一种枇杷叶抗氧化谱效创建方法技术

本发明专利技术涉及一种枇杷叶抗氧化谱效创建方法，包括以下步骤：步骤S1、样品选取，选取安徽省十三个不同地区的枇杷叶样本，并制作成粉末；步骤S2、样品抗氧化能力测定，首先，制备枇杷叶样品的上清液，冷藏待用；然后，配置DPPH工作液和抗坏血酸溶液；最后，设置测定条件，配置完成不同样品后，将其放入阴暗遮光处避光反应30min，测定515nm处的吸光度，并使用公式计算各个样品的DPPH

【技术实现步骤摘要】
一种枇杷叶抗氧化谱效创建方法


[0001]本专利技术属于枇杷叶分析
，特别涉及一种枇杷叶抗氧化谱效创建方法。

技术介绍

[0002]枇杷为蔷薇科枇杷属常绿小乔木，果实具有丰富的营养，常作为水果食用，具有止渴、润燥、清肺、止咳等功效，《本草纲目》中记载：“枇杷叶气薄味厚，阳中之阴，治肺胃之病”，枇杷叶也能用于治疗胃病。其叶具有药用价值，经净制处理、干燥切制之后为传统中药枇杷叶，使用蜂蜜炙用以增加止咳平喘的作用，枇杷叶具有着清肺止咳，降逆止呕等功效。现代研究发现枇杷叶同时具有降血糖、抗炎、抗氧化应激等作用，临床上多用于治疗咳嗽、慢性支气管炎、糖尿病、癌症、高脂血症等症，首载于《名医别录》。
[0003]安徽省有着广袤的枇杷种植范围，特别是歙县有着国家地理标志认证的三潭枇杷每当枇杷果成熟果农采摘果实之时为了获得品质较好的枇杷果，常常会损失大量的枇杷花序和叶造成资源浪费。研究发现枇杷叶的总黄酮、多糖以及酚类物质具有良好的抗氧化作用，如果将枇杷叶合理利用起来既能使枇杷叶得到充分利用同时也能使得果农增加一份收入，因此需要对枇杷叶开展进一步研究，以能够测定枇杷叶的抗氧化能力，建立枇杷叶抗氧化的谱效关系，由此来评估枇杷叶的抗氧化质量，为合理评价安徽省枇杷叶质量提供了科学依据，也为枇杷叶资源能够得到更广泛的应用提供参考。

技术实现思路

[0004]本专利技术针对现有技术存在的不足，提供了一种可测定枇杷叶的抗氧化能力，建立枇杷叶抗氧化的谱效关系的枇杷叶抗氧化谱效创建方法，具体技术方案如下：
[0005]本专利技术提供一种枇杷叶抗氧化谱效创建方法，该方法包括以下步骤：
[0006]步骤S1、样品选取
[0007]选取安徽省十三个不同地区的枇杷叶样本，并制作成粉末；
[0008]步骤S2、样品抗氧化能力测定
[0009]首先，制备枇杷叶样品的上清液，冷藏待用；然后，配置DPPH工作液和10mg/ml的抗坏血酸溶液；最后，设置测定条件，配置完成不同样品后，将其放入阴暗遮光处避光反应30min，测定515nm处的吸光度，并使用公式计算各个样品的DPPH
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自由基清除率，以此来测定样品抗氧化能力；
[0010]步骤S3、样品抗氧化谱效关系分析
[0011]使用SPSS21.0软件进行主成分分析(PCA)、双变量回归分析；SIMCA 14.1软件进行偏最小二乘回归分析法(PLS－DA)综合分析枇杷叶抗氧化谱效关系。
[0012]作为本专利技术一种优选技术方案，所述步骤S1中，枇杷叶样品采用代表植株、等量采摘、均匀混合的原则进行选取，且选取的枇杷叶为蔷薇科植物枇杷的叶。
[0013]作为本专利技术一种优选技术方案，所述步骤S1中，取枇杷叶样品，使用鼓风干燥箱65℃烘干，粉碎，过65目筛得到样品粉末。
[0014]作为本专利技术一种优选技术方案，所述步骤S2中，上清液的制备步骤为：
[0015]精密称量0.05g的枇杷叶样品粉末，加入提取液1mL放于EP管中，然后将EP管放入水浴锅，40℃水浴浸提30min，随后放入离心机中10000rpm离心10min，取上清液，放入冰箱冷藏待用。
[0016]作为本专利技术一种优选技术方案，所述步骤S2中，DPPH工作液和抗坏血酸溶液的制备步骤为：
[0017]取适量DPPH试剂加无水乙醇6.08mL溶解制成DPPH初试剂，以DPPH初试剂：无水乙醇(v：v)4：21配制成DPPH工作液；取适量抗坏血酸加入提取液配制成10mg/mL的抗坏血酸溶液。
[0018]作为本专利技术一种优选技术方案，所述步骤S2中，设置的测定条件为：
[0019]以上清液25μL+DPPH
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工作液975μL溶液放入EP管为测定样(A测定)；上清液25μL+无水乙醇975μL放入EP管为对照样(A对照)；提取液25μL+DPPH
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工作液975μL放入EP管为空白样A(空白)；抗坏血酸溶液25μL+DPPH
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工作液975μL放入EP管为阳性对照样A(阳性对照)。
[0020]作为本专利技术一种优选技术方案，所述DPPH
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自由基清除率的计算公式为：
[0021]阳性对照的清除率计算公式：
[0022]DPPH
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自由基清除率(Dvc％)＝[(A空白－A阳性对照)/A空白]×
100％
[0023]样品的清除率计算公式：
[0024]DPPH
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自由基清除率(D％)＝{[A空白－(A测定－A对照)]÷
A空白}
×
100％
[0025]作为本专利技术一种优选技术方案，所述步骤S3中，主成分分析(PCA)的步骤为：
[0026]采用HPLC法根据相对保留时间(tR)及特征吸收波长，确定11个共有峰；将11个共有峰的峰面积作为变量导入数据处理软件，运用SPSS21.0的主成分分析法分析处理，寻找对枇杷叶影响较大和有较高贡献率的指标，分析方差，贡献率，累计贡献率。
[0027]作为本专利技术一种优选技术方案，所述步骤S3中，双变量回归分析的步骤为：
[0028]采用SPSS21.0软件对各共有峰峰面积与DPPH
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自由基清除率进行回归分析，采用Pearson法进行分析。
[0029]作为本专利技术一种优选技术方案，所述步骤S3中，偏最小二乘回归分析法(PLS－DA)的步骤为：
[0030]采用SIMCA 14.1数据处理软件进行PLS－DA分析，经软件处理分析得到各变量标准化的回归系数和变量重要性投影(VIP)值。
[0031]本专利技术的有益效果是：
[0032]本专利技术研究安徽省内十三个不同地区枇杷叶抗氧化活性大小，使用软件综合分析评价不同地区枇杷叶抗氧化能力，筛选抗氧化成分创建其谱效关系；本专利技术采用DPPH
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自由基清除法测定样品抗氧化能力，使用SPSS21.0和SIMCA 14.1软件进行主成分分析、双变量回归分析和偏最小二乘回归分析；本专利技术研究表明DPPH
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自由基清除率最强的是安徽临泉的样品，筛选出与抗氧化能力相关的六个成分；可知不同产地枇杷叶均具有较强抗氧化作用，主要有六个化学成分与抗氧化活性有关，可能为枇杷叶抗氧化物质基础；可通过检测枇杷叶中起抗氧化作用的六个主成分的含量大小，来评估枇杷叶的抗氧化质量，为合理评价安徽省枇杷叶质量提供了科学依据，也为枇杷叶资源能够得到更广泛的应用提供参考。
附图说明
[0033]图1示出了本专利技术中不同地区DPPH
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自由基清除能力对比图；
[0034]图2示出了本专利技术中十三批枇杷叶指纹图谱叠加图；
[0035]图3示出了本专利技术中枇杷叶指纹图谱共有峰；
[0036]图4示出了本专利技术中共有峰抗氧化VIP值；
[0037]图5示出了本专利技术中抗氧化能力回归系数。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种枇杷叶抗氧化谱效创建方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：步骤S1、样品选取选取安徽省十三个不同地区的枇杷叶样本，并制作成粉末；步骤S2、样品抗氧化能力测定首先，制备枇杷叶样品的上清液，冷藏待用；然后，配置DPPH工作液和10mg/ml的抗坏血酸溶液；最后，设置测定条件，配置完成不同样品后，将其放入阴暗遮光处避光反应30min，测定515nm处的吸光度，并使用公式计算各个样品的DPPH
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自由基清除率，以此来测定样品抗氧化能力；步骤S3、样品抗氧化谱效关系分析使用SPSS 21.0软件进行主成分分析(PCA)、双变量回归分析；SIMCA 14.1软件进行偏最小二乘回归分析法(PLS－DA)综合分析枇杷叶抗氧化谱效关系。2.根据权利要求1所述的一种枇杷叶抗氧化谱效创建方法，其特征在于：所述步骤S1中，枇杷叶样品采用代表植株、等量采摘、均匀混合的原则进行选取，且选取的枇杷叶为蔷薇科植物枇杷的叶。3.根据权利要求2所述的一种枇杷叶抗氧化谱效创建方法，其特征在于：所述步骤S1中，取枇杷叶样品，使用鼓风干燥箱65℃烘干，粉碎，过65目筛得到样品粉末。4.根据权利要求1所述的一种枇杷叶抗氧化谱效创建方法，其特征在于：所述步骤S2中，上清液的制备步骤为：精密称量0.05g的枇杷叶样品粉末，加入提取液1mL放于EP管中，然后将EP管放入水浴锅，40℃水浴浸提30min，随后放入离心机中10000rpm离心10min，取上清液，放入冰箱冷藏待用。5.根据权利要求1所述的一种枇杷叶抗氧化谱效创建方法，其特征在于：所述步骤S2中，DPPH工作液和抗坏血酸溶液的制备步骤为：取适量DPPH试剂加无水乙醇6.08mL溶解制成DPPH初试剂，以DPPH初试剂：无水乙醇(v：v)4：21配制成DPPH工作液；取适量抗坏血酸加入提取液配制成10mg/mL的抗坏血酸溶液。6.根据权利要求1所述的一种枇杷叶抗氧化谱效创建方法，其特征在于：所述步骤S2中，设置的测定条件为：以上清液25μL+DPPH<...

【专利技术属性】
技术研发人员：张元波，王星星，李梦，
申请(专利权)人：亳州职业技术学院，
类型：发明
国别省市：