【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】结合剂和其使用方法
[0001]关于序列表的声明
[0002]与本申请相关的序列表以文本格式代替纸质副本提供，并通过引用并入本说明书中。包含序列表的文本文件的名称为670151_403WO_Sequence_Listing.txt。该文本文件85KB，创建于2022年1月20日，正在通过EFS Web以电子方式提交。
技术介绍
[0003]免疫系统包括先天性免疫和适应性免疫系统。适应性免疫系统具有很多细胞亚型，包括T细胞亚群和B细胞亚群。T细胞亚群包括多种类型的T细胞，包括幼稚T淋巴细胞和效应T淋巴细胞，如细胞毒性T细胞和辅助性T细胞，以及调节性T细胞。这些T细胞类型的活性是通过效应T细胞的活性和调节性T细胞的调节之间的平衡来实现的。尽管效应T细胞促进炎症，但调节性T细胞通常被认为可以调控炎症。因此，Treg通过维持自身耐受、限制自身免疫以及控制自身反应性CD4+T效应细胞的扩增和激活，在自身免疫发病机制中发挥着重要作用。效应T细胞和调节性T细胞之间平衡的破坏可能导致免疫应答的不适当激活或抑制、自我耐受的丧失、自身免疫性病症和癌症。调节性T细胞维持免疫系统平衡的机制和调节才刚刚开始被理解。
技术实现思路
[0004]本文提供了调节CD8+KIR+T调节性细胞(Treg)的活性的结合剂及其使用方法。结合剂是双特异性的或多特异性的，并且特异性结合CD8+KIR+Treg的表面上表达的抗原。在一些实施方式中，CD8+KIR+Treg是MHC I类限制性的。在一些实施方式中，CD8+KIR+Treg不是MHC Qa
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种结合剂，其包含：特异性结合第一抗原的第一结合结构域，所述第一抗原选自除KIR蛋白以外的在CD8+KIR+T调节性细胞(Treg)上表达的抗原；和特异性结合抑制性KIR蛋白的第二结合结构域，其中所述结合剂结合CD8+KIR+Treg。2.根据权利要求1所述的结合剂，其中所述第一抗原选自：CD3、CD5、CD8、CD27、CD38、CD39、CD40L、CD45RA、CD45RB、CD45RO、CD73、CD103(ITGAE)、CD122、CD166、CD177、CCR7、CXCR3、CXCR5、HLA
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DR、ICOS、LAG
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3/CD223、OX
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40、PD
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1、S1000A8/9、TIM
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3、TLT
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2、2B4和41BB。3.根据前述权利要求中任一项所述的结合结构域，其中所述第一抗原选自以下抗原的组：a.CD3、CD5、CD27、CD38、CD39、CD40L、CD45RA、CD45RB、CD45RO、CD73、CD122、ICOS、OX
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40、2B4、41BB和HLA
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DR；b.LAG
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3/CD223、TIM
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3、PD
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1、S1000A8/9和TLT2；c.CD3、CD5、CD8、CD27、CD38、CD39、CD40L、CD45RA、CD45RB、CD45RO、CD73、CD103(ITGAE)、CD122、CD166、CD177、CCR7、CXCR3、CXCR5、HLA
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DR、ICOS、LAG
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3/CD223、OX
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40、PD
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1、S1000A8/9、TIM
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3、TLT
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2、2B4和41BB；d.CD103(ITGAE)、CD166、CD177、CXCR3和S1000A8/9；e.CCR7、CXCR3和CXCR5；f.PD
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1、ICOS和CXCR3；g.CD3、CD5和CD8；和h.CD3和CD8。4.根据前述权利要求中任一项所述的结合剂，其中所述结合剂是双特异性抗体、双体抗体、抗体Fc融合蛋白、scFv1
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ScFv2、ScFv12‑
Fc
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scFv22、IgG
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scFv、DVD
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Ig、三功能抗体/四价体瘤、二合一IgG、scFv2‑
Fc、TandAb、scFv
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HSA
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scFv、scFv
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VHH、Fab
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scFv
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Fc、Fab
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VHH
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Fc、dAb
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IgG、IgG
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VHH、串联scFv
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Fc、(scFv1)2‑
Fc
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(VHH)2、BiTe、DART、交叉单抗、scFv
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Fc、单臂串联scFv
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Fc、DART
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Fc、anticalin、亲和体、avimer、DARPin或adnectin。5.根据前述权利要求中任一项所述的结合剂，其中所述第一结合结构域或所述第二结合结构域的任一个选自抗体或其抗原结合部分，且另一个结合结构域是抗体片段。6.根据权利要求5所述的结合剂，其中所述抗原结合部分是Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、scFv或单域抗体。7.根据前述权利要求中任一项所述的结合剂，其中所述第一结合结构域包含重链可变区和轻链可变区。8.根据前述权利要求中任一项所述的结合剂，其中所述第二结合结构域包含重链可变区和轻链可变区。9.根据前述权利要求中任一项所述的结合剂，其中所述第一结合结构域特异性结合CD3或CD3的亚基，任选地CD3ε。10.根据权利要求9所述的结合剂，其中所述第一结合结构域包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，所述VH和VL氨基酸序列选自以下组成的组所示的氨基酸序列对：a.分别为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2；
b.分别为SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10；c.分别为SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18；d.分别为SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26；e.分别为SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:34；f.分别为SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:34；g.分别为SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:34；h.分别为SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:50；i.分别为SEQ ID NO:57和SEQ ID NO:58；j.分别为SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:66；和k.分别为SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:166。11.根据权利要求9所述的结合剂，其中所述第一结合结构域包含重链可变区和轻链可变区，所述重链和轻链可变区分别包含hCDR1、hCDR1和hCDR3，以及lCDR1、lCDR2和lCDR3，所述CDR具有选自如下组成的组所示的氨基酸序列组的氨基酸序列：a.分别为SEQ ID NO:3至SEQ ID NO:8；b.分别为SEQ ID NO:11至SEQ ID NO:16；c.分别为SEQ ID NO:19至SEQ ID NO:24；d.分别为SEQ ID NO:27至SEQ ID NO:32；e.分别为SEQ ID NO:35至SEQ ID NO:40；f.分别为SEQ ID NO:42至SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:38至SEQ ID NO:40；g.分别为SEQ ID NO:46至SEQ ID NO:48和SEQ ID NO:38至SEQ ID NO:40；h.分别为SEQ ID NO:51至SEQ ID NO:56；i.分别为SEQ ID NO:59至SEQ ID NO:64；j.分别为SEQ ID NO:67至SEQ ID NO:72；和k.分别为SEQ ID NO:67
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69和167
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169。12.根据权利要求1至8中任一项所述的结合剂，其中所述第一结合结构域特异性结合CD8或CD8的亚基，任选地CD8α。13.根据权利要求12所述的结合剂，其中所述第一结合结构域包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，所述VH和VL区具有选自以下组成的组所示的氨基酸序列对的氨基酸序列：a.分别为SEQ ID NO:73和SEQ ID NO:74；和b.分别为SEQ ID NO:81和SEQ ID NO:82；或者所述第一结合结构域包含VHH链，所述VHH链具有选自以下组成的组所示的氨基酸序列的氨基酸序列：c.SEQ ID NO:89；d.SEQ ID NO:93；和e.SEQ ID NO:97。14.根据权利要求12所述的结合剂，其中所述第一结合结构域包含重链可变区和轻链可变区，所述重链和轻链可变区分别包含hCDR1、hCDR1和hCDR3，以及lCDR1、lCDR2和lCDR3，所述CDR具有选自以下组成的组所示的氨基酸序列组的氨基酸序列：
a.分别为SEQ ID NO:75至SEQ ID NO:80；或b.分别为SEQ ID NO:83至SEQ ID NO:88；或者所述第一结合结构域包含VHH链，其具有hCDR1、hCDR2和hCDR3，所述VHH CDR具有选自以下组成的组所示的氨基酸序列组的氨基酸序列：c.分别为SEQ ID NO:90至SEQ ID NO:92；d.分别为SEQ ID NO:94至SEQ ID NO:96；和e.分别为SEQ ID NO:98至SEQ ID NO:100。15.根据权利要求1至8中任一项所述的结合剂，其中所述第一结合结构域特异性结合ICOS。16.根据权利要求15所述的结合剂，其中所述第一结合结构域包含具有SEQ ID NO:170的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有SEQ ID NO:171的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。17.根据权利要求15所述的结合剂，其中所述第一结合结构域包含重链可变区和轻链可变区，所述重链和轻链可变区包含分别根据SEQ ID NO:172、173和174的hCDR1、hCDR1和hCDR3氨基酸序列，以及分别根据SEQ ID NO:175、176和177的lCDR1、lCDR2和lCDR3氨基酸序列。18.根据权利要求1至8中任一项所述的结合剂，其中所述第一结合结构域特异性结合PD
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1。19.根据权利要求18所述的结合剂，其中所述第一结合结构域包含具有SEQ ID NO:178的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有SEQ ID NO:179的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。20.根据权利要求18所述的结合剂，其中所述第一结合结构域包含重链可变区和轻链可变区，所述重链和轻链可变区包含分别根据SEQ ID NO:180、181和182的hCDR1、hCDR1和hCDR3氨基酸序列，以及分别根据SEQ ID NO:183、184和185的lCDR1、lCDR2和lCDR3氨基酸序列。21.根据权利要求1至8中任一项所述的结合剂，其中所述第一结合结构域特异性结合CXCR3。22.根据权利要求21所述的结合剂，其中所述第一结合结构域包含具有SEQ ID NO:186的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有SEQ ID NO:187的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。23.根据权利要求21所述的结合剂，其中所述第一结合结构域包含重链可变区和轻链可变区，所述重链和轻链可变区包含分别根据SEQ ID NO:188、189和190的hCDR1、hCDR1和hCDR3氨基酸序列，以及分别根据SEQ ID NO:191、192和193的lCDR1、lCDR2和lCDR3氨基酸序列。24.根据权利要求1至8中任一项所述的结合剂，其中所述第一结合结构域特异性结合CD5。25.根据权利要求24所述的结合剂，其中所述第一结合结构域包含具有SEQ ID NO:194的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有SEQ ID NO:195的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。26.根据权利要求24所述的结合剂，其中所述第一结合结构域包含重链可变区和轻链可变区，所述重链和轻链可变区包含分别根据SEQ ID NO:196、197和198的hCDR1、hCDR1和hCDR3氨基酸序列，以及分别根据SEQ ID NO:199、200和201的lCDR1、lCDR2和lCDR3氨基酸序列。
27.根据前述权利要求中任一项所述的结合剂，其中所述抑制性KIR蛋白选自KIR3DL1、KIR3DL2、KIR2DL1、KIR2DL2和KIR2DL3或其组合。28.根据权利要求27所述的结合剂，其中所述第二结合剂特异性结合KIR2DL1/2/3或KIR2DL1/2。29.根据前述权利要求中任一项所述的结合剂，其中所述第二结合结构域包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，所述VH和VL具有选自以下组成的组所示的氨基酸序列对的氨基酸序列：a.分别为SEQ ID NO:101和SEQ ID NO:102；b.分别为SEQ ID NO:109和SEQ ID NO:110；c.分别为SEQ ID NO:117和SEQ ID NO:118；d.分别为SEQ ID NO:125和SEQ ID NO:126；e.分别为SEQ ID NO:133和SEQ ID NO:134；f.分别为SEQ ID NO:141和SEQ ID NO:142；g.分别为SEQ ID NO:149和SEQ ID NO:150；和h.分别为SEQ ID NO:157和SEQ ID NO:158。30.根据前述权利要求中任一项所述的结合剂，其中所述第二结合结构域包含重链可变区(VH)和轻链可变区，所述重链和轻链可变区分别包含hCDR1、hCDR1和hCDR3，以及lCDR1、lCDR2和lCDR3，所述CDR具有选自以下组成的组所示的氨基酸序列组的氨基酸序列：a.分别为SEQ ID NO:103至SEQ ID NO:108；b.分别为SEQ ID NO:111至SEQ ID NO:116；c.分别为SEQ ID NO:119至SEQ ID NO:124；d.分别为SEQ ID NO:127至SEQ ID NO:132；e.分别为SEQ ID NO:135至SEQ ID NO:140；f.分别为SEQ ID NO:143至SEQ ID NO:148；g.分别为SEQ ID NO:151至SEQ ID NO:156；和h.分别为SEQ ID NO:159至SEQ ID NO:164。31.根据前述权利要求中任一项所述的结合剂，其中所述结合剂不包含Fc结构域。32.根据权利要求1至30中任一项所述的结合剂，其还包含Fc结构域。33.根据权利要求32所述的结合剂，其中所述Fc结构域选自IgG1和IgG4 Fc结构域。34.根据权利要求33所述的结合剂，其中所述结合剂基本上不具有效应子功能活性。35.根据权利要求32至34中任一项所述的结合剂，其中所述Fc结构域是IgG1 Fc结构域。36.根据权利要求32至35中任一项所述的结合剂，其中所述Fc结构域是IgG1 Fc无。37.根据前述权利要求中任一项所述的结合剂，其中所述结合剂是二价或四价。38.根据前述权利要求中任一项所述的结合剂，其中所述结合剂是双特异性的。39.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至38中任一项所述的结合剂和药学上可接受的载体。40.一种核酸，其编码根据权利要求1至38中任一项所述的结合剂。41.一种载体，其包含根据权利要求40所述的核酸。
42.一种细胞系，其包含根据权利要求41所述的载体。43.一种治疗自身免疫性疾病的方法，其包括以有效降低有此需要的受试者中致病性免疫细胞的数量或活性并且从而改善所述自身免疫性疾病的症状的量向所述受试者施用根据权利要求1至38中任一项所述的结合剂或根据权利要求39所述的药物组合物。44.一种抑制由致病性免疫细胞介导的免疫应答的方法，其包括将CD8+KIR+T调节性细胞(Treg)与有效活化或刺激CD8+KIR+Treg(活化的Treg)的量的根据权利要求1至38中任一项所述的结合剂或根据权利要求39所述的药物组合物接触，从而降低致病性免疫细胞的数量或活性。45.一种抑制对抗原(如自身抗原)的免疫应答的方法，其包括以有效活化或刺激CD8+KIR+Treg的量向有此需要的受试者施用根据权利要求1至38中任一项所述的结合剂或根据权利要求39所述的药物组合物，从而降低对所述抗原或自身抗原具有反应的致病性免疫细胞的数量或活性。46.根据权利要求44所述的方法，其中在体内将所述CD8+KIR+Treg与所述结合剂接触。47.根据权利要求44所述的方法，其中离体将所述CD8+KIR+Treg与所述结合剂接触。48.根据权利要求47所述的方法，其中以有效量向有此需要的受试者施用活化的CD8+KIR+Treg。49.根据权利要求43至48中任一项所述的方法，其中所述致病性免疫细胞是自身反应性CD4+T细胞、产生自身抗体的B细胞或呈递自身抗原的树突细胞。50.根据权利要求43至48中任一项所述的方法，其中所述致病性免疫细胞是呈递自身抗原的细胞。51.根据权利要求45所述的方法，其中所述受试者中自身抗体的滴度降低。52.根据权利要求43至51中任一项所述的方法，其中所述受试者患有选自由自身免疫性疾病组成的组的自身免疫性疾病，所述自身免疫性疾病选自以下：乳糜泻、克隆氏病、青少年特发性关节炎、炎性肠病(IBD)、胰岛素依赖性糖尿病(IDDM或1型糖尿病)、狼疮性肾炎、重症肌无力、心肌炎、多发性硬化症(MS)、天疱疮/类天疱疮、类风湿关节炎(RA)、硬皮病/系统性硬化症、干燥综合征(SjS)、系统性红斑狼疮(SLE)和溃疡性结肠炎。53.根据权利要求52所述的方法，其中所述自身免疫性疾病选自以下：乳糜泻、克隆氏病、炎性肠病(IBD)、胰岛素依赖性糖尿病(IDDM或1型糖尿病)、狼疮性肾炎、多发性硬化症(MS)、类风湿关节炎(RA)、硬皮病/系统性硬化症、干燥综合征(SjS)、系统性红斑狼疮(SLE)和溃疡性结肠炎。54.根据权利要求43至53中任一项所述的方法，其中所述结合剂特异性结合CD8和CD8+KIR+Treg上的抑制性KIR蛋白。55.根据权利要求43至53中任一项所述的方法，其中所述结合剂特异性结合CD3和CD8+KIR+Treg上的抑制性KIR蛋白。56.根据权利要求43至53中任一项所述的方法，其中所述结合剂特异性结合CD5和CD8+KIR+Treg上的抑制性KIR蛋白。57.根据权利要求43至53中任一项所述的方法，其中所述结合剂特异性结合PD
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1和CD8+KIR+Treg上的抑制性KIR蛋白。58.根据权利要求43至53中任一项所述的方法，其中所述结合剂特异性结合ICOS和CD8
+KIR+Treg上的抑制性KIR蛋白。59.根据权利要求43至53中任一项所述的方法，其中所述结合剂特异性结合CXCR3和CD8+KIR+Treg上的抑制性KIR蛋白。60.根据权利要求43至59中任一项所述的方法，其中所述CD8+KIR+Treg是MHC I类限制性的。...
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