人工设计mRNAUTR核苷酸序列及其用途制造技术

本发明专利技术涉及基因表达更为高效的mRNA UTR多核苷酸序列、其构建方法和应用。其构建方法和应用。

【技术实现步骤摘要】
NO:1
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5、7
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12、16
‑
17具有至少80％、85％、90％、95％、98％或99％序列相同性。
[0012]更优选地，所述多核苷酸的序列如SEQ ID NO:1、3、7
‑
10、12任一所示或与SEQ ID NO:1、3、7
‑
10、12具有至少80％、85％、90％、95％、98％或99％序列相同性。
[0013]最优选地，所述多核苷酸的序列如SEQ ID NO:1(73H1U)或9(36H3U)所示或与SEQ ID NO:1(73H1U)或9(36H3U)具有至少80％、85％、90％、95％、98％或99％序列相同性。
[0014]在一个或多个实施方案中，所述多核苷酸是DNA。
[0015]本专利技术的第二方面还提供第二种多核苷酸，所述多核苷酸包含：
[0016](1)5'UTR核苷酸，所述5'UTR核苷酸序列如SEQ ID NO:20所示或与其具有至少80％、85％、90％、95％、98％或99％序列相同性，和/或
[0017](2)(1)的互补序列。
[0018]在一个或多个实施方案中，所述多核苷酸是DNA。
[0019]本专利技术还提供一种核酸构建物，包含本专利技术第一方面的多核苷酸和/或本专利技术第二方面的多核苷酸；和任选的待表达基因。
[0020]在一个或多个实施方案中，所述核酸构建物是载体，例如克隆载体或表达载体。
[0021]在一个或多个实施方案中，所述核酸构建物还包含选自以下的一个或多个元件：启动子、kozak序列、Poly(A)。
[0022]在一个或多个实施方案中，所述启动子是T7启动子。
[0023]在一个或多个实施方案中，所述待表达基因是eGFP基因。
[0024]本专利技术还提供一种mRNA，在5'
‑
3'方向上包含：5'帽结构、5'UTR、开放阅读框(ORF)、3'UTR和Poly(A)，所述3'UTR的核苷酸序列如SEQ ID NO:23
‑
40任一所示或与SEQ ID NO:23
‑
40具有至少80％、85％、90％、95％、98％或99％序列相同性，和/或
[0025]所述5'UTR的核苷酸序列如SEQ ID NO:41所示或与SEQ ID NO:41具有至少80％、85％、90％、95％、98％或99％序列相同性。
[0026]在一个或多个实施方案中，所述mRNA还包括kozak序列。
[0027]在一个或多个实施方案中，所述mRNA包含至少一种修饰的或非天然存在的核苷酸。
[0028]在一个或多个实施方案中，所述修饰的或非天然存在的核苷酸为假尿苷三磷酸(Ψ)或N1
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甲基
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假尿苷三磷酸(m1Ψ)。
[0029]本专利技术还提供一种宿主细胞，包含本文任一实施方案所述的多核苷酸、核酸构建物、或mRNA。
[0030]在一个或多个实施方案中，所述宿主细胞是CHO细胞、DC细胞或T细胞。
[0031]本专利技术还提供一种药物组合物，包含本文任一实施方案所述的多核苷酸、核酸构建物、mRNA或宿主细胞，和药学上可接受的辅料。
[0032]本专利技术还提供一种提高基因表达强度、延长基因表达时间、提高mRNA启动翻译能力或维持翻译活性时长的方法，包括使携带有本专利技术第一方面的多核苷酸和/或本专利技术第二方面的多核苷酸的基因表达的步骤。
[0033]在一个或多个实施方案中，所述第一种多核苷酸位于所述基因的3'端，第二种多核苷酸位于所述基因的5'端。
[0034]在一个或多个实施方案中，所述基因是eGFP基因。
[0035]本专利技术还提供本文任一实施方案所述的多核苷酸、核酸构建物和/或宿主细胞在制备用于提高基因表达强度、延长基因表达时间、提高mRNA启动翻译能力或维持翻译活性时长的试剂中的应用。
[0036]在一个或多个实施方案中，所述第一种多核苷酸位于所述基因的3'端，第二种多核苷酸位于所述基因的5'端。
[0037]本专利技术还提供本文任一实施方案所述的多核苷酸、核酸构建物、mRNA或宿主细胞在制备用于治疗疾病的药物中的应用，所述基因的表达有助于所述治疗疾病。
[0038]本专利技术还提供本文任一实施方案所述的多核苷酸在控制基因表达中的应用。
附图说明
[0039]图1显示的是A17 eGFP mRNA转录模板质粒DNA图谱。
[0040]图2显示的是不同UTR eGFP mRNA在蛋白表达细胞CHO
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S中的不同表达水平。
[0041]图3显示的是不同UTR eGFP mRNA在免疫细胞DC2.4中的不同表达水平。
具体实施方式
[0042]应理解，在本专利技术范围中，本专利技术的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成优选的技术方案。
[0043]本文和所附权利要求书所用的单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括复数含义，除非上下文另有明确说明。同样，术语“一个”(或“一种”)、“一个或多个”和“至少一个”在本文中可互换使用。术语“包括”及其变化形式不具有限制意义，其中这些术语出现在本说明书和权利要求中。因此，术语“包括”、“包含”、和“含有”可互换使用。
[0044]本专利技术基于人工从头设计mRNA UTR序列的方法，筛选到比本领域内公知的Hba
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a1 mRNA 3'UTR更高效的核苷酸序列。
[0045]本专利技术第一方面提供第一种多核苷酸，所述多核苷酸包含：
[0046](1)3'UTR核苷酸，所述3'UTR核苷酸序列如SEQ ID NO:1
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18任一所示或与其具有至少80％、85％、90％、95％、98％或99％序列相同性的序列所示，和/或
[0047](2)(1)的互补序列。
[0048]在一个或多个实施方案中，本专利技术包含人工从头设计的3'UTR多核苷酸，构建上述3'UTR序列的方法是通过人工设计直接合成获得。
[0049]示例性的所述多核苷酸的序列如SEQ ID NO:1
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18中任一所示。
[0050]优选地，所述多核苷酸的序列如SEQ ID NO:1
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5、7
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12、16
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17任一序列所示；更优选地，所述多核苷酸的序列如SEQ ID NO:1、3、7
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10、12任一序列所示；最优选地，所述多核苷酸的序列如SEQ ID NO:1或9所示。
[0051]本专利技术还提供了一种人工从头设计5'UTR序列，与本专利技术提供的3'UTR配套使用，构建上述5'UTR序列的方法是通过人工设计直接合成获得。
[0052]本专利技术的第二方面，还提供第二种多核苷酸，所述多核苷酸包含：
[0053](本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多核苷酸，所述多核苷酸包含：(1)3'UTR核苷酸，所述3'UTR核苷酸序列如SEQ ID NO:1
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18任一所示或与其具有至少80％、85％、90％、95％、98％或99％序列相同性，和/或(2)(1)的互补序列。2.如权利要求1所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸的序列如SEQ ID NO:1
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18任一所示或与SEQ ID NO:1
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18具有至少80％、85％、90％、95％、98％或99％序列相同性，优选地，所述多核苷酸的序列如SEQ ID NO:1
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5、7
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12、16
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17任一所示或与SEQ ID NO:1
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5、7
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12、16
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17具有至少80％、85％、90％、95％、98％或99％序列相同性，更优选地，所述多核苷酸的序列如SEQ ID NO:1、3、7
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10、12任一所示或与SEQ ID NO:1、3、7
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10、12具有至少80％、85％、90％、95％、98％或99％序列相同性，最优选地，所述多核苷酸的序列如SEQ ID NO:1或9所示或与SEQ ID NO:1或9具有至少80％、85％、90％、95％、98％或99％序列相同性。3.一种多核苷酸，所述多核苷酸包含：(1)5'UTR核苷酸，所述5'UTR核苷酸序列如SEQ ID NO:20所示或与其具有至少80％、85％、90％、95％、98％或99％序列相同性，和/或(2)(1)的互补序列，优选地，所述多核苷酸如SEQ ID NO:20所示或与其具有至少80％、85％、90％、95％、98％或99％序列相同性。4.一种核酸构建物，包含：(1)任选的待表达基因，和(2)权利要求1或2所述的多核苷酸，和/或权利要求3所述的多核苷酸，所述权利要求1或2所述的多核苷酸位于所述待表达基因...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘韬，张平静，王佩，钱其军，
申请(专利权)人：浙江吉量科技有限公司上海细胞治疗集团有限公司，
类型：发明
国别省市：