根瘤菌GZHC2-2菌株及制备、该菌株招募根内生细菌方法及在缓解敏感大豆涝害胁迫的应用技术

本发明专利技术涉及农业微生物技术领域，涉及一种根瘤菌GZHC2

【技术实现步骤摘要】
根瘤菌GZHC2
‑
2菌株及制备、该菌株招募根内生细菌方法及在缓解敏感大豆涝害胁迫的应用


[0001]本专利技术属于微生物
，具体公开了一种根瘤菌GZHC2
‑
2菌株及制备、该菌株招募根内生细菌方法及在缓解敏感大豆涝害胁迫的应用。

技术介绍

[0002]在自然条件下，植物经常暴露于短暂或长期的土壤涝害中，这长期以来被认为是一种主要的非生物胁迫。土壤涝害严重限制了许多植物物种的生长、发育和生存，这不仅发生在自然生态系统中，而且也发生在农业系统中。涝害是目前世界上许多国家和地区的重大自然灾害之一，世界上遭受涝害的土壤约占世界耕地面积的10％，涝害导致作物减产约20％。在一些作物生产的关键领域，如美国、中国、加拿大、巴西、法国和日本受到的影响尤为显著。我国的热带和亚热带地区因受到季风气候影响，降雨强度大且季节分布不均匀，在长江中下游及南方地区涝害发生频繁，严重影响作物产量。涝害对我国农业的发展造成了严重的影响，因此研究农作物的耐涝性对于提高涝害地区作物的产量具有重要意义。
[0003]大豆是世界上最重要的粮食和油料作物之一，也是我国的传统农产品之一。然而，长期的涝害不仅会降低大豆产量和品质，还会导致大豆的根系受损，甚至导致死亡。因此，探索更多有效的方法来帮助大豆抵抗涝害是非常必要的。

技术实现思路

[0004]为了弥补现有技术存在的不足，本专利技术的目的是根瘤菌(Rhizobiummultihospitium)接种在涝害敏感品种“冀豆17号”招募耐涝害根内生细菌(Aeromonas、Clostridium、Pseudomonas、Staphylococcus、Paenibacillus、Stenotrophomonas)抵抗涝害胁迫的应用。
[0005]一种根瘤菌GZHC2
‑
2菌株招募根际细菌的方法，所述根瘤菌（Rhizobium multihospitium）GZHC2
‑
2菌株于2023年1月4日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No.63032，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省科学院微生物研究所；S1.所述根瘤菌GZHC2
‑
2菌株在根瘤菌培养基YMA（Yeast mannitol agar）中培养；S2.所述根瘤菌GZHC2
‑
2菌株培养温度为25
‑
35℃、100
‑
150rpm/min培养72
‑
108h；S3.所述根瘤菌GZHC2
‑
2菌株接种至涝害敏感大豆品种根部；S4.对接种十天后所述涝害敏感大豆品种的根部进行收集，对所述S3中根际土壤DNA进行16S rRNA扩增子测序；S5.对S4中的根际土壤中的细菌分离培养并进行测序；S6.对S5中相对丰度显著增加根际土壤中的细菌进行筛选。
[0006]一种接种根瘤菌GZHC2
‑
2菌株招募根内生细菌的方法，通过以下步骤：
[0007]S1.所述根瘤菌GZHC2
‑
2菌株在根瘤菌培养基YMA(Yeast mannitol agar)中培养；
[0008]S2.所述根瘤菌GZHC2
‑
2菌株培养温度为25
‑
35℃、100
‑
150rpm/min培养72
‑
108h；
[0009]S3.所述根瘤菌GZHC2
‑
2菌株接种至涝害敏感大豆品种根部；
[0010]S4.对接种十天后所述涝害敏感大豆品种的根部进行收集，对S3中根部DNA进行16sRNA扩增子测序；
[0011]S5.对S4中的根内生细菌分离培养并进行测序；
[0012]S6.对S5中相对丰度显著增加根内生细菌进行筛选。
[0013]优选的，所述的根瘤菌GZHC2
‑
2菌株接种量为2
×
104‑2×
106个/株。
[0014]优选的，所述S6中相对丰度显著增加根内生细菌至少包括有Aeromonas、Clostridium、Pseudomonas、Staphylococcus、Paenibacillus、Stenotrophomonas其中的任一一种或任意组合。
[0015]一种接种根瘤菌GZHC2
‑
2菌株招募根内生细菌的方法，在缓解敏感大豆涝害胁迫适应性方面的应用。
[0016]与现有技术相比，本专利技术具有以下优点及有益效果：
[0017]本专利技术中根瘤菌(Rhizobium multihospitium)具有高效的定植能力和较强的耐涝害能力。涝害敏感大豆在涝害胁迫下在接种根瘤菌(Rhizobiummultihospitium)生长良好，显著增加了根内生细菌(Aeromonas、Clostridium、Pseudomonas、Staphylococcus、Paenibacillus、Stenotrophomonas)的丰度，经过纯化分离以上根内生细菌，其均可以显著增加涝害胁迫下大豆的根长和地上地下生物量。该根瘤菌可作为缓解大豆耐涝害的有效环境友好型菌剂，对增加大豆在华南地区涝害胁迫土壤的适应性有显著意义。
附图说明
[0018]图1为接种GZHC2
‑
1，GZHC2
‑
2，GZHC2
‑
3，GZHC2
‑
4对涝害敏感大豆的生长影响。
[0019]图2为接种GZHC2
‑
2菌株后，基于16S rRNA基因测序筛选出的根内富集的微生物物种。
[0020]图3为分离出的6个细菌菌株对大豆耐涝害的影响。
[0021]图4为混合接种6个菌株对大豆根系转录组的影响。
具体实施方式
[0022]以下结合具体实施例和附图来进一步说明本专利技术，但实施例并不对本专利技术做任何形式的限定。除非特别说明，本专利技术采用的试剂、方法和设备为本
常规试剂、方法和设备。除非特别说明，本专利技术所用试剂和材料均为市购。
[0023]本专利技术实施例所用材料与试剂：PrepMan Ultra Kits核酸萃取剂，购于美国ThermoFisher公司；基因组DNA提取试剂盒：上海生工生物有限公司。
[0024]此处需要说明的是，本申请文件中的招募一词，解释为通过接种根瘤菌GZHC2
‑
2菌株后，可对大豆根系的微生物进行富集。
[0025]实施例1根瘤菌(Rhizobium multihospitium)GZHC2
‑
2菌株分离与鉴定
[0026]1、菌株分离
[0027]根瘤菌(Rhizobium multihospitium)分离于耐涝害品种“华春2号”，分离出6株根瘤菌。将根瘤菌置于根瘤菌培养基YMA(Yeast mannitol agar本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种根瘤菌(Rhizobiummultihospitium)GZHC2
‑
2菌株，其特征在于，所述根瘤菌(Rhizobiummultihospitium)GZHC2
‑
2菌株于2023年1月4日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCCNo.63032。2.一种接种根瘤菌GZHC2
‑
2菌株招募根内生细菌的方法，其特征在于，通过以下步骤：S1.所述根瘤菌GZHC2
‑
2菌株在根瘤菌培养基YMA(Yeastmannitolagar)中培养；S2.所述根瘤菌GZHC2
‑
2菌株培养温度为25
‑
35℃、100
‑
150rpm/min培养72
‑
108h；S3.所述根瘤菌GZHC2
‑
2菌株接种至涝害敏感大豆品种根部；S4.对接种十天后所述涝害敏感大豆品种的根部进行...

【专利技术属性】
技术研发人员：连腾祥，刘昆，年海，成浪，刘琪，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：