸鱼乳杆菌PKC6保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO. 27201。
[0008]本专利技术还提供了一种酸鱼乳杆菌PKC6在发酵棕榈粕中的应用。
[0009]本专利技术的另一目的为提供了一种含有上述酸鱼乳杆菌PKC6的菌酶组合制剂，所述菌酶组合制剂为3
×
106cfu/g酸鱼乳杆菌+1g/kg复合酶。
[0010]进一步的，上述菌酶组合制剂中复合酶的酶谱组成为：本专利技术还提供了一种上述菌酶组合制剂在发酵棕榈粕中的应用。
[0011]本专利技术的有益效果为：（1）本专利技术筛选出的新菌株酸鱼乳杆菌PKC6，对庆大霉素、多粘菌素B、万古霉素、
卡那霉素和诺氟沙星有耐药性，对氨苄西林、青霉素、头孢氨苄和多西环素有敏感性，且对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌都有很好的抑制效果；（2）本专利技术筛选的菌株，同复合酶进行复配后，制备得到的菌酶组合制剂，具有协同增效作用，共发酵棕榈粕后，能够大大提高发酵产物中的营养成分含量，并对饲养动物的肠道发育均有较明显的促进效果，从而达到提高饲料的适口性、促进肠道发育的目的；（3）本专利技术提供的筛选方法简单、高效；筛选的菌株在制备发酵菌剂、进一步制备饲料等方面具有良好的应用前景，将农副产物变废为宝，拓宽了饲料来源，降低了养殖成本，缓解了饲料供应不足的矛盾，有利于畜牧业的发展。
[0012]保藏信息保藏时间：2023年04月25日，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：CGMCC NO. 27201，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101分类命名：酸鱼乳杆菌Ligilactobacillus acidipiscis。
附图说明
[0013]图1为实施例1筛选的菌株形貌图；图2为实施例1筛选的菌株的16SrDNA构建的系统发育树；图3为实施例1筛选的菌株的耐药图；图4为实施例1筛选的菌株溶血性结果图；图5为实施例1筛选的菌株抑菌效果图；图6为实施例1筛选的菌株的耐酸性对比图；图7为实施例1筛选的菌株的生长曲线和产酸曲线；图8为实施例1筛选的菌株发酵过程中pH 的变化速率图；图9为发酵过程中样品pH结果对比图；图10为发酵过程中样品活菌数量对比图。
具体实施方式
[0014]下面通过具体的实施例对本专利技术的技术方案作进一步的解释和说明。
[0015]实验过程中，为了方便标记酸鱼乳杆菌PKC6均编号为M6,附图中M6即为本专利技术保藏的戊糖片球菌PKC6。
[0016]实施例1
①
分离菌株分别从棕榈粕原料各处取一些样品，混合均匀，称取 1 g 样品加至 9 mL 无菌生理盐水中，150 r/min振荡2 h，得到稀释10
‑
1的样品悬液，然后取1 mL样品悬液加到装有9 mL无菌生理盐水的试管中，混匀5 min，即为稀释10
‑2的样品悬液，重复以上步骤稀释至10
‑7。10
‑6和10
‑7两个梯度样品悬液涂布于含0.3%碳酸钙的MRS固体平板，37℃恒温箱中培养48 h。用接种环挑取产生碳酸钙溶解圈的菌落，用平板划线法进行分离培养，37℃恒温箱中培
养48h，连续划线培养3代，直至菌落形态一致，完全纯化，挑取单菌落进行革兰氏染色镜检。
[0017]筛选得到的酸鱼乳杆菌PKC6呈革兰氏染色：杆状，无芽孢，单个排列或者成对排列，革兰氏阳性杆菌，具体如图1所示。
[0018]②
生化鉴定用细菌微量生化鉴定管测定筛选菌株的一些生理生化特性，用接种针从培养基上挑取单一菌落分别接种到各个生化反应管中，37℃恒温培养箱培养24 h，观察生化管的颜色变化，判定标准参照细菌生化微量鉴定管说明书。
③
16S r DNA序列的测定及分析配制裂解液，取1 mL裂解液到 1.5 mL离心管中，用接种环挑取菌种的单菌落接种到上述离心管，振荡混匀，37℃培养30 min，使用基因组 DNA 提取试剂盒提取菌株的DNA。以细菌基因组的 DNA 为模板，采用细菌 16S rDNA 通用引物进行 PCR 扩增。菌株的16S r DNA扩增引物序列为：上游引物27F：5
’‑
AGAGTTTGATCCTGGCTCAG
‑3’
，下游引物1492R：5
’‑
TACGGYTACCTTGTTACGACTT
‑3’
。
[0019]PCR反应体系如下：表1PCR 扩增反应条件：98℃ 预变性 2 min；98℃变性 10 s，60℃退火 15 s，72℃ 延伸 10 s，72
°
C最后延伸5 min，35 个循环。
[0020]PCR扩增结束后，取5
ꢀµ
L反应产物，以1%琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。收集扩增成功的PCR产物，及时送于北京擎科生物科技有限公司（青岛）进行测序分析。将16S r DNA基因序列与NCBI中的序列进行BLAST比对，分析菌株与数据库中菌株的同源性，确定菌株的种属，以同源性最高的菌株序列作参考序列，采用软件MEGA 5.0中Clustal W进行校准排齐，并绘制菌株的系统进化树。
[0021]④
16S rDNA结果酸鱼乳杆菌PKC6与相似菌株的同源性达100 %及以上，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株酸鱼乳杆菌PKC6，其特征在于，所述酸鱼乳杆菌PKC6保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO. 27201。2.一种如权利要求1所述的酸鱼乳杆菌PKC6在发酵棕榈粕中的应用。3.一种含有如权利要求1所述的酸鱼乳杆菌PKC6的菌酶组合制...

【专利技术属性】
技术研发人员：张燕，姜富贵，岳寿松，宋恩亮，赵桂省，吴艳秋，蒋文博，成海建，游伟，胡鑫，于金慧，边斐，
申请(专利权)人：山东省农业科学院，
类型：发明
国别省市：