用于ADAR介导的SERPINA1编辑的方法和组合物技术

本发明专利技术涉及用于编辑SERPINA1多核苷酸例如包含与α1抗胰蛋白酶缺乏症相关的SNP的SERPINA1多核苷酸的方法和组合物。本发明专利技术还涉及用于治疗或预防受试者的α1抗胰蛋白酶缺乏症的方法和组合物。症的方法和组合物。症的方法和组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于ADAR介导的SERPINA1编辑的方法和组合物
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年7月17日提交的美国临时申请第62/705,838号和2020年5月28日提交的美国临时申请第62/704,793号的优先权权益，所述申请各自出于任何目的以引用方式并入本文。

技术介绍

[0003]SERPINA1基因编码丝氨酸蛋白酶抑制剂α
‑
1抗胰蛋白酶(A1AT)。A1AT保护组织免受某些炎症酶的影响，所述酶包括中性粒细胞弹性蛋白酶。A1AT缺乏症(α1抗胰蛋白酶缺乏症，A1AD)可导致中性粒细胞弹性蛋白酶过度分解肺中的弹性蛋白。这可能会导致肺部弹性降低以及随后的呼吸系统并发症，包括肺气肿和慢性阻塞性肺病(COPD)。突变A1AT也可以在肝脏中积聚，从而导致肝硬化和肝衰竭。
[0004]A1AD可由E342K突变引起，所述突变与SNP rs28929474(A)相关。为了治疗可能导致肝衰竭和/或肺气肿的α1抗胰蛋白酶缺乏症(A1AD)，持续需要选择性且有效编辑SERPINA1基因并纠正所述基因中的任何致病性本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种编辑SERPINA1多核苷酸的方法，所述SERPINA1多核苷酸包含与可能导致肝衰竭或肺气肿的α1抗胰蛋白酶缺乏症相关的单核苷酸多态性(SNP)，所述方法包括使所述SERPINA1多核苷酸与指导寡核苷酸接触，从而编辑所述SERPINA1多核苷酸，所述指导寡核苷酸能够实现与α1抗胰蛋白酶缺乏症相关的SNP的作用于RNA的腺苷脱氨酶(ADAR)介导的腺苷到肌苷的改变。2.如权利要求1所述的方法，其中所述SERPINA1多核苷酸与所述指导寡核苷酸在细胞中接触。3.如权利要求2所述的方法，其中所述细胞内源性表达ADAR。4.如权利要求3所述的方法，其中所述ADAR是人ADAR。5.如权利要求4所述的方法，其中所述ADAR是人ADAR1。6.如权利要求4所述的方法，其中所述ADAR是人ADAR2。7.如权利要求2
‑
6中任一项所述的方法，其中所述细胞选自真核细胞、哺乳动物细胞和人细胞。8.如权利要求2
‑
7中任一项所述的方法，其中所述细胞是体内的。9.如权利要求2
‑
7中任一项所述的方法，其中所述细胞是离体的。10.一种治疗有需要的受试者的α1抗胰蛋白酶缺乏症的方法，所述方法包括鉴定在SERPINA1多核苷酸中具有与α1抗胰蛋白酶缺乏症相关的单核苷酸多态性(SNP)的受试者；使所述受试者的细胞中的所述SERPINA1多核苷酸与指导寡核苷酸接触，从而治疗所述受试者，所述指导寡核苷酸能够实现与α1抗胰蛋白酶缺乏症相关的SNP的作用于RNA的腺苷脱氨酶(ADAR)介导的腺苷到肌苷的改变。11.一种治疗有需要的受试者的α1抗胰蛋白酶缺乏症的方法，所述方法包括鉴定在SERPINA1多核苷酸中具有与α1抗胰蛋白酶缺乏症相关的单核苷酸多态性(SNP)的受试者；使细胞中的所述SERPINA1多核苷酸与指导寡核苷酸接触，所述指导寡核苷酸能够实现与α1抗胰蛋白酶缺乏症相关的SNP的作用于RNA的腺苷脱氨酶(ADAR)介导的腺苷到肌苷的改变，以及向所述受试者施用所述细胞，从而治疗所述受试者。12.如权利要求11所述的方法，其中所述细胞对于所述受试者是自体的、同种异体的或异种的。13.如权利要求10
‑
12中任一项所述的方法，其中所述受试者是人受试者。14.如权利要求1
‑
13中任一项所述的方法，其中所述指导寡核苷酸包含与SERPINA1 mRNA序列互补的核酸序列，所述SERPINA1mRNA序列包含与α1抗胰蛋白酶缺乏症相关的所述SNP。15.如权利要求1
‑
14中任一项所述的方法，其中所述寡核苷酸还包含一种或多种作用于RNA的腺苷脱氨酶(ADAR)
‑
募集结构域。16.如权利要求1
‑
15中任一项所述的方法，其中所述SERPINA1多核苷酸编码包含致病性氨基酸的SERPINA1蛋白，所述致病性氨基酸包含由所述SNP导致的位置342处的赖氨酸。17.如权利要求16所述的方法，其中所述腺苷到肌苷的改变用野生型氨基酸取代所述
致病性氨基酸。18.如权利要求17所述的方法，其中位置342处的所述野生型氨基酸包含谷氨酸。19.如权利要求1
‑
18中任一项所述的方法，其中所述指导寡核苷酸包含以下结构：[A
m
]
‑
X1‑
X2‑
X3‑
[B
n
]其中A和B各自是核苷酸；m和n各自独立地是1至50的整数；X1、X2和X3各自独立地是核苷酸，其中X1、X2或X3中的至少一个是替代性核苷酸。20.如权利要求1
‑
19中任一项所述的方法，其中所述指导寡核苷酸包含以下结构：[A
m
]
‑
X1‑
X2‑
X3‑
[B
n
]其中A和B各自是核苷酸；m和n各自独立地是1至50的整数；X1、X2和X3各自独立地是核苷酸，其中X1、X2或X3中的至少一个具有式I
‑
V中任一者的结构：其中N1是氢或核碱基；R1是羟基、卤素或C1‑
C6烷氧基；R2是氢、羟基、卤素或C1‑
C6烷氧基；R3是氢、羟基、卤素或C1‑
C6烷氧基；R4是氢、羟基、卤素或C1‑
C6烷氧基；并且R5是氢、羟基、卤素或C1‑
C6烷氧基。21.如权利要求20所述的方法，其中R4是氢并且R5不是氢或羟基，R5是氢并且R4不是氢，或者R5是羟基并且R4不是氢。22.如权利要求20或权利要求21所述的方法，其中[A
m
]和/或[B
n
]的至少80％的核苷酸包括核碱基、糖和核苷间键。23.如权利要求20至22中任一项所述的方法，其中R1是羟基、卤素或OCH3。24.如权利要求20至23中任一项所述的方法，其中R2是氢。25.如权利要求20至24中任一项所述的方法，其中X1、X2或X3中的至少一个具有式I、式II或式V的结构；并且X1、X2或X3均不具有式IV或式III的结构。26.如权利要求20至25中任一项所述的方法，其中X1、X2或X3中的至少一个具有式I或式II的结构；并且X1、X2或X3均不具有式III、式IV或式V的结构。27.如权利要求20至26中任一项所述的方法，其中所述卤素是氟。28.如权利要求20至27中任一项所述的方法，其中X1、X2和X3中的至少一个具有式I的结构，其中R1是氟，并且N1是核碱基。29.如权利要求28所述的方法，其中X1具有式I的结构，其中R1是氟，并且N1是核碱基。
30.如权利要求28或29所述的方法，其中X2具有式I的结构，其中R1是氟，并且N1是核碱基。31.如权利要求28至30中任一项所述的方法，其中X3具有式I的结构，其中R1是氟，并且N1是核碱基。32.如权利要求20至27中任一项所述的方法，其中X1、X2和X3中的至少一个具有式I的结构，其中R1是羟基，并且N1是核碱基。33.如权利要求32所述的方法，其中X1具有式I的结构，其中R1是羟基，并且N1是核碱基。34.如权利要求32或33所述的方法，其中X2具有式I的结构，其中R1是羟基，并且N1是核碱基。35.如权利要求32至34中任一项所述的方法，其中X3具有式I的结构，其中R1是羟基，并且N1是核碱基。36.如权利要求20至27中任一项所述的方法，其中X1、X2和X3中的至少一个具有式I的结构，其中R1是甲氧基，并且N1是核碱基。37.如权利要求36所述的方法，其中X1具有式I的结构，其中R1是甲氧基，并且N1是核碱基；并且X2和X3各自是脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸。38.如权利要求36或37所述的方法，其中X2具有式I的结构，其中R1是甲氧基，并且N1是核碱基。39.如权利要求36至38中任一项所述的方法，其中X3具有式I的结构，其中R1是甲氧基，并且N1是核碱基。40.如权利要求20至27中任一项所述的方法，其中X1、X2和X3中的至少一个具有式II的结构，其中R2是氢，并且N1是核碱基。41.如权利要求40所述的方法，其中X2具有式II的结构，其中R2是氢，并且N1是核碱基。42.如权利要求20至25中任一项所述的方法，其中X1和X2中的至少一个具有式V的结构。43.如权利要求42所述的方法，其中X2具有式V的结构，其中R4是氢，并且R5是氢。44.如权利要求42所述的方法，其中X2具有式V的结构，其中R4是氢，并且R5是羟基。45.如权利要求42所述的方法，其中X1具有式V的结构，其中R4是氢，并且R5是氢。46.如权利要求42所述的方法，其中X1具有式V的结构，其中R4是氢，并且R5是羟基。47.如权利要求42所述的方法，其中X2具有式V的结构，其中R4是氢，并且R5是甲氧基。48.如权利要求20至47中任一项所述的方法，其中当X1具有式I至V中任一者的结构时，X2和X3各自独立地是核糖核苷酸、2
′‑
O
‑
C1‑
C6烷基
‑
核苷酸、2
′‑
氨基
‑
核苷酸、阿拉伯核酸
‑
核苷酸、双环
‑
核苷酸、2
′‑
F
‑
核苷酸、2
′‑
O
‑
甲氧基乙基
‑
核苷酸、限制性乙基
‑
核苷酸、LNA
‑
核苷酸或脱氧核糖核苷酸；当X2具有式I至V中任一者的结构时，X1和X3各自独立地是核糖核苷酸、2
′‑
O
‑
C1‑
C6烷基
‑
核苷酸、2
′‑
氨基
‑
核苷酸、阿拉伯核酸
‑
核苷酸、双环
‑
核苷酸、2
′‑
F
‑
核苷酸、2
′‑
O
‑
甲氧基乙基
‑
核苷酸、限制性乙基
‑
核苷酸、LNA
‑
核苷酸或脱氧核糖核苷酸；当X3具有式I至V中任一者的结构时，X1和X2各自独立地是核糖核苷酸、2
′‑
O
‑
C1‑
C6烷基
‑
核苷酸、2
′‑
氨基
‑
核苷酸、阿拉伯核酸
‑
核苷酸、双环
‑
核苷酸、2
′‑
F
‑
核苷酸、2
′‑
O
‑
甲氧基乙基
‑
核苷酸、限制性乙基
‑
核苷酸、LNA
‑
核苷酸或脱氧核糖核苷酸；当X1和X2各自具有式I至V中任一者的结构时，X3是核糖核苷酸、2
′‑
O
‑
C1‑
C6烷基
‑
核苷酸、2
′‑
氨基
‑
核苷酸、阿拉伯核酸
‑
核苷酸、双环
‑
核苷酸、2
′‑
F
‑
核苷酸、2
′‑
O
‑
甲氧基乙基
‑
核苷酸、限制性乙基
‑
核苷酸、LNA
‑
核
苷酸或脱氧核糖核苷酸；当X1和X3各自具有式I至V中任一者的结构时，X2是核糖核苷酸、2
′‑
O
‑
C1‑
C6烷基
‑
核苷酸、2
′‑
氨基
‑
核苷酸、阿拉伯核酸
‑
核苷酸、双环
‑
核苷酸、2
′‑
F
‑
核苷酸、2
′‑
O
‑
甲氧基乙基
‑
核苷酸、限制性乙基
‑
核苷酸、LNA
‑
核苷酸或脱氧核糖核苷酸；并且当X2和X3各自具有式I至V中任一者的结构时，X1是核糖核苷酸、2
′‑
O
‑
C1‑
C6烷基
‑
核苷酸、2
′‑
氨基
‑
核苷酸、阿拉伯核酸
‑
核苷酸、双环
‑
核苷酸、2
′‑
F
‑
核苷酸、2
′‑
O
‑
甲氧基乙基
‑
核苷酸、限制性乙基
‑
核苷酸、LNA
‑
核苷酸或脱氧核糖核苷酸。49.如权利要求48所述的方法，其中当X1具有式I至V中任一者的结构时，X2和X3各自独立地是核糖核苷酸、2
’‑
F
‑
核苷酸、2
’‑
O
‑
甲氧基乙基
‑
核苷酸或脱氧核糖核苷酸；当X2具有式I至V中任一者的结构时，X1和X3各自独立地是核糖核苷酸、2
’‑
F
‑
核苷酸、2
’‑
O
‑
甲氧基乙基
‑
核苷酸或脱氧核糖核苷酸；当X3具有式I至V中任一者的结构时，X1和X2各自独立地是核糖核苷酸、2
’‑
F
‑
核苷酸、2
’‑
O
‑
甲氧基乙基
‑
核苷酸或脱氧核糖核苷酸；当X1和X2各自具有式I至V中任一者的结构时，X3是核糖核苷酸、2
’‑
F
‑
核苷酸、2
’‑
O
‑
甲氧基乙基
‑
核苷酸或脱氧核糖核苷酸；当X1和X3各自具有式I至V中任一者的结构时，X2是核糖核苷酸、2
’‑
F
‑
核苷酸、2
’‑
O
‑
甲氧基乙基
‑
核苷酸或脱氧核糖核苷酸；并且当X2和X3各自具有式I至V中任一者的结构时，X1是核糖核苷酸、2
’‑
F
‑
核苷酸、2
’‑
O
‑
甲氧基乙基
‑
核苷酸或脱氧核糖核苷酸。50.如权利要求49所述的方法，其中当X1具有式I至V中任一者的结构时，X2和X3各自是脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸；当X2具有式I至V中任一者的结构时，X1和X3各自是脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸；当X3具有式I至V中任一者的结构时，X1和X2各自是脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸；当X1和X2各自具有式I至V中任一者的结构时，X3是脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸；当X1和X3各自具有式I至V中任一者的结构时，X2是脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸；并且当X2和X3各自具有式I至V中任一者的结构时，X1是脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸。51.如权利要求20至40和42至50中任一项所述的方法，其中X1、X2和X3均不具有式II的结构，其中N1是核碱基。52.如权利要求51所述的方法，其中X1、X2和X3均不具有式II的结构，其中N1是胞嘧啶核碱基。53.如权利要求20至44和47至52中任一项所述的方法，其中X1包含尿嘧啶或胸腺嘧啶核碱基。54.如权利要求53所述的方法，其中X1包含尿嘧啶核碱基。55.如20至44和47至52中任一项所述的方法，其中X1包含次黄嘌呤核碱基。56.如权利要求20至44和47至52中任一项所述的方法，其中X1包含胞嘧啶核碱基。57.如权利要求20至56中任一项所述的方法，其中X3包含鸟嘌呤核碱基。58.如权利要求20至56中任一项所述的方法，其中X3包含次黄嘌呤核碱基。59.如权利要求20至56中任一项所述的方法，其中X3包含腺嘌呤核碱基。60.如权利要求20至42、46、47和48至59中任一项所述的方法，其中X2包含胞嘧啶或5
‑
甲基胞嘧啶核碱基。61.如权利要求60所述的方法，其中X2包含胞嘧啶核碱基。62.如权利要求20至24中任一项所述的方法，其中X2具有式I
‑
V中任一者的结构。63.如权利要求20至62中任一项所述的方法，其中X2不是2
’‑
O
‑
甲基
‑
核苷酸。64.如权利要求63所述的方法，其中X1、X2和X3不是2
’‑
O
‑
甲基
‑
核苷酸。
65.如权利要求1
‑
19中任一项所述的方法，其中所述指导寡核苷酸包含以下结构：[A
m
]
‑
X1‑
X2‑
X3‑
[B
n
]其中A和B各自是核苷酸；m和n各自独立地是1至50的整数；X1、X2和X3各自独立地是核苷酸，其中X1、X2或X3中的至少一个具有式VI
‑
XI中任一者的结构：其中N1是氢或核碱基；R
12
是氢、羟基、氟、卤素、C1‑
C6烷基、C1‑
C6杂烷基或C1‑
C6烷氧基；R
13
是氢或C1‑
C6烷基，其中X1、X2或X3中的至少一个具有式VI
‑
IX中任一者的结构。66.如权利要求65所述的方法，其中[A
m
]和/或[B
n
]的至少80％的核苷酸包括核碱基、糖和核苷间键。67.如权利要求65或66所述的方法，其中R
12
是氢、卤素、C1‑
C6烷基或C1‑
C6杂烷基。68.如权利要求65至67中任一项所述的方法，其中所述卤素是氟。69.如权利要求65至68中任一项所述的方法，其中R
12
是氢或C1‑
C6烷基。70.如权利要求65至69中任一项所述的方法，其中R
12
是氢。71.如权利要求65至70中任一项所述的方法，其中X1、X2和X3中的至少一个具有式VI的结构，并且N1是核碱基。72.如权利要求71所述的方法，其中X1具有式VI的结构，并且N1是核碱基。73.如权利要求71或72所述的方法，其中X2具有式VI的结构，并且N1是核碱基。74.如权利要求65至70中任一项所述的方法，其中X1、X2和X3中的至少一个具有式VII的结构，并且N1是核碱基。75.如权利要求74所述的方法，其中X1具有式VII的结构，并且N1是核碱基。76.如权利要求74或75所述的方法，其中X2具有式VII的结构，并且N1是核碱基。77.如权利要求65至70中任一项所述的方法，其中X1、X2和X3中的至少一个具有式IX的结构，并且N1是核碱基。
78.如权利要求77所述的方法，其中X1具有式IX的结构，并且N1是核碱基。79.如权利要求77或78所述的方法，其中X2具有式IX的结构，并且N1是核碱基。80.如权利要求65至70中任一项所述的方法，其中X1、X2和X3中的至少一个具有式VIII的结构，并且N1是核碱基。81.如权利要求80所述的方法，其中X1具有式VIII的结构，并且N1是核碱基。82.如权利要求80或81所述的方法，其中X2具有式VIII的结构，并且N1是核碱基。83.如权利要求65至72和74至82中任一项所述的方法，其中X2不具有式VI的结构。84.如权利要求65至83中任一项所述的方法，其中X3不具有式VI的结构。85.如权利要求65至75和77至84中任一项所述的方法，其中X2不具有式VII的结构。86.如权利要求65至85中任一项所述的方法，其中X3不具有式VII的结构。87.如权利要求65至78和80至86中任一项所述的方法，其中X2不具有式IX的结构。88.如权利要求65至70中任一项所述的方法，其中X2具有式VI或式VII的结构。89.如权利要求65至88中任一项所述的方法，其中当X1具有式VI至XI中任一者的结构时，X2和X3各自独立地是核糖核苷酸、2
′‑
O
‑
C1‑
C6烷基
‑
核苷酸、2
′‑
氨基
‑
核苷酸、阿拉伯核酸
‑
核苷酸、双环
‑
核苷酸、2
′‑
F
‑
核苷酸、2
′‑
O
‑
甲氧基乙基
‑
核苷酸、限制性乙基
‑
核苷酸、LNA
‑
核苷酸或脱氧核糖核苷酸；当X2具有式VI至XI中任一者的结构时，X1和X3各自独立地是核糖核苷酸、2
′‑
O
‑
C1‑
C6烷基
‑
核苷酸、2
′‑
氨基
‑
核苷酸、阿拉伯核酸
‑
核苷酸、双环
‑
核苷酸、2
′‑
F
‑
核苷酸、2
′‑
O
‑
甲氧基乙基
‑
核苷酸、限制性乙基
‑
核苷酸、LNA
‑
核苷酸或脱氧核糖核苷酸；当X3具有式VI至XI中任一者的结构时，X1和X2各自独立地是核糖核苷酸、2
′‑
O
‑
C1‑
C6烷基
‑
核苷酸、2
′‑
氨基
‑
核苷酸、阿拉伯核酸
‑
核苷酸、双环
‑
核苷酸、2
′‑
F
‑
核苷酸、2
′‑
O
‑
甲氧基乙基
‑
核苷酸、限制性乙基
‑
核苷酸、LNA
‑
核苷酸或脱氧核糖核苷酸；当X1和X2各自具有式VI至XI中任一者的结构时，X3是核糖核苷酸、2
′‑
O
‑
C1‑
C6烷基
‑
核苷酸、2
′‑
氨基
‑
核苷酸、阿拉伯核酸
‑
核苷酸、双环
‑
核苷酸、2
′‑
F
‑
核苷酸、2
′‑
O
‑
甲氧基乙基
‑
核苷酸、限制性乙基
‑
核苷酸、LNA
‑
核苷酸或脱氧核糖核苷酸；当X1和X3各自具有式VI至XI中任一者的结构时，X2是核糖核苷酸、2
′‑
O
‑
C1‑
C6烷基
‑
核苷酸、2
′‑
氨基
‑
核苷酸、阿拉伯核酸
‑
核苷酸、双环
‑
核苷酸、2
′‑
F
‑
核苷酸、2
′‑
O
‑
甲氧基乙基
‑
核苷酸、限制性乙基
‑
核苷酸、LNA
‑
核苷酸或脱氧核糖核苷酸；并且当X2和X3各自具有式VI至XI中任一者的结构时，X1是核糖核苷酸、2
′‑
O
‑
C1‑
C6烷基
‑
核苷酸、2
′‑
氨基
‑
核苷酸、阿拉伯核酸
‑
核苷酸、双环
‑
核苷酸、2
′‑
F
‑
核苷酸、2
′‑
O
‑
甲氧基乙基
‑
核苷酸、限制性乙基
‑
核苷酸、LNA
‑
核苷酸或脱氧核糖核苷酸。90.如权利要求89所述的方法，其中当X1具有式VI至XI中任一者的结构时，X2和X3各自独立地是核糖核苷酸、2
’‑
F
‑
核苷酸、2
’‑
O
‑
甲氧基乙基
‑
核苷酸或脱氧核糖核苷酸；当X2具有式VI至XI中任一者的结构时，X1和X3各自独立地是核糖核苷酸、2
’‑
F
‑
核苷酸、2
’‑
O
‑
甲氧基乙基
‑
核苷酸或脱氧核糖核苷酸；当X3具有式VI至XI中任一者的结构时，X1和X2各自独立地是核糖核苷酸、2
’‑
F
‑
核苷酸、2
’‑
O
‑
甲氧基乙基
‑
核苷酸或脱氧核糖核苷酸；当X1和X2各自具有式VI至XI中任一者的结构时，X3是核糖核苷酸、2
’‑
F
‑
核苷酸、2
’‑
O
‑
甲氧基乙基
‑
核苷酸或脱氧核糖核苷酸；当X1和X3各自具有式VI至XI中任一者的结构时，X2是核糖核苷酸、2
’‑
F
‑
核苷酸、2
’‑
O
‑
甲氧基乙基
‑
核苷酸或脱氧核糖核苷酸；并且当X2和X3各自具有式VI至XI中任一者的结构时，X1是核糖核苷酸、2
’‑
F
‑
核苷酸、2
’‑
O
‑
甲氧基乙基
‑
核苷酸或脱氧核糖核苷酸。
91.如权利要求90所述的方法，其中当X1具有式VI至XI中任一者的结构时，X2和X3各自是脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸；当X2具有式VI至XI中任一者的结构时，X1和X3各自是脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸；当X3具有式VI至XI中任一者的结构时，X1和X2各自是脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸；当X1和X2各自具有式VI至XI中任一者的结构时，X3是脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸；当X1和X3各自具有式VI至XI中任一者的结构时，X2是脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸；并且当X2和X3各自具有式VI至XI中任一者的结构时，X1是脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸。92.如权利要求65至91中任一项所述的方法，其中X1包含次黄嘌呤核碱基。93.如权利要求65至91中任一项所述的方法，其中X1包含尿嘧啶核碱基。94.如权利要求65至91中任一项所述的方法，其中X1包含胞嘧啶核碱基。95.如权利要求65至94中任一项所述的方法，其中X3包含次黄嘌呤核碱基。96.如权利要求65至94中任一项所述的方法，其中X3包含鸟嘌呤核碱基。97.如权利要求65至94中任一项所述的方法，其中X3包含腺嘌呤核碱基。98.如权利要求65至97中任一项所述的方法，其中X2包含胞嘧啶核碱基。99.如权利要求65至97中任一项所述的方法，其中X2包含尿嘧啶核碱基。100.如权利要求65至97中任一项所述的方法，其中X2不包括核碱基。101.如权利要求65至100中任一项所述的方法，其中X2不是2
’‑
O
‑
甲基
‑
核苷酸。102.如权利要求65至101中任一项所述的方法，其中X1、X2和X3不是2
’‑
O
‑
甲基
‑
核苷酸。103.如权利要求1
‑
19中任一项所述的方法，其中所述指导寡核苷酸包含以下结构：[A
m
]
‑
X1‑
X2‑
X3‑
[B
n
]其中A和B各自是核苷酸；m和n各自独立地是1至50的整数；X1、X2和X3各自独立地是核苷酸，其中X1、X2和X3中的至少一个具有式XII
‑
XV中任一者的结构：其中N1是氢或核碱基；R6是氢、羟基或卤素；R7是氢、羟基、卤素或C1‑
C6烷氧基；R8为氢或卤素；R9是氢或羟基、卤素或C1‑
C6烷氧基；R
10
是氢或卤素；并且R
11
是氢或羟基、卤素或C1‑
C6烷氧基。104.如权利要求103所述的方法，其中[A
m
]和/或[B
n
]的至少80％的核苷酸包括核碱基、
糖和核苷间键。105.如权利要求103或104所述的方法，其中卤素是氟。106.如权利要求103至105中任一项所述的方法，其中C1‑
C6烷氧基是OCH3。107.如权利要求103至106中任一项所述的方法，其中X1、X2和X3中的至少一个具有式XIII的结构，其中R8和R9各自是氢。108.如权利要求107所述的方法，其中X1具有式XIII的结构，其中R8和R9各自是氢。109.如权利要求107或108所述的方法，其中X2具有式XIII的结构，其中R8和R9各自是氢。110.如权利要求103至106中任一项所述的方法，其中X2具有式XII
‑
XV中任一者的结构。111.如权利要求103至110中任一项所述的方法，其中当X1具有式XII
‑
XV中任一者的结构时，X2和X3各自独立地是核糖核苷酸、2
′‑
O
‑
C1‑
C6烷基
‑
核苷酸、2
′‑
氨基
‑
核苷酸、阿拉伯核酸
‑
核苷酸、双环
‑
核苷酸、2
’‑
F
‑
核苷酸、2
′‑
O
‑
甲氧基乙基
‑
核苷酸、限制性乙基
‑
核苷酸、LNA
‑
核苷酸或脱氧核糖核苷酸；当X2具有式XII
‑
XV中任一者的结构时，X1和X3各自独立地是核糖核苷酸、2
′‑
O
‑
C1‑
C6烷基
‑
核苷酸、2
′‑
氨基
‑
核苷酸、阿拉伯核酸
‑
核苷酸、双环
‑
核苷酸、2
′‑
F
‑
核苷酸、2
′‑
O
‑
甲氧基乙基
‑
核苷酸、限制性乙基
‑
核苷酸、LNA
‑
核苷酸或脱氧核糖核苷酸；当X3具有式XII
‑
XV中任一者的结构时，X1和X2各自独立地是核糖核苷酸、2
′‑
O
‑
C1‑
C6烷基
‑
核苷酸、2
′‑
氨基
‑
核苷酸、阿拉伯核酸
‑
核苷酸、双环
‑
核苷酸、2
′‑
F
‑
核苷酸、2
′‑
O
‑
甲氧基乙基
‑
核苷酸、限制性乙基
‑
核苷酸、LNA
‑
核苷酸或脱氧核糖核苷酸；当X1和X2各自具有式XII
‑
XV中任一者的结构时，X3是核糖核苷酸、2
′‑
O
‑
C1‑
C6烷基
‑
核苷酸、2
′‑
氨基
‑
核苷酸、阿拉伯核酸
‑
核苷酸、双环
‑
核苷酸、2
′‑
F
‑
核苷酸、2
′‑
O
‑
甲氧基乙基
‑
核苷酸、限制性乙基
‑
核苷酸、LNA
‑
核苷酸或脱氧核糖核苷酸；当X1和X3各自具有式XII
‑
XV中任一者的结构时，X2是核糖核苷酸、2
′‑
O
‑
C1‑
C6烷基
‑
核苷酸、2
′‑
氨基

【专利技术属性】
技术研发人员：S，
申请(专利权)人：科罗生物公司，
类型：发明
国别省市：