一种灵芝化学成分时空分析的检测方法技术

本发明专利技术涉及空间代谢组学分析领域，具体提供一种灵芝化学成分时空分析的检测方法。所述的方法中高分辨质谱解吸电喷雾电离源使用的喷雾溶剂为体积比为0.1

【技术实现步骤摘要】
一种灵芝化学成分时空分析的检测方法


[0001]本专利技术属于空间代谢组学分析领域，具体涉及一种灵芝化学成分时空分析的检测方法。

技术介绍

[0002]灵芝是我国传统的药食同源类大型真菌，富含多糖、三萜类、核苷类和甾醇类等生理活性物质。研究发现灵芝具有抗肿瘤、抗衰老以及免疫调节等药理作用。灵芝三萜酸，简称灵芝酸(Ganoderic acids,GAs)，属于三萜类化合物，是灵芝菌的次级代谢产物，也是主要活性成分之一。研究表明，灵芝酸在肿瘤治疗、抗氧化、抑制胆固醇合成、抑制血管紧张素转换酶活性、抑制组胺释放、抗HIV等方面具有重要的作用。从灵芝子实体和孢子中提取灵芝酸是获得灵芝酸的主要方式。在现阶段，灵芝酸的获得存在诸多问题，如灵芝孢子、子实体生长周期长，生长环境要求高以及灵芝酸含量低等。从空间角度了解灵芝酸在不同成长阶段的灵芝中的分布位置，有助于更好地利用灵芝有价值的部分，灵芝中具有生物活性的次生代谢物成分以及空间分布仍需要进一步研究。
[0003]代谢组学可对代谢物进行系统而大规模的分析，对样本中生物标志物的发现来说是一种强有力的工具。近年来，代谢组学已被应用于多个领域并取得了一定成果，包括食品科学、植物生物学、生理学、药理学、病理学、毒理学、营养学、免疫学和微生物学等。然而，一般代谢组的样品前处理会使目标代谢物的空间分布特征丢失。目前，代谢组学面临的挑战是如何通过适当的技术克服生物异质性问题，从而进一步拓展对代谢组学样品信息的认知，获得更深刻的生物学见解。
[0004]质谱成像技术是一种结合质谱分析和影像可视化的分子成像技术，通常不需要标记，对生物组织样品可进行多点检测、多维数据获取，可实现不同分子高灵敏度的同时检测，并能够直接提供目标化合物的空间分布和分子结构信息。质谱成像技术可以实现生物组织中上千代谢物的定性、定量和定位分析，结合生物信息学分析，发展为空间代谢组学方法，可从生物组织原位发现差异代谢物，并识别其生物学功能。解吸电喷雾电离质谱成像(DESI
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MSI)技术是一种大气压环境下的新型质谱成像技术，可以对样品表面化合物组成、空间分布情况及相对丰度进行快速分析，通过DESI原位质谱成像可获得标志物的位置信息。其优点在于，无需标记和基质辅助，只需要较少的前处理过程，而且其对组织的破坏性更小。
[0005]现有技术“郝宏伟,陈意琪,何姣,李娜,原成林,刘勇男,刘高强.超高效液相色谱
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电喷雾串联四级杆质谱鉴定灵芝中脂质成分[J/OL].菌物学报:1
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20.”中阐述了一种基于超高效液相色谱
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电喷雾串联四极杆法(UPLC
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ESI
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MS/MS)技术分析灵芝细胞中脂质以及游离脂肪酸成分的组成和占比。但该方法无法获取灵芝中脂质的空间分布信息。
[0006]公开号为CN110161111B的中国专利公开了一种检测动物组织中β肾上腺素受体激动剂类药物的方法。该方法步骤包括取动物组织样品、制备待测样品(包括组织冰冻切片和标准品制备)、解吸电喷雾电离质谱检测、获得成像结果。该方法仅涉及一种成分空间检测，
且灵敏度与分辨率较低，不涉及复杂成分及其分布差异分析。
[0007]目前，现有技术不能满足灵芝活性成分的合成规律与空间分布信息的获取。本专利技术采用特定样品制备及喷雾溶剂的方法检测不同生长时期灵芝的化合物空间分布，具有较高的灵敏度与分辨率，以便更好的利用灵芝的价值。

技术实现思路

[0008]为了解决上述问题，本专利技术提供了一种灵芝化学成分时空分析的检测方法。
[0009]具体地，所述的方法中高分辨质谱解吸电喷雾电离源使用的喷雾溶剂为体积比为0.1
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0.2：40
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70：20
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50：5
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15的甲酸
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甲醇
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异丙醇
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水溶液。
[0010]优选地，所述的高分辨质谱解吸电喷雾电离源使用的喷雾溶剂为体积比0.14:50:40:10的甲酸
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甲醇
‑
异丙醇
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水溶液。
[0011]具体地，所述的高分辨质谱解吸电喷雾电离源包括搭载高分辨质谱仪所搭载的DESI离子源。
[0012]具体地，样品切片干燥处理后，使用喷涂溶液喷涂；所述的喷涂溶液为甲酸
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甲酸铵
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甲醇溶液。
[0013]优选地，所述的喷涂溶液为含体积分数为含体积分数0.1％
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0.5％甲酸和5
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20mmol/L甲酸铵的甲醇溶液。
[0014]进一步优选地，所述的喷涂溶液为含体积分数为含体积分数0.1％甲酸和10mmol/L甲酸铵的甲醇溶液。
[0015]具体地，样品切片干燥处理后，使用喷涂溶液喷涂；所述的喷涂溶液为甲酸
‑
甲醇溶液。
[0016]优选地，所述的喷涂溶液为含体积分数为含体积分数0.1％甲酸的甲醇溶液。
[0017]具体地，所述的方法中样品冷冻处理为
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80℃冷冻5
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18小时。
[0018]优选地，所述的方法中样品冷冻处理为
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80℃冷冻10
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14小时。
[0019]进一步优选地，所述的方法中样品冷冻处理为
‑
80℃冷冻12小时。
[0020]具体地，所述的方法包括以下步骤：
[0021]S1、样品预处理：取灵芝样品，冷冻处理；
[0022]S2、样品制备：将步骤S1处理后的样品切片，避光干燥处理后，表面使用喷涂溶液进行喷涂，再避光静置；
[0023]S3、使用搭载DESI离子源的高分辨质谱检测器采用全扫描模式，分别在正、负离子检测模式下进行数据采集；
[0024]S4、使用HDImaging v1.5软件进行高分辨率成像，使用线性平滑法对图像进行重建。
[0025]具体地，所述的S4还包括读取待测化合物在成像上的总响应值。
[0026]具体地，
[0027]优选地，所述的S2中切片厚度为100μm
‑
2mm。
[0028]进一步优选地，所述的切片厚度为0.5mm。
[0029]优选地，所述的S2中避光干燥处理为放入真空干燥器避光干燥1
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4小时。
[0030]优选地，所述的S2中高分辨质谱解吸电喷雾电离源的喷雾溶剂流速为2μL/min，离
子源温度150℃，气体压力0.4Mpa。
[0031]本专利技术的有益效果：
[0032]本专利技术涉及空间代谢组学分析领域，具体提供一种灵芝化学成分时空分析的检测方法。所述的方法中高分辨质谱检测器使用的喷雾溶剂为体积比为0.1
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0.2：40
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70：20
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种灵芝化学成分时空分析的检测方法，其特征在于，所述的方法中高分辨质谱解吸电喷雾电离源使用的喷雾溶剂为体积比为0.1
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0.2：40
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70：20
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50：5
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15的甲酸
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甲醇
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异丙醇
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水溶液。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的高分辨质谱解吸电喷雾电离源使用的喷雾溶剂为体积比0.14:50:40:10的甲酸
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甲醇
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异丙醇
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水溶液。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，样品切片干燥处理后，使用喷涂溶液喷涂；所述的喷涂溶液为甲酸
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甲酸铵
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甲醇溶液。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，样品切片干燥处理后，使用喷涂溶液喷涂；所述的喷涂溶液为甲酸
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甲醇溶液。5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的喷涂溶液为含体积分数为含体积分数0.1％甲酸和5
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20mmol/L甲酸铵的甲醇溶液。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的喷涂溶液为含体积分数为含体积分数含0.1％甲酸和1...

【专利技术属性】
技术研发人员：李振皓，张国亮，杨继鸿，徐靖，王瑛，李明焱，
申请(专利权)人：浙江寿仙谷医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：