一种天伦兜兰的种子组织培养繁殖方法及培养基技术

本发明专利技术公开了一种天伦兜兰的种子组织培养繁殖方法及培养基

【技术实现步骤摘要】
一种天伦兜兰的种子组织培养繁殖方法及培养基


[0001]本专利技术涉及植物组织培养
，具体涉及一种天伦兜兰无菌播种萌发的组织培养快速繁殖方法及培养基。

技术介绍

[0002]天伦兜兰[Paphiopedilum tranlienianum O.Gruss&Perner]别名陈莲兜兰，为兰科(Orchidaceae)兜兰属多年生植物，在我国仅分布于云南东南部的麻栗坡县，生长于石灰岩地区灌木林下的岩壁上或岩石凹槽中，分布地域十分狭窄，生境特殊。目前，天伦兜兰为我国I级重点保护植物，同时也被《全国极小种群野生植物拯救保护工程规划(2011
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2015年)》收录，列为首批急需优先抢救的国家重点保护濒危植物之一。
[0003]天伦兜兰花形独特，向前覆盖的中萼片白色非常明显，基部略有绿色斑纹；花瓣平展呈波浪状，具有白色的边纹和紫褐色唇囊形成明显对比，整体花色靓丽迷人，是开发高档花卉和培育花卉新品种难得的好材料，具有十分重要的科研价值和经济价值。
[0004]对极小种群野生植物天伦兜兰进行种苗繁育，是实现对其资源保护和可持续利用的前提。目前，兜兰属植物人工繁殖多采用无菌播种的方法，通常是在人工营养培养基中加入适宜浓度的植物生长调节剂以及添加物等，可有效促进种子的萌发，然后结合继代增殖、壮苗和生根培养等组织培养技术繁殖获得再生植株。尽管目前已攻克了数十种兜兰属植物的无菌播种快繁技术，但兜兰属仍然是兰科植物中繁殖最困难的属之一，且兜兰属不同种类或类型的无菌播种繁殖技术并不相同，种子萌发、增殖扩繁等技术方法均需进一步的试验和研究。天伦兜兰自然生长条件下极少结实，但人工授粉能够获得饱满蒴果，且每个蒴果通常可含数万粒种子，因此采用种子大规模繁殖种苗具有诱人的前景。
[0005]极小种群野生植物大都分布范围狭窄、个体数量稀少且自然更新困难，面临随时灭绝的风险，已成为当前中国生物多样性保护的一个热点方向。近年来，为拯救保护我国最受威胁的植物种类，我国已经启动实施了若干国家、省级保护行动和保护研究项目。7种兜兰属极小种群野生植物中，海伦兜兰、白花兜兰等已有学者通过无菌播种和组织培养方式实现资源再生，解决了种苗繁殖技术问题，并为回归自然试验和园艺生产提供了大量的材料，但唯独天伦兜兰尚未见繁殖技术研究的报道。

技术实现思路

[0006]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种天伦兜兰的种子组织培养繁殖方法及培养基。本专利技术提供的方法授粉结实率高、繁殖速度快、种苗品质好，可用于天伦兜兰的规模化种苗繁殖，促进资源保护和可持续利用。
[0007]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0008]本专利技术提供了一种天伦兜兰的种子组织培养繁殖方法，包括以下步骤：
[0009]采收成熟度150～210DAP的天伦兜兰蒴果，经表面消毒后将内部种子接种于萌发培养基上，萌发培养得到原球茎及芽苗；
[0010]所述萌发培养基为：1/2～1/4MS+6
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苄基腺嘌呤1.5～3.5mg/L+萘乙酸0.1～0.5mg/L+香蕉30～50g/L+活性炭0.5～1.5g/L+蔗糖20～30g/L+琼脂3.0～4.0g/L，pH值为5.4～6.2；
[0011]将芽苗接种于壮苗与生根培养基上，培养获得完整植株；
[0012]所述壮苗与生根培养基为：1/2MS+萘乙酸0.2～1.0mg/L+香蕉50～100g/L+蛋白胨1.0～2.0g/L+蔗糖20～30g/L+琼脂3.0～4.0g/L，pH值为5.4～6.2。
[0013]优选的，在天伦兜兰原生居群中，选择盛花期的开花株进行人工授粉获得蒴果；进一步优选的，盛花期为天伦兜兰花朵开放的第5～15d。
[0014]进一步优选的，所述人工授粉为异花授粉，是以不同开花株为父母亲本，用洁净牙签将父本花朵花粉涂抹在母本花朵柱头凹槽内，人工授粉选择在晴朗天气上午的8～10点进行。
[0015]优选的，所述表面消毒具体为：先将蒴果在自来水下用软毛刷刷洗掉表面的灰尘和杂物，用体积分数70～80％的酒精浸泡60～90s，无菌水漂洗1次，再用有效氯含量为2～3％的次氯酸钠溶液浸泡15～20min，无菌水漂洗4～5次。
[0016]优选的，所述萌发培养为一步培养，包括种子萌发阶段、原球茎形成和分化阶段。所述种子萌发培养使用的光环境为用黑色遮光布进行遮光培养，遮光率为80～100％；原球茎形成和分化培养使用的光环境为弱散射光照培养，光照强度为500～1000lx，光照时间为10～16h/d；培养温度为23～27℃，环境湿度为60～70％
[0017]优选的，所述萌发培养后还包括愈伤组织或类原球茎的诱导、继代增殖与分化培养的步骤。
[0018]所述愈伤组织或类原球茎的诱导具体为：将芽苗接种到诱导培养基中，培养获得愈伤组织或类原球茎；
[0019]优选的，接种时还需要对芽苗进行修剪处理，包括剪掉叶片和根系，切成一个带顶芽和茎基的芽段；
[0020]所述诱导培养基优选为：1/2MS+6
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苄基腺嘌呤0.5～1.0mg/L+2,4
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二氯苯氧乙酸0.5～2.5mg/L+香蕉10～30g/L+蔗糖20～30g/L+琼脂3.0～4.0g/L，pH值为5.4～6.2；
[0021]所述愈伤组织或类原球茎的继代增殖具体为：将愈伤组织或类原球茎接种到继代增殖培养基中，培养得到大量愈伤组织或类原球茎；
[0022]所述继代增殖培养基优选为：1/2MS+6
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苄基腺嘌呤1.0～4.0mg/L+吲哚丁酸0.1～0.3mg/L+香蕉10～30g/L+蔗糖20～30g/L，pH值为5.4～6.2；
[0023]优选的，所述继代增殖培养为液体振荡培养，使用的是液体培养基，置于转速50～110r/min的摇床上振荡培养。
[0024]所述愈伤组织或类原球茎的分化具体为：将愈伤组织或类原球茎接种到分化培养基上，培养获得芽苗；
[0025]所述分化培养基优选为：1/2MS+6
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苄基腺嘌呤1.0～3.0mg/L+吲哚丁酸0.1～0.5mg/L+椰汁80～150mL/L+硝酸银0.5～1.0mg/L+蔗糖20～30g/L+琼脂3.0～4.0g/L，pH值为5.4～6.2；
[0026]优选的，所述愈伤组织或类原球茎的诱导、继代增殖与分化培养使用的光环境为弱散射光照培养，光照强度为500～1000lx，光照时间为10～16h/d；培养温度为23～27℃，
环境湿度为60～70％。
[0027]优选的，所述壮苗与生根培养使用的光照强度为1500～3000lx，光照时间为10～16h/d；温度为23～27℃，环境湿度为60～70％。
[0028]将完整植株进行炼苗，出瓶移栽得到天伦兜兰种苗。
[0029]优选的，所述炼苗移栽季节是在每年的3～5月或10～11月，炼苗场所为设施大棚内本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种天伦兜兰的种子组织培养繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：采收成熟度150～210DAP的天伦兜兰蒴果，经表面消毒后将内部种子依次进行萌发培养和壮苗与生根培养，获得完整植株；所述萌发培养基为：1/2～1/4MS+6
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苄基腺嘌呤1.5～3.5mg/L+萘乙酸0.1～0.5mg/L+香蕉30～50g/L+活性炭0.5～1.5g/L+蔗糖20～30g/L+琼脂3.0～4.0g/L，pH值为5.4～6.2；所述壮苗与生根培养基为：1/2MS+萘乙酸0.2～1.0mg/L+香蕉50～100g/L+蛋白胨1.0～2.0g/L+蔗糖20～30g/L+琼脂3.0～4.0g/L，pH值为5.4～6.2。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在天伦兜兰花朵开放的第5～15d，在晴朗天气上午的8～10点进行人工异花授粉获得蒴果。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述表面消毒具体为：清洗掉蒴果表面的灰尘和杂物，然后用体积分数70～80％的酒精浸泡60～90s，无菌水漂洗1次，再用有效氯含量为2～3％的次氯酸钠溶液浸泡15～20min，无菌水漂洗4～5次。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述萌发培养为一步培养，包括种子萌发阶段以及原球茎形成和分化阶段；所述种子萌发阶段采用遮光培养，遮光率为80～100％；所述原球茎形成和分化阶段采用弱散射光照培养，光照强度为500～1000lx，光照时间为10～16h/d；所述壮苗与生根培养的光照强度为1500～3000lx，光照时间为10～16h/d。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述萌发培养后还包括愈伤组织或类原球茎的诱导、继代增殖与分化培养的步骤：所述诱导培养基为：1/2MS+6
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苄基腺嘌呤0.5～1.0mg/L+2,4
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二氯苯氧乙酸0.5～2.5mg/L+香蕉10～30g/L+蔗糖20～30g/L+琼脂3.0～4.0g/L，pH值为5.4～6.2；所述继代增殖培养基为：1/2MS+6
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苄基腺嘌呤1.0～4.0mg/L+吲哚丁酸0.1～0.3mg/L+香蕉10～30g/L+蔗糖20～30g/L，pH值为5.4～6.2；所述分化培养基为：1/2MS...

【专利技术属性】
技术研发人员：付传明，黄宁珍，冼康华，何金祥，刘宝骏，苏江，
申请(专利权)人：广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所，
类型：发明
国别省市：