一种携带VEGF外泌体检测试剂盒及应用制造技术

本申请文件中的公开内容涉及一种携带VEGF外泌体检测试剂盒制备及应用，更具体而言，涉及该试剂盒的制备方法，以及检测方法的应用。血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF），是胚胎发育、骨骼生长和生殖功能中血管生成的重要调节因子，与肿瘤、眼内新生血管疾病和其他疾病相关的病理性血管生成有关。研究表明携带VEGF的外泌体可能对早期肿瘤血管生成至关重要。外泌体可以通过激活90 kDa VEGF（VEGF90K）来诱导MDA

【技术实现步骤摘要】
一种携带VEGF外泌体检测试剂盒及应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体的为一种携带VEGF外泌体检测试剂盒制备及应用。

技术介绍

[0002]血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)，是胚胎发育、骨骼生长和生殖功能中血管生成的重要调节因子，与肿瘤、眼内新生血管疾病和其他疾病相关的病理性血管生成有关。
[0003]1939年，Ide等假设肿瘤来源的血管生长刺激因子的存在，可能为生长中的肿瘤提供新的血管供应。
[0004]1968年的实验表明肿瘤血管生成是由肿瘤细胞产生的扩散因子介导的。
[0005]1971年，Folkman提出抗血管生成可能是治疗癌症的一种有效的治疗策略。在过去的二十年中，血管内皮生长因子(VEGF)在生理和病理血管生成的调节中的关键作用已经确立。
[0006]人类VEGF
‑
A基因由7个内含子分隔开的8个外显子组成。
[0007]外显子经信号序列切割后，会产生不同的亚型(如VEGF
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种携带VEGF外泌体检测试剂盒，其特征在于可也检测携带VEGF的外泌体及方法，进一步的携带VEGF外泌体检测试剂盒包含独立的组分为：外泌体捕获工作液、携带VEGF外泌体检测工作液、阴性质控品和阳性质控品。2.如权利1中所述的外泌体捕获工作液，其特征在于通过包被磁性微球的捕获抗体制备；进一步的所述的磁性微球其特征在于超顺磁性，粒径可从50nm
‑
5μm；进一步的所述的捕获抗体其特征在于可以结合外泌体膜表面蛋白、跨膜蛋白和吸附蛋白等的哺乳动物源抗体。如权利1中所述的携带VEGF外泌体检测工作液，其特征在于通过发光物质标记VEGF抗体制备；进一步的所述的发光物质其特征在于可为化学物质激发发光、电致发光、荧光以及其聚合物；进一步的所述的VEGF抗体其特征在于可以结合VEGF蛋白的哺乳动物源抗体。如权利1中所述的阴性质控品，其特征在于其人源细胞产生的外泌体和工程化的人源的外泌体。如权利1中所述的阳性质控品，其特征在于人源细胞产生的外泌体和工程化的人源的外泌体。如权利1中所述的其特征在于可也检测携带VEGF的外泌体及方法，其特征在于通过免疫双夹心的原理检测方法，进一步的所述的免疫双夹心方法其特征在于可为酶联免疫吸附法、免疫荧光法、化学发光免疫分析法、电化学发光免疫分析法、微流控芯片免疫分析法、蛋白液相芯片法、数字酶联免疫吸附法和单分子免疫分析法等。3.如权利2中所述的进一步的所述的磁性微球其特征在于超顺磁性，粒径可从50nm
‑
5μm，其特征在于粒径可从50nm
‑
5μm其中优选的为3μm。如权利2中所述的进一步的所述的捕获抗体其特征在于可以结合外泌体膜表面蛋白、跨膜蛋白和吸附蛋白等的哺乳动物源抗体，其特征在于所述的可以结合外泌体膜表面蛋白、跨膜蛋白和吸附蛋白可为HSP60、HSP70、HSPA5、CCT2、HSP90、A33、MHC
‑
II、CD86、CD63、CD9、CD81、TSG101、HSP70、ALIX等其中优选的CD63。如权利2中所述的进一步的所述的捕获抗体其特征在于可以结合外泌体膜表面蛋白、跨膜蛋白和吸附蛋白等的哺乳动物源抗体，其特征在于所述的哺乳动物源抗体，可为基因重组人源化类、猴类、啮齿类和反刍类等其中优选的为基因重组人源化的，进一步优选的其特征为CD63单重链重组人源化抗体，通过使用CD63重组蛋白免疫动物获得重链可变区序列，并构建至表达载体，转染受体细胞获得。如权利要求2中所述的如权利1中所述的携带VEGF外泌体检测工作液，其特征在于通过发光物质标记VEGF抗体制备；进一步的所述的发光物质其特征在于可为化学物质激发发光、电致发光、荧光以及其聚合物，其特征在于其中所述的化学发光物质为吖啶酯以及其衍生物，进一步优选的为吖啶酯聚合物。如权利要求2中所述的如权利1中所述的进一步的所述的VEGF抗体其特征在于可以结合VEGF蛋白的哺乳动物源抗体，其特征在于所述的可以结合VEGF蛋白的哺乳动物源抗体中的VEGF蛋白可为VEGF提取纯化蛋白和基因重组蛋白，进一步的所述的VEGF重组蛋白可为全长、VEGF
‑
121，VEGF

【专利技术属性】
技术研发人员：刘芳朋，荣义辉，庞晓丛，王丽娟，李晓露，游波，杨景华，李军，刘莲娜，苗鸿鹰，
申请(专利权)人：曙歌诊断技术北京有限公司，
类型：发明
国别省市：