本发明专利技术公开了一种人胶原蛋白核酸制剂及其应用，属于核酸类制剂技术领域。本发明专利技术公开的一种人胶原蛋白核酸制剂，为胶原蛋白saRNA；该核酸制剂可以有效且特异性地增加具有低副作用的内源性胶原蛋白(如COL1A1、COL1A2、COL3A1基因)的表达，并且可以恢复或增加皮肤弹性，改善皮肤下垂，增加皮肤中的水分含量，减少或消除皮肤皱纹，并防止细纹和干纹的出现；可以用于制备改善皮肤状况和/或护理皮肤的制剂或产品。剂或产品。剂或产品。
【技术实现步骤摘要】
一种人胶原蛋白核酸制剂及其应用
[0001]本专利技术涉及核酸类制剂
，更具体的说是涉及一种人胶原蛋白核酸制剂及其应用。
技术介绍
[0002]皮肤是由表皮、真皮层和皮下组织组成的重要器官，覆盖身体的整个表面，为身体提供屏障功能。表皮是皮肤的最外层，包括四层的细胞连续体：角质层、颗粒层、棘层和基底层。表皮中的每个细胞层代表了基底表皮角质形成细胞经历增殖、分化和凋亡的连续循环的过程中的各个阶段，从基底层向上移动，最终产生角质细胞。这些角质细胞形成角质层。真皮位于表皮下方，用于支撑皮肤结构，由乳头状真皮和网状真皮组成，并充满一种称为细胞外基质的生物结构。皮肤的细胞外基质是由胶原蛋白、弹性纤维、糖蛋白、糖胺聚糖、蛋白聚糖等组成的复杂大分子网络，提供结构支持，参与细胞代谢的调节。细胞外基质蛋白主要由真皮中的成纤维细胞合成和分泌，70％以上的蛋白质是为皮肤提供力量的胶原蛋白。形成真皮细胞外基质的其他纤维包括弹性纤维，其主要由聚合在微纤维上的原弹性蛋白组成。细胞外基质和参与其降解的酶的产生在很大程度上受到成纤维细胞的控制，而产生和降解之间的平衡是保持皮肤稳定状态的基础。
[0003]基底细胞角质形成细胞位于表皮的下部。这些有丝分裂活性的细胞经历增殖周期以产生子细胞，子细胞向上物理移位进入棘层和颗粒层，并经历分化为角细胞的过程。在穿过棘层和颗粒层时，细胞发生形态学变化，使其结构更平坦，因为它们失去了细胞活力，经历了交替的角蛋白表达谱，并转化为细胞残余。平均而言，较年轻的表皮在大约一个月内翻转，脱落较老的细胞并用较新的细胞取而代之，但在较老的皮肤中，这一过程可能会延长到40多天。
[0004]角质层的角质细胞通过蛋白质和脂质保持相互连接，在生物体与其外部环境之间形成保护屏障。这种严格调节的表皮渗透屏障起着物理和选择性屏障的作用，可以抵御化学和生物损伤。这种屏障的重要功能包括衰减自由基的渗透和防止包括紫外线辐射在内的有害辐射渗透到更深的层中。角质层还起到渗透屏障的作用，并起到防止身体水分流失到外部环境的作用。这种屏障的功能障碍会导致慢性皮肤病，在极端情况下甚至会威胁到生物体的生存能力。
[0005]胶原蛋白是皮肤和骨骼等各种结缔组织中的主要结构蛋白。它约占人身体蛋白质的25％。尽管其三级结构如此复杂，并形成卷曲的螺旋结构，但胶原蛋白的氨基酸序列只是由含有甘氨酸、脯氨酸和羟基脯氨酸的三肽的间歇性重复形成的。胶原蛋白作为细胞外基质的一种成分，在保持皮肤弹性和水分、预防细菌或病毒感染、皮肤疾病以及过敏原和其他异物入侵方面发挥着重要作用。在皮肤衰老过程中，胶原蛋白和弹性蛋白纤维的合成速率降低，降解速率迅速增加。这两个衰老过程导致真皮中纤维数量的减少，从而导致皮肤特性的变化，导致皮肤衰老的迹象，如斑点、皱纹、皮肤下垂和粗糙。
[0006]人体皮肤表达的胶原蛋白包括胶原蛋白I、III、IV、V、VI、VII、XIV、XVII和XVIII，
其中胶原蛋白I和胶原蛋白III占正常成人皮肤干重的80％。这两种胶原蛋白都是纤维状结构。I型胶原作为真皮的主要成分，占总胶原的80％，具有很强的促进细胞粘附和角质迁移的作用。III型胶原也是真皮细胞外基质的主要成分，占真皮胶原的10％。COL1A1、COL1A2和COL3A1基因分别编码胶原I型a1链、胶原I型a2链和胶原III型a1链。其中胶原蛋白III型在人衰老过程中下降最多，因此是抗皮肤衰老，恢复弹性的主要目的蛋白。
[0007]关于增加皮肤胶原蛋白的物质(如植物提取物)、多肽和其他材料有很多报道，但大多数材料效果不佳，制造成本高。基于此，一种能够促进细胞产生和分泌胶原蛋白的方法可能成为抗衰老和美容的有效手段。
[0008]随着生活水平的提高，人们对可外用于皮肤以改善皮肤健康和外观的产品的需求越来越大。消费者希望使用这些产品来减少或延缓自然衰老或老化的皮肤外观，如皮肤细纹、皱纹、失去弹性、下垂、缺乏弹性、缺乏饱满感等病理状态。目前，市场上的护肤品都知道可以改善皮肤外观，但效果有限。到目前为止，市场上还没有安全有效的方法可以通过特异性增加一个或多个基因的表达来增加其内源性胶原蛋白的表达，从而达到改善皮肤状况和抵抗皮肤衰老的目的。
[0009]因此，提供一种人胶原蛋白核酸制剂及其应用是本领域技术人员亟需解决的问题。
技术实现思路
[0010]有鉴于此，本专利技术提供了一种人胶原蛋白核酸制剂及其应用，该核酸制剂是可应用于皮肤的胶原蛋白核酸分子，通过特异性增加与皮肤生理病理相关的胶原蛋白表达，达到安全有效改善皮肤状况、减缓皮肤衰老的效果。
[0011]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0012]一种人胶原蛋白核酸制剂，为胶原蛋白saRNA；
[0013]所述胶原蛋白saRNA具有5
’
Cap、5
’
UTR、nsP1
‑
4、sgPr、GOI、3
’
UTR、Poly(A)tail元件；
[0014]所述5
’
Cap为Cap 1结构；
[0015]所述GOI为COL1A1、COL1A2或COL3A1；
[0016]所述5
’
UTR的序列如SEQ ID NO.1中第7
‑
90bp所示；
[0017]所述nsP1
‑
4的序列如SEQ ID NO.1中第91
‑
7632bp所示；
[0018]所述sgPr的序列如SEQ ID NO.1中第7633
‑
7677bp所示；
[0019]所述3
’
UTR的序列如SEQ ID NO.1中第12079
‑
12158bp所示；
[0020]所述Poly(A)tail的序列如SEQ ID NO.1中第12159
‑
12258bp所示；
[0021]所述COL1A1的序列如SEQ ID NO.2所示；
[0022]所述COL1A2的序列如SEQ ID NO.3所示；
[0023]所述COL3A1的序列如SEQ ID NO.1中第7678
‑
12078bp所示。
[0024]进一步，所述的一种人胶原蛋白核酸制剂的制备方法，以线性化的含有权利要求1中序列的DNA为模板，通过RNA聚合酶体外转录产生RNA，进一步经过加帽、纯化步骤获得saRNA产物；
[0025]具体步骤如下：
[0026](1)SEQ ID NO.1经全序列合成，利用Xba I/Nde I酶切克隆到质粒载体pET
‑
9a中，得到重组质粒；重组质粒提纯后，利用Nde I酶线性化，获得线性化后的重组质粒DNA；
[0027](2)以线性化后的重组质粒DNA作为模板，通过T7聚合酶介导的体外转录产生RNA；利用DNase I消化去除DNA质粒，得到RNA产物；
[0028本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种人胶原蛋白核酸制剂，其特征在于，为胶原蛋白saRNA；所述胶原蛋白saRNA具有5
’
Cap、5
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UTR、nsP1
‑
4、sgPr、GOI、3
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UTR、Poly(A)tail元件；所述5
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Cap为Cap1结构；所述GOI为COL1A1、COL1A2或COL3A1；所述5
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UTR的序列如SEQ ID NO.1中第7
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90bp所示；所述nsP1
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4的序列如SEQ ID NO.1中第91
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7632bp所示；所述sgPr的序列如SEQ ID NO.1中第7633
‑
7677bp所示；所述3
’
UTR的序列如SEQ ID NO.1中第12079
‑
12158bp所示；所述Poly(A)tail的序列如SEQ ID NO.1中第12159
‑
12258bp所示；所述COL1A1的序列如SEQ ID NO...
【专利技术属性】
技术研发人员：阮承迈，陈守义，黄露露，
申请(专利权)人：阮承迈，
类型：发明
国别省市：
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