鼠曲草咖啡酰转移酶及其编码基因和应用制造技术

本发明专利技术涉及生物工程领域和医药领域，公开了酶PaBAHD及其编码的基因。鼠曲草咖啡酰基转移酶能够催化葡萄糖苷衍生物生成相应的咖啡酰基葡萄糖苷，尤其是生成补体抑制活性成分酰化黄酮苷如木犀草素

【技术实现步骤摘要】
鼠曲草咖啡酰转移酶及其编码基因和应用


[0001]本专利技术涉及生物工程领域和医药领域，具体公开了鼠曲草咖啡酰转移酶BAHD蛋白及其编码基因和应用。

技术介绍

[0002]补体系统是人体重要的免疫防御系统之一。在正常的生理条件下，补体的功能主要是攻击外来病原和清除免疫复合物，并维持机体平衡。然而补体系统的非正常激活会引起人体免疫系统的过度反应，导致人体自身正常组织的损伤和炎症反应，与感染、自身免疫系统疾病、肿瘤等多种疾病密切关联。因此，补体抑制药物的开发受到极大的关注。近年来，随着中草药等天然资源的广泛开发和深入研究，从天然植物中分离补体抑制剂的研究也越来越多，目前我国学者已经从柴胡、杜仲等植物中分离获得了具有补体抑制活性的化合物。天然植物的应用具有悠久的历史，往往经长期的实践检验，毒副作用相对较小，已成为开发新型、安全有效的补体抑制剂的重要来源。然而，需要指出的是，这些天然补体抑制剂属于植物次生代谢产物的范畴，在植物中含量往往较低，严重限制了其深度开发和应用。
[0003]鼠曲草(Gnaphalium affine D.Don)系菊科鼠曲草属植物鼠曲草的干燥地上部分，又名佛耳草、追骨风、清明菜、黄花曲草。主要分布在我国长江以南省区,资源丰富。味甘、微酸，性平。具有化痰止咳，祛风除湿，解毒之功效。用于感冒咳嗽，支气管炎，哮喘，高血压，蚕豆病，风湿腰腿痛。
[0004]通过对鼠曲草进行系统的化学成分研究，发现以木犀草素
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葡萄糖苷(luteolin 4
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caffeoyl)
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glucopyranoside)为代表的酰化黄酮苷类化合物具有显著的补体抑制活性。其中木犀草素4
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咖啡酰基)
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葡萄糖苷的补体抑制活性IC
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达到0.045mg/mL，其活性与阳性药肝素钠(IC50＝0.048mg/mL)相当。
[0005]鼠曲草中补体抑制活性成分酰化黄酮苷结构式如下所示，包括木犀草素
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葡萄糖苷、槲皮素
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葡萄糖苷、芹菜素
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葡萄糖苷和芹菜素
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葡萄糖苷。
[0006][0007]对不同产地鼠曲草中补体抑制活性成分进行含量测定，发现该类物质含量极低，每25kg药材干燥全草通过提取仅获得315.6mg。
[0008]植物次生代谢工程和合成生物学为目标活性化合物的富集和生产打开了崭新的局面，其基本原理是在阐明目标活性化合物生物合成途径的基础上，通过调控影响植物体内目标化合物生物合成中关键酶的表达或在植物体外自主构建生物合成途径以实现其高积累和稳定生产。生物合成途径的阐明是通过代谢工程或合成生物学方法进行目标活性成分高效生物合成和可持续生产的关键。
[0009]如果能够从生物体中获得催化生成补体抑制活性成分的关键酶并表达，则可通过基因工程技术提高补体抑制活性成分酰化黄酮苷的产量。

技术实现思路

[0010]本专利技术旨在提供一种鼠曲草咖啡酰基转移酶及其编码基因。
[0011]本专利技术还提供了上述酶和基因的应用。
[0012]本专利技术技术方案如下：
[0013]鼠曲草咖啡酰转移酶(PaBAHD)，含有SEQ ID No.1氨基酸序列。优选的，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。
[0014]鼠曲草咖啡酰转移酶基因，能够编码上述鼠曲草咖啡酰转移酶。
[0015]优选的，所述的鼠曲草咖啡酰转移酶基因，含有SEQ ID No.2所示的核苷酸序列或者其同源序列。更优选的，其核苷酸序列如SEQ ID No.2所示或者为编码相同蛋白质的同源核苷酸。
[0016]一种重组载体，含有编码上述鼠曲草咖啡酰转移酶的核苷酸序列。
[0017]优选的，所述重组载体含有上述鼠曲草咖啡酰转移酶基因。
[0018]一种宿主细胞，含有上述鼠曲草咖啡酰转移酶基因或者含有上述重组载体。
[0019]优选的，所述的宿主细胞为大肠杆菌。
[0020]上述鼠曲草咖啡酰转移酶、鼠曲草咖啡酰转移酶基因、重组载体或者宿主细胞可催化咖啡酰辅酶A及葡萄糖苷衍生物生成相应的咖啡酰基黄酮苷，可用于制备咖啡酰基黄酮苷。
[0021]优选的，所述的咖啡酰基葡萄糖苷为木犀草素
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葡萄糖苷、槲皮素
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葡萄糖苷。分别由木犀草素
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葡萄糖苷、槲皮素
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葡萄糖苷和芹菜素
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.鼠曲草咖啡酰转移酶，其特征在于，含有SEQ ID No.1氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的鼠曲草咖啡酰转移酶，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID所示。3.鼠曲草咖啡酰转移酶基因，其特征在于，编码权利要求1或2所述鼠曲草咖啡酰转移酶。4.根据权利要求3所述的鼠曲草咖啡酰转移酶基因，其特征在于，含有SEQ ID No.2所示的核苷酸序列。5.根据权利要求3或4所述的鼠曲草咖啡酰转移酶基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID No.2所示或者为编码相同蛋白质的同源核苷酸。6.一种重组载体，其特征在于，含有编码权利要求1或2所述鼠曲草咖啡酰转移酶的核苷酸序列。7.根据权利要求6所述的重组载体，其特征在于，含...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖莹，李永康，孙连娜，陈万生，黄豆豆，
申请(专利权)人：上海中医药大学，
类型：发明
国别省市：