一种过表达外源CD4基因的CTL细胞及其在制备增强抗肿瘤免疫应答药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种过表达外源CD4基因的CTL细胞及其在制备增强抗肿瘤免疫应答药物中的应用，属于过继性转移工程性CD8

【技术实现步骤摘要】
一种过表达外源CD4基因的CTL细胞及其在制备增强抗肿瘤免疫应答药物中的应用


[0001]本专利技术属于过继性转移增强型CTL细胞抗肿瘤
，具体涉及一种过表达外源CD4基因的CTL细胞及其在制备增强抗肿瘤免疫应答药物中的应用。

技术介绍

[0002]CD8
+
T细胞介导的适应性免疫应答是机体抗感染和抗肿瘤的重要保护机制。其中CD8
+
细胞毒性T细胞(CTL)是关键的靶向肿瘤细胞的免疫监视细胞之一。在癌症进展过程中，由于肿瘤微环境内的免疫相关耐受和免疫抑制，CTL会出现失能并逐渐走向衰竭，最终导致肿瘤的免疫抵抗。因此，通过基因改造，增强CTL的杀伤能力将有助于产生更有效的抗肿瘤免疫反应，为临床免疫治疗提供新的策略和思路。
[0003]CD4是一种跨膜糖蛋白，主要表达在辅助(Th)细胞表面。表达CD4基因的T细胞在识别MHCⅡ类分子提呈的抗原肽时，CD4蛋白可以和MHCⅡ类分子结合，增强T细胞与抗原提呈细胞的相互作用，并辅助T细胞受体(TCR)识别结合抗原。在肿瘤免疫中，CD4
+
T细胞启动后可以通过多种机制激活CD8
+
T细胞，使其分化为细胞毒性T淋巴细胞(CTL)，同时维持并加强CTL的抗肿瘤反应。已有研究证明通过强制过表达CD8αβ共受体可使CD4
+
T细胞赋予细胞毒性细胞功能。然而，CD4共受体对CD8
+
T细胞尤其是CTL是否能够增强发挥杀伤肿瘤的作用尚不清楚。

技术实现思路

>[0004]为了克服上述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种过表达外源CD4基因的CTL细胞及其在制备增强抗肿瘤免疫应答药物中的应用，用以增强CTL细胞杀伤肿瘤的能力。
[0005]为了达到上述目的，本专利技术采用以下技术方案予以实现：
[0006]本专利技术公开了过表达外源CD4基因在制备增强抗肿瘤免疫应答药物中的应用。
[0007]优选地，所述过表达外源CD4基因为过继外源性过表达CD4基因的TCR特异性的CD8
+
T细胞。
[0008]进一步优选地，所述CD8
+
T细胞的TCR特异性针对皮肤黑色素瘤细胞ova抗原。
[0009]优选地，所述肿瘤为皮肤黑色素瘤。
[0010]优选地，所述外源过表达CD4基因的小鼠给药量为1
×
105细胞/只。
[0011]本专利技术还公开了一种过表达外源CD4基因的CTL细胞，所述CTL细胞是由含有CD4基因的表达载体感染皮肤黑色素肿瘤抗原OVA的特异性OT1小鼠的外周淋巴细胞得到。
[0012]优选地，所述CD4基因的序列如SEQ ID NO.1所示。
[0013]优选地，所述CTL细胞通过增加细胞因子GZMB、TNFa及IFNg的分泌来增强抗肿瘤免疫应答。
[0014]优选地，所述表达载体为逆转录病毒载体。
[0015]进一步优选地，所述逆转录病毒载体为MSCV逆转录病毒载体。
[0016]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0017]本专利技术提供的一种过表达外源CD4基因的CTL细胞在制备增强抗肿瘤免疫应答药物中的应用，通过将过表达外源CD4基因的CTL细胞过继性转移给予黑色素瘤模型小鼠，发现过继外源性过表达CD4基因的TCR特异性的工程性CD8
+
T细胞相比未过表达CD4基因的CD8
+
T细胞组能显著抑制肿瘤的生长，肿瘤体积明显变小，从而提高CD8
+
T细胞抗肿瘤疗效。
[0018]本专利技术提供的过表达外源CD4基因的CTL细胞，该CTL细胞能够通过增加细胞因子GZMB、TNFa及IFNg的分泌，从而应用于增强抗肿瘤免疫应答中，为临床肿瘤免疫治疗提供一种新的途径。
附图说明
[0019]图1为表达CD4基因的逆转录病毒载体的图；
[0020]图2为OVA抗原特异性的OT1细胞中CD4基因的表达量的图；其中，A为过继性转移前OT1细胞中CD4 MFI，B为黑色素瘤内OT1细胞中CD4 MFI；与Mock组相比，
****
P≤0.0001；
[0021]图3为黑色素瘤体大小的图；
[0022]图4为过继性转移外源过表达CD4基因的OT1细胞后，黑色素瘤的生长曲线图；
[0023]图5为肿瘤浸润的淋巴细胞(TIL)分泌的细胞因子GZMB、TNFa及IFNg的流式图；其中，从左到右，从上到下分别为对照组细胞因子GZMB、肿瘤治疗组细胞因子GZMB、对照组细胞因子TNFa、肿瘤治疗组细胞因子TNFa、对照组细胞因子IFNg和肿瘤治疗组细胞因子IFNg；
[0024]图6为肿瘤浸润的淋巴细胞(TIL)分泌的细胞因子GZMB、IFNg及TNFa的统计直方图；其中，A为GZMB，B为IFNg，C为TNFa。
具体实施方式
[0025]为使本领域技术人员可了解本专利技术的特点及效果，以下仅就说明书及权利要求书中提及的术语及用语进行一般性的说明及定义。除非另有指明，否则文中使用的所有技术及科学上的字词，均为本领域技术人员对于本专利技术所了解的通常意义，当有冲突情形时，应以本说明书的定义为准。
[0026]本文描述和公开的理论或机制，无论是对或错，均不应以任何方式限制本专利技术的范围，即本
技术实现思路
可以在不为任何特定的理论或机制所限制的情况下实施。
[0027]本文中，所有以数值范围或百分比范围形式界定的特征如数值、数量、含量与浓度仅是为了简洁及方便。据此，数值范围或百分比范围的描述应视为已涵盖且具体公开所有可能的次级范围及范围内的个别数值(包括整数与分数)。
[0028]本文中，若无特别说明，“包含”、“包括”、“含有”、“具有”或类似用语涵盖了“由
……
组成”和“主要由
……
组成”的意思，例如“A包含a”涵盖了“A包含a和其他”和“A仅包含a”的意思。
[0029]本文中，为使描述简洁，未对各个实施方案或实施例中的各个技术特征的所有可能的组合都进行描述。因此，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，各个实施方案或实施例中的各个技术特征可以进行任意的组合，所有可能的组合都应当认为是本说明书记载的范围。
[0030]本专利技术提供了一种过表达外源CD4基因的CTL细胞及其在制备增强抗肿瘤免疫应答药物中的应用。
[0031]下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。此外应理解，在阅读了本专利技术讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本专利技术作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
[0032]下列实施例中使用本领域常规的仪器设备，使用的各种原料、试剂(例如：有机溶剂、无极溶剂、激酶、底物、抗体、缓冲液、反应液等)，除非另作说明，都使用常规市售产品，其规格为本领域常规规格，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.过表达外源CD4基因在制备增强抗肿瘤免疫应答药物中的应用。2.根据权利要求1所述的过表达外源CD4基因在制备增强抗肿瘤免疫应答药物中的应用，其特征在于，所述过表达外源CD4基因为过继外源性过表达CD4基因的TCR特异性的CD8
+
T细胞。3.根据权利要求2所述的过表达外源CD4基因在制备增强抗肿瘤免疫应答药物中的应用，其特征在于，所述CD8
+
T细胞的TCR特异性针对皮肤黑色素瘤细胞ova抗原。4.根据权利要求1所述的过表达外源CD4基因在制备增强抗肿瘤免疫应答药物中的应用，其特征在于，所述肿瘤为皮肤黑色素瘤。5.根据权利要求1所述的过表达外源CD4基因在制备增强抗肿瘤免疫应答药物中的应用，其特征在于，所述外源过表达CD4基因的小鼠给药量为1
...

【专利技术属性】
技术研发人员：张保军，刘海艳，焦安君，丁人一，贾筱萱，封钊，杨小丰，孙丽娜，兰琳博，杨飚，
申请(专利权)人：西安交通大学，
类型：发明
国别省市：